胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中鋅指蛋白　139與腫瘤細(xì)胞凋亡和生存素及　B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2的關(guān)系及意義研究

李　勇，王力利，王銀潔，范立僑，趙　群，檀碧波，劉　羽，李兆星

胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中鋅指蛋白139與腫瘤細(xì)胞凋亡和生存素及B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2的
關(guān)系及意義研究

李勇，王力利，王銀潔，范立僑，趙群，檀碧波，劉羽，李兆星

目的 探討胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中鋅指蛋白139（ZNF139）與腫瘤細(xì)胞凋亡、生存素（Survivin）、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）的關(guān)系及意義。方法 選取2012年1—6月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外三科行手術(shù)切除的35例進(jìn)展期胃癌患者為研究對(duì)象，收集患者胃癌組織及相應(yīng)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織，采用DNA原位末端標(biāo)記（TUNEL）法檢測(cè)細(xì)胞凋亡指數(shù) （AI），反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平，蛋白印跡法（Western blotting）檢測(cè)ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 胃癌原發(fā)灶A(yù)I（10.8±4.7）高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的（8.7±3.0）（t=-2.176，P=0.039）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平均高于胃癌原發(fā)灶 （P＜0.05）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白表達(dá)水平均高于胃癌原發(fā)灶 （P＜0.05）。胃癌原發(fā)灶Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)水平與AI呈負(fù)相關(guān)（r=-0.517，P=0.001）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶 ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平均與AI呈負(fù)相關(guān)（r=-0.346、-0.467、-0.511，P= 0.042、0.005、0.002）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與胃癌原發(fā)灶Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.791，P＜0.001）。在胃癌原發(fā)灶中，ZNF139 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平呈正相關(guān) （r= 0.482，P=0.003）。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，ZNF139 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與 Survivin、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平均呈正相關(guān) （r=0.436、0.452，P=0.009、0.006）；Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)水平與 Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平呈正相關(guān)（r =0.465，P=0.005）。結(jié)論 胃癌腫瘤細(xì)胞在轉(zhuǎn)移過程中抗凋亡能力增強(qiáng)，這可能與ZNF139對(duì)部分凋亡相關(guān)基因（Survivin、Bcl-2）的調(diào)控有關(guān)，但這種調(diào)控關(guān)系在胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中并不相同。

胃腫瘤；淋巴結(jié)；鋅指蛋白139；細(xì)胞凋亡

李勇，王力利，王銀潔，等.胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中鋅指蛋白139與腫瘤細(xì)胞凋亡和生存素及B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2的關(guān)系及意義研究 ［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2015，18（3）：250-254.［www.chinagp.net］

Li Y，Wang LL，Wang YJ，et al.Relationship between ZNF139 and tumor cells apoptosis，survivin，Bcl-2 in gastric cancer primary lesion and metastatic lymph nodes and its significance［J］.Chinese General Practice，2015，18（3）：250-254.

本研究要點(diǎn)：

（1）發(fā)現(xiàn)ZNF139對(duì)胃癌腫瘤細(xì)胞凋亡具有調(diào)控作用；

（2）發(fā)現(xiàn)ZNF139隨腫瘤轉(zhuǎn)移而表達(dá)增強(qiáng)，可能是導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展的因素之一；

（3）ZNF139可能通過調(diào)控與凋亡相關(guān)的Survivin、Bcl-2而發(fā)揮作用，但這種調(diào)控關(guān)系在胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中并不相同。

研究表明，胃癌的進(jìn)展與腫瘤凋亡細(xì)胞數(shù)目減少有關(guān)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡可能延緩胃癌轉(zhuǎn)移［1］。但由于存在腫瘤異質(zhì)性，轉(zhuǎn)移灶腫瘤細(xì)胞常與原發(fā)灶腫瘤細(xì)胞在分子表達(dá)水平及調(diào)控方面存在很大差異［2］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，鋅指蛋白139（ZNF139）在胃癌中表達(dá)水平增高，且與腫瘤細(xì)胞的侵襲、耐藥有關(guān)［3-5］。但ZNF139在胃癌原發(fā)灶、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶表達(dá)水平與胃癌細(xì)胞凋亡的關(guān)系如何報(bào)道很少。故本研究檢測(cè)了進(jìn)展期胃癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中ZNF139的表達(dá)情況、不同組織腫瘤細(xì)胞凋亡指數(shù) （apoptosis index，AI）和與腫瘤細(xì)胞凋亡關(guān)系密切的基因〔生存素（Survivin）、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）〕的表達(dá)情況，并進(jìn)一步分析了ZNF139與這些指標(biāo)的關(guān)系，為探討ZNF139通過凋亡調(diào)節(jié)途徑影響胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)制提供依據(jù)。

