水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留檢測(cè)技術(shù)分析

蔣翠紅

摘 要 由于孔雀石綠與隱性孔雀石綠具有巨大的危害性，因此，我國(guó)將其納入水產(chǎn)養(yǎng)殖的禁用藥物。但由于我國(guó)部分水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)戶仍然在使用孔雀石綠，所以快速、準(zhǔn)確檢測(cè)水產(chǎn)品中的孔雀石綠殘留對(duì)于保障人民健康與安全有著重要的作用?；诖?，針對(duì)水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行探析。

關(guān)鍵詞 水產(chǎn)品；孔雀石綠；殘留檢測(cè)

中圖分類(lèi)號(hào)：F592.7 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號(hào)：1673-890X（2015）24--02

孔雀石綠是一種能夠?qū)θ梭w產(chǎn)生傷害，甚至致癌的物質(zhì)。其具有高毒性、高殘留以及致癌性等特征。當(dāng)生物體感染這種物質(zhì)后，會(huì)迅速吸收并且在體內(nèi)形成危害更大的隱性孔雀石綠，因此，對(duì)水產(chǎn)品中的孔雀石綠檢測(cè)工作十分重要。

1 孔雀石綠的性質(zhì)

孔雀石綠（Malachite green，MG），是一種有金屬光澤的深綠色結(jié)晶狀固體，易溶于水、甲醇、乙醇中，水溶液為藍(lán)綠色，其化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

圖1 孔雀石綠的結(jié)構(gòu)式

孔雀石綠在環(huán)境中存放會(huì)產(chǎn)生隱性孔雀石綠。這種化合物質(zhì)具有高強(qiáng)度的毒性，且殘留水平較高，毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高過(guò)母體的化合物。經(jīng)過(guò)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，隱性孔雀石綠致使各項(xiàng)生化指標(biāo)的改變明顯高于孔雀石綠?？兹甘G與隱性孔雀石綠的毒性均與其三苯甲烷類(lèi)結(jié)構(gòu)有密切聯(lián)系?？兹甘G的代謝產(chǎn)物衍生物以及其他初級(jí)、次級(jí)代謝產(chǎn)物均具有和致癌芳香胺類(lèi)似的結(jié)構(gòu)。科學(xué)已經(jīng)證明，這種化合物的分子進(jìn)入到人體后會(huì)經(jīng)過(guò)細(xì)胞膜，達(dá)到細(xì)胞核中的DNA，破壞DNA引發(fā)細(xì)胞癌變[1]。

2 孔雀石綠的毒性危害

孔雀石綠在使用的時(shí)候一般都是使用一定濃度的藥浴或養(yǎng)殖塘潑灑的方法，池塘中潑灑孔雀石綠不僅會(huì)對(duì)水體造成污染，還會(huì)殺死水體中的浮游生物，嚴(yán)重影響魚(yú)類(lèi)的健康生長(zhǎng)?？兹甘G與隱性孔雀石綠都會(huì)導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)的消化道、魚(yú)鰓、皮膚輕度炎癥，阻礙腸道酶、胰蛋白酶的作用[2]?？兹甘G與隱性在孔雀石綠在水體中會(huì)分解出大量的鋅元素，使水生動(dòng)物中毒。同時(shí)，會(huì)導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)血清中鈣元素與蛋白質(zhì)的含量，嚴(yán)重影響魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)。人體獲取孔雀石綠的途徑主要是使用含有孔雀石綠的魚(yú)類(lèi)、蝦類(lèi)等水產(chǎn)品，在其低濃度的水平下孔雀石綠對(duì)有孕生物十分敏感，會(huì)導(dǎo)致胎兒畸形。隨著人們大量攝入水產(chǎn)品，水產(chǎn)品中殘留的孔雀石綠會(huì)隨著食物鏈進(jìn)入人體體內(nèi)，在體內(nèi)積存，以危害人類(lèi)健康[3]。

3 水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留檢測(cè)技術(shù)

3.1 高效液相色譜法

3.1.1 高效液相色譜-紫外可見(jiàn)光檢測(cè)法

在初期檢測(cè)孔雀石綠均為使用PbO2填充的衍生柱來(lái)對(duì)孔雀石綠以及隱性孔雀石綠進(jìn)行檢測(cè)。所檢測(cè)的基本原理為隱性孔雀石綠與孔雀石綠的保留時(shí)間不同，隱性孔雀石綠從分析柱脫離后再經(jīng)過(guò)衍生柱，在PbO2的作用下氧化為孔雀石綠，這一通過(guò)紫外線檢測(cè)器能夠同時(shí)對(duì)孔雀石綠與隱性孔雀石綠進(jìn)行檢測(cè)。但由于當(dāng)前PbO2氧化柱填充技術(shù)還不夠成熟，質(zhì)量有待提升，在使用時(shí)間變長(zhǎng)的情況下會(huì)導(dǎo)致氧化效率失準(zhǔn)[4]。SC/T3021-2004中高效液相色譜-紫外檢測(cè)器、柱后氧化法的提取效率教導(dǎo)，最低檢出限2 μg/kg，檢測(cè)需要較多的時(shí)間，并且需要使用大量試劑。因此，正相色譜分離、紫外檢測(cè)器測(cè)定的HPLC法已經(jīng)逐漸被反相色譜分離與熒光檢測(cè)器測(cè)定的HPLC法所取代。