1　資料與方法

1.1納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）進(jìn)展期胃癌患者；（2）患者術(shù)前均未接受任何抗腫瘤治療，術(shù)后TNM分期為ⅡB～ⅢC期，均無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤以及術(shù)前接受放療和化療的患者。

1.2臨床資料 選取2012年1—6月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外三科行手術(shù)切除的35例進(jìn)展期胃癌患者為研究對(duì)象，其中男22例，女13例；年齡38～72歲，中位年齡61歲。收集患者胃癌組織及相應(yīng)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織，胃癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織均一式3份，2份于-80℃保存，1份常規(guī)送病理。所有患者病理證實(shí)為胃癌，且均為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性。

1.3主要試劑 Trizol Reagent（美國(guó)Invitrogen公司），反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）試劑盒（美國(guó)Fermentas公司），DNA原位末端標(biāo)記 （TUNEL）試劑盒（碧云天生物技術(shù)有限公司），所有聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）引物由北京三博遠(yuǎn)志生物公司合成。所有一抗購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，二抗購(gòu)自福建邁新公司。

1.4研究方法

1.4.1TUNEL法檢測(cè)AI 取1份組織標(biāo)本制備胃癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶4 μm石蠟切片。采用TUNEL試劑盒檢測(cè)AI。光鏡下隨機(jī)觀察10個(gè)高倍鏡視野（×400），計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性凋亡細(xì)胞數(shù)，其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)百分比為AI。

1.4.2RT-PCR法檢測(cè) ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平 采用 Trizol Reagent，按照說明書提取另1份組織標(biāo)本中的RNA，通過紫外分光光度計(jì)定量總RNA，用于反轉(zhuǎn)錄。通過RT-PCR試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄cDNA，用甘油醛-3-磷酸脫氫酶（Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）作為內(nèi)參照進(jìn)行PCR。ZNF139引物序列：上游5′-GCACAGGAGAAGGATGGTATCG-3′，下 游5′-TGTTTGAAGTGGGACTGGGTG-3′；反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min；循環(huán)參數(shù)：95℃ 30 s，55℃ 1 min，72℃1 min，共循環(huán)30次；最后72℃延伸5 min，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度497bp。Survivin引物序列：上游5′-CACCGCATCTCTACATTCAA-3′， 下游5′ -CACTTTCTTCGCAGTTTCCT-3′；反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min；循環(huán)參數(shù)：95℃ 1 min，58℃ 1 min，72℃90 s，共循環(huán)35次；最后72℃延伸10 min，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度345bp。Bcl-2引物序列：上游5′-TGTGAAGCAGAAGTCTGGGAA-3′，下游5′-ACAGCATGATCCTCTGTCAAG-3′；反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min；循環(huán)參數(shù)：95℃ 45 s，60℃ 45 s，72℃45 s，共循環(huán)35次；最后72℃延伸5 min，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度188bp。GAPDH引物序列：上游5′-AGAAGGCTGGGGCTCATTTG-3′，下 游5′ -AGGGGCCATCCACAGTCTTC-3′；反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min；循環(huán)參數(shù)：95℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 30 s，共循環(huán)30次；最后72℃延伸5 min，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度258 bp。將PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，用凝膠成像儀測(cè)出目的基因和GAPDH的積分光密度值（IOD），以目的基因與GAPDH的IOD比值表示檢測(cè)指標(biāo)mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。

1.4.3蛋白印跡法（Western blotting）檢測(cè)ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白表達(dá)情況 每100 mg癌組織加入1 ml細(xì)胞裂解液 （RIPA，上海索萊寶生物科技有限公司）和10 μl苯甲基磺酰氟 （PMSF），冰浴勻漿；4℃時(shí)以離心半徑6 cm，12 000 r/min離心15 min，取上清液，采用考馬斯亮藍(lán)（Bradford）法測(cè)定樣品蛋白質(zhì)的水平。按照每泳道60 μg總蛋白進(jìn)行12%聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳，將蛋白質(zhì)條帶轉(zhuǎn)移至聚偏乙烯（PVDF）膜上；5%脫脂奶粉TBST溶液 〔20 mmol/ L三羥甲基氨基甲烷（Tris），137 mmol/L氯化鈉，0.1%聚氧乙烯失水山梨醇單月桂酸酯（Tween-20）〕用于封閉和稀釋一抗-ZNF139、-Survivin、-Bcl-2受體兔抗人多克隆抗體（1∶1 000，Proteintech Group Inc），封閉1 h后，一抗（1∶2 000）4℃過夜；用TBST溶液洗膜3次，各15 min。熒光二抗（1∶10 000，LICOR Biosiences）室溫避光孵育l h，TBST溶液洗膜3次，各15 min。采用Odyssey雙色紅外激光成像系統(tǒng)進(jìn)行結(jié)果分析。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以（±s）表示，兩組比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2　結(jié)果

2.1胃癌原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶A(yù)I的比較 胃癌原發(fā)灶A(yù)I（10.8±4.7）高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的（8.7±3.0），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （t=-2.176，P=0.039，見圖1）。

2.2ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平均高于胃癌原發(fā)灶，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05，見表1、圖2）。

2.3ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白表達(dá)水平比較 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白表達(dá)水平均高于胃癌原發(fā)灶，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表2、圖3）。

圖1　胃癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果?。═UNEL染色，×400）Figure 1 Results of cell apoptosis in gastric cancer primary lesions and metastatic lymph nodes

表1　胃癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較　（±s，n=35）Table 1　Comparison of mRNA relative expression levels of ZNF139，Survivin and Bcl-2 between gastric cancer primary lesions and metastatic lymph nodes

表1　胃癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較?。ā纒，n=35）Table 1　Comparison of mRNA relative expression levels of ZNF139，Survivin and Bcl-2 between gastric cancer primary lesions and metastatic lymph nodes

注：ZNF139=鋅指蛋白139，Survivin=生存素，Bcl-2=B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2

部位0.33±0.23　0.49±0.33　0.53±0.20淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶　0.62±0.35　0.69±0.30　0.77±0.43 t值ZNF139　Survivin　Bcl-2胃癌原發(fā)灶＜0.001　0.009　0.004 4.003　2.672　2.994 P值

表2　胃癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中 ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白表達(dá)水平比較?。ā纒，n=35）Table 2 Comparison of protein expression levels of ZNF139，Survivin and Bcl-2 between gastric cancer primary lesions and metastatic lymph nodes

表2　胃癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中 ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白表達(dá)水平比較?。ā纒，n=35）Table 2 Comparison of protein expression levels of ZNF139，Survivin and Bcl-2 between gastric cancer primary lesions and metastatic lymph nodes

部位0.49±0.13　0.33±0.14　0.36±0.16淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶　0.98±0.25　0.87±0.28　0.96±0.31 t值ZNF139　Survivin　Bcl-2胃癌原發(fā)灶10.053　10.284　10.018 P值?。?.001　＜0.001?。?.001

2.4相關(guān)性分析

2.4.1ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與 AI的相關(guān)性分析 胃癌原發(fā)灶ZNF139、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平均與AI無線性相關(guān)關(guān)系（r= -0.035、0.029，P=0.842、0.867），Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)水平與AI呈負(fù)相關(guān)（r=-0.517，P= 0.001）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn) 移灶 ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平均與AI呈負(fù)相關(guān)（r=-0.346、-0.467、-0.511，P=0.042、0.005、0.002）。

2.4.2ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平相關(guān)性分析 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶ZNF139、Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)水平均與胃癌原發(fā)灶ZNF139、Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)水平無線性相關(guān)關(guān)系（r=0.228、-0.004，P= 0.188、0.982）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與胃癌原發(fā)灶Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.791，P＜0.001）。

在胃癌原發(fā)灶中，ZNF139、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)水平均無線性相關(guān)關(guān)系（r=-0.093、 -0.067，P=0.596、0.701）；ZNF139 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平呈正相關(guān) （r=0.482，P=0.003）。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，ZNF139 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與Survivin、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平均呈正相關(guān)（r=0.436、0.452，P =0.009、0.006）；Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)水平與Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.465，P=0.005）。