3.1.2 高效液相色譜-熒光檢測(cè)法

熒光檢測(cè)器的反相HPLC法已成了檢測(cè)孔雀石綠主要的監(jiān)測(cè)方法。反相HPLC能夠短時(shí)間內(nèi)準(zhǔn)確的對(duì)孔雀石綠進(jìn)行檢測(cè)，在該實(shí)驗(yàn)中首先將孔雀石綠還原為隱性孔雀石綠，由于隱性孔雀石綠可以發(fā)出熒光，因此可以利用這一性質(zhì)來(lái)進(jìn)行測(cè)定。這種檢測(cè)方法的靈敏度較高，但無(wú)法確定孔雀石綠與隱性孔雀石綠的含量，而是以隱性孔雀石綠的總含量來(lái)替代孔雀石綠與隱性的殘留量。相關(guān)檢測(cè)孔雀石綠與隱性孔雀石綠的報(bào)道，在孔雀石綠與隱性孔雀石綠對(duì)應(yīng)的最大吸收波長(zhǎng)為620 mm與260 mm處對(duì)其兩者的含量進(jìn)行了檢測(cè)，不需要氧化柱輔助[5]?？兹甘G與隱性孔雀石綠的回收率達(dá)到84%～88%以及88%～94%，檢出限為1 μg/kg以及2μg/kg.

3.1.3 超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

在對(duì)水產(chǎn)品中的孔雀石綠檢測(cè)愈加嚴(yán)格的情況下，超高液相色譜應(yīng)運(yùn)而生。超高液相色譜能夠彌補(bǔ)傳統(tǒng)高效液相色譜的缺陷，更短的時(shí)間、更高的質(zhì)量來(lái)完成高效液相色譜的監(jiān)測(cè)工作，給用戶節(jié)省寶貴的時(shí)間。

3.2 免疫學(xué)檢測(cè)法

酶聯(lián)免疫法（ELISA），該方法的基本原理是將酶

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分子與抗體或抗抗體分子實(shí)現(xiàn)共價(jià)結(jié)合，結(jié)合產(chǎn)物不會(huì)導(dǎo)致抗體的免疫學(xué)特征改變，也不會(huì)導(dǎo)致酶生物活性發(fā)生變化。ELISA不僅僅特異，而且十分敏感。ELISA檢測(cè)采用的是間接競(jìng)爭(zhēng)法，使用酶聯(lián)免疫試劑盒來(lái)檢測(cè)水產(chǎn)品中的孔雀石綠的特點(diǎn)為檢測(cè)速度快，一般2～3 h就能夠完成檢測(cè)。具有較高的靈敏度，魚(yú)蝦中檢測(cè)靈敏度高達(dá)0.01 μg/kg。這種方式十分適合大量樣品篩選。雖然ELISA發(fā)的抗原與抗體結(jié)合有較強(qiáng)的選擇性，但是由于水產(chǎn)品的種類(lèi)十分多樣，因此，使用ELISA檢測(cè)出的陽(yáng)性樣品還要使用其他方法來(lái)進(jìn)行再次確定，并且檢測(cè)出總量。因此，當(dāng)前還酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)孔雀石綠還缺乏相應(yīng)的數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，并且使用ELISA檢測(cè)出來(lái)的結(jié)果還不具有法律效應(yīng)。

4 結(jié)語(yǔ)

快速、準(zhǔn)確檢測(cè)水產(chǎn)品中的孔雀石綠殘留對(duì)于保障人民健康與安全有著重要的作用。然而由于孔雀石綠與隱性孔雀石綠的活性十分強(qiáng)烈，前期處理過(guò)程十分復(fù)雜，有待進(jìn)行簡(jiǎn)化并且提升回收率。同時(shí)，孔雀石綠與隱性孔雀石綠最大的吸收波長(zhǎng)分別位于可見(jiàn)光范圍內(nèi)以及紫外范圍內(nèi)，因此，這給其兩者同時(shí)的檢測(cè)帶來(lái)了一定的難度。當(dāng)前，最為合適的檢測(cè)方式為高效液相色譜法或液質(zhì)聯(lián)用法。

參考文獻(xiàn)

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[2]羅曉琴，付軍權(quán)，崔廷婷.水產(chǎn)品中孔雀石綠·結(jié)晶紫及其代謝物殘留快速檢測(cè)試紙條的研制[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013（11）：5040-5043.

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（責(zé)任編輯：趙中正）