3　討論

在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，腫瘤細(xì)胞凋亡異常發(fā)揮的作用已引起重視。腫瘤細(xì)胞均有不同程度的凋亡抵抗及逃避凋亡調(diào)控的能力，且腫瘤細(xì)胞的這種能力可能進(jìn)一步促進(jìn)其轉(zhuǎn)移［6-7］。胃癌轉(zhuǎn)移是臨床治療的難點(diǎn)，導(dǎo)致患者預(yù)后差。本研究結(jié)果顯示，胃癌原發(fā)灶A(yù)I高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶，提示在胃癌轉(zhuǎn)移過程中腫瘤細(xì)胞凋亡抵抗能力進(jìn)一步增強(qiáng)。如能有效誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡有望從分子水平阻滯胃癌轉(zhuǎn)移，提高患者生存率，改善預(yù)后。本研究對(duì)新的具有凋亡調(diào)控作用的ZNF139在胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)其凋亡調(diào)控作用的可能機(jī)制進(jìn)行了分析。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ZNF139 mRNA在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的相對(duì)表達(dá)水平高于胃癌原發(fā)灶，并且在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，ZNF139 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與Survivin、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平均呈正相關(guān)，提示ZNF139可能通過調(diào)控與凋亡相關(guān)的Survivin、Bcl-2而發(fā)揮作用。

圖2　ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA在胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)的RT-PCR結(jié)果Figure 2 The mRNA expression of ZNF139，Survivin and Bcl-2 in gastric cancer primary lesions and metastatic lymph nodes （RT-PCR assay）

圖3　ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白在胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)的Western blotting結(jié)果Figure 3 The protein expression of ZNF139，Survivin and Bcl-2 in gastric cancer primary lesions and metastatic lymph nodes （Western blotting assay）

ZNF139作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因?qū)τ谙掠位蛴兄苯诱{(diào)控作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)ZNF139在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)增強(qiáng)，且與腫瘤細(xì)胞的侵襲和多藥耐藥性有關(guān)［3-5］，而其他研究者對(duì)ZNF139的基因調(diào)控功能的研究很少。本研究結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中ZNF139蛋白表達(dá)水平高于胃癌原發(fā)灶，提示ZNF139可能通過調(diào)控下游基因參與了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，且在轉(zhuǎn)移過程中其自身表達(dá)及調(diào)控功能也進(jìn)一步增強(qiáng)。為分析 ZNF139在胃癌原發(fā)灶、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中參與腫瘤細(xì)胞凋亡抵抗的機(jī)制，本研究進(jìn)一步檢測(cè)了腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)基因（Survivin、Bcl-2）的表達(dá)情況。Survivin是凋亡抑制蛋白（IAPs）家族中分子量最小的成員，具有很強(qiáng)的凋亡抑制功能。Survivin可通過調(diào)控天冬氨酸蛋白水解酶（cysteinyl aspartate specific proteinase，caspase） -3、caspase-7、caspase-9等凋亡核心成員，造成腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)凋亡抑制，從而引起腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移［8］。本研究發(fā)現(xiàn)，Survivin mRNA在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的相對(duì)表達(dá)水平高于胃癌原發(fā)灶，提示Survivin在轉(zhuǎn)移過程中的變化可能是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡抵抗增強(qiáng)的原因之一。Bcl-2是細(xì)胞凋亡線粒體途徑中的重要成員，與Bax形成二聚體，這二者的比例對(duì)細(xì)胞凋亡起調(diào)控作用。Bcl-2在腫瘤細(xì)胞中常過量表達(dá)，可使細(xì)胞凋亡平衡失調(diào)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移［9］。本研究顯示，Bcl-2 mRNA在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的相對(duì)表達(dá)水平高于胃癌原發(fā)灶，且呈正相關(guān)，與本課題組前期研究結(jié)果一致［3-5］。且在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與AI呈負(fù)相關(guān)，Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)水平與Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平呈正相關(guān)，提示Bcl-2可能與Survivin存在協(xié)同抑制細(xì)胞凋亡的作用。

本研究還顯示，在胃癌原發(fā)灶中，ZNF139 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平呈正相關(guān)；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，ZNF139 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與Survivin、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平均呈正相關(guān)。提示ZNF139可能通過調(diào)控凋亡抑制蛋白的表達(dá)，影響腫瘤細(xì)胞凋亡通路的調(diào)控，進(jìn)而參與胃癌的發(fā)生進(jìn)展及轉(zhuǎn)移等過程，但其在胃癌不同組織、腫瘤不同階段中的調(diào)控機(jī)制可能不同。

本研究?jī)H限于臨床標(biāo)本檢測(cè)和相關(guān)分析，其具體機(jī)制還應(yīng)當(dāng)進(jìn)行深入的體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)ZNF139作用的分子機(jī)制。當(dāng)條件成熟時(shí)還應(yīng)進(jìn)行臨床研究，為胃癌的治療做出實(shí)際貢獻(xiàn)。

綜上所述，胃癌腫瘤細(xì)胞在胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中AI不同，相關(guān)凋亡基因表達(dá)也有差異。ZNF139可能通過調(diào)控Survivin、Bcl-2等凋亡相關(guān)基因的表達(dá)參與腫瘤細(xì)胞的凋亡抵抗及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程，但ZNF139在胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中對(duì)下游凋亡基因調(diào)控的功能可能并不相同。

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（本文編輯：崔麗紅）

Relationship between ZNF139 and Tumor Cells Apoptosis，Survivin，Bcl-2 in Gastric Cancer Primary Lesion and Metastatic Lymph Nodes and Its Significance

LI Yong，WANG Li-li，WANG Yin-jie，et al.The Third Department of Surgery，the Fourth Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050011，China

Objective To investigate the relationship between ZNF139 and tumor cells apoptosis，Survivin，B-cell lymphoma 2（Bcl-2）in gastric cancer primary lesions and metastatic lymph nodes and its significance.Methods 35 cases with advanced gastric cancer who underwent surgery in the Third Department of Surgery，the Fourth Hospital of Hebei Medical University from January to June 2012，were selected as study subjects，gastric cancer tissues and the corresponding metastatic lymph nodes were collected.Apoptosis index（AI）was tested with TUNEL assay.The mRNA relative expression levels of ZNF139，Survivin and Bcl-2 were tested by RT-PCR，the protein expression levels of ZNF139，Survivin and Bcl-2 were tested with Western blotting assay.Results AI of gastric cancer primary lesions was significantly higher than that in metastaticlymph nodes〔（10.8±4.7）vs.（8.7±3.0），t=-2.176，P=0.039〕.The mRNA relative expression levels of ZNF139，Survivin and Bcl-2 in metastatic lymph nodes were significantly higher than those in gastric cancer primary lesions，respectively （P＜0.05）.The protein expression levels of ZNF139，Survivin and Bcl-2 in metastatic lymph nodes were significantly higher than those in gastric cancer primary lesions，respectively（P＜0.05）.The mRNA relative expression level of Survivin was negatively correlated with AI（r=-0.517，P=0.001）；the mRNA relative expression level of ZNF139，Survivin and Bcl-2 in metastatic lymph nodes was negatively correlated with AI，respectively（r=-0.346，-0.467，-0.511；P=0.042，0.005，0.002）.The mRNA relative expression level of Bcl-2 in metastatic lymph nodes was positively correlated with mRNA relative expression level of Bcl-2 in gastric cancer primary lesions（r=0.791，P＜0.001）.In gastric cancer primary lesions，the mRNA relative expression level of ZNF139 was positively correlated with mRNA relative expression level of Bcl-2（r= 0.482，P=0.003）.In metastatic lymph nodes，the mRNA relative expression level of ZNF139 was positively correlated with mRNA relative expression level of Bcl-2 and Survivin，respectively（r=0.436，0.452，P=0.009，0.006）；mRNA relative expression level of Survivin was positively correlated with mRNA relative expression level of Bcl-2（r=0.465，P=0.005）. Conclusion The anti-apoptosis ability of gastric cancer cells is strengthened in the process of metastasis，which may be related to the role of ZNF139 in regulating some apoptosis related genes（Survivin，Bcl-2）.However，the relationships of regulation are different between gastric cancer primary lesions and metastatic lymph nodes.

Stomach neoplasms；Lymph nodes；Zinc finger protein 139；Apoptosis

R 735.2

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2015.03.004

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81072033，81372580）；河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（C2010000619）；河北省普通高校強(qiáng)勢(shì)特色學(xué)科資助項(xiàng)目（冀教高［2005］52）；河北省科技支撐項(xiàng)目（14277779D）；河北省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)重大醫(yī)學(xué)科研課題（zd2013040）

050011河北省石家莊市，河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外三科

李勇，050011河北省石家莊市，河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外三科；E-mail：li＿yong＿h(yuǎn)bth@126.com

2014-06-05；

2014-11-25）