可溶性?xún)?nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-2水平和冠狀動(dòng)脈慢血流相關(guān)性研究

張婷，劉一弘，謝峻，魏鐘海，吉文慶，宋杰，徐標(biāo)（南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院心內(nèi)科，江蘇210008）

可溶性?xún)?nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-2水平和冠狀動(dòng)脈慢血流相關(guān)性研究

張婷，劉一弘，謝峻，魏鐘海，吉文慶，宋杰，徐標(biāo)*
（南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院心內(nèi)科，江蘇210008）

目的：探討冠狀動(dòng)脈慢血流現(xiàn)象可能存在的發(fā)病機(jī)制。方法：選取冠脈慢血流者17例為觀察組，同期無(wú)明顯慢血流17例為對(duì)照組。慢血流診斷采用TIMI血流幀數(shù)評(píng)定。所有患者均于冠脈造影術(shù)前取靜脈血，行可溶性?xún)?nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-2（sVEGFR-2）測(cè)定。結(jié)果：（1）血清sVEGFR-2觀察組為0.38±0.7（ng/mL），對(duì)照組為0.28± 0.7（ng/mL），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。（2）患者血清sVEGFR-2水平與高密度脂蛋白呈顯著負(fù)相關(guān)，與3支冠脈平均血流幀數(shù)顯著正相關(guān)，結(jié)論：冠狀動(dòng)脈慢血流與循環(huán)中sVEGFR-2增高有關(guān)。

冠狀動(dòng)脈慢血流；可溶性?xún)?nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-2；微循環(huán)功能障礙；內(nèi)皮功能；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

冠狀動(dòng)脈慢血流（coronary slow flow，CSF）是1972年由Tambe等[1]首次提出，指在冠狀動(dòng)脈造影中未發(fā)現(xiàn)冠狀動(dòng)脈存在明顯病變，而遠(yuǎn)端血流灌注延遲的現(xiàn)象。此病排除嚴(yán)重的冠狀動(dòng)脈狹窄、痙攣、溶栓治療后、冠狀動(dòng)脈成型術(shù)后、冠狀動(dòng)脈內(nèi)氣體栓塞等。冠狀動(dòng)脈慢血流可引起靜息狀態(tài)下或運(yùn)動(dòng)狀態(tài)下出現(xiàn)心絞痛，甚至急性心肌梗死等。然而目前對(duì)于冠脈慢血流發(fā)病機(jī)制的研究尚無(wú)明確定論。傳統(tǒng)認(rèn)為冠脈慢血流與微血管功能失調(diào)相關(guān)，目前研究多認(rèn)為內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙也是冠脈慢血流的發(fā)病機(jī)制之一。Ebos等[2]曾在老鼠和人類(lèi)血漿及內(nèi)皮細(xì)胞的條件培養(yǎng)基中均發(fā)現(xiàn)有天然可溶性?xún)?nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-2（soluble vascular endothelial growth factor receptor 2，sVEGFR-2）的存在。本研究選取2013年1月—2014年6月冠脈慢血流患者17例，檢測(cè)其血清中sVEGFR-2水平的變化，探討冠脈慢血流現(xiàn)象可能存在的發(fā)病機(jī)制。

1　資料與方法

1.1一般資料冠脈慢血流患者（觀察組）17例，男7例，女10例，平均年齡65.0±9.7歲，合并高血壓8例，糖尿病3例，有吸煙史4例。同時(shí)隨機(jī)抽取排除慢血流患者17例作為對(duì)照組，男8例，女9例，平均年齡63.7±9.9歲，合并高血壓6例，糖尿病5例，有吸煙史6例。排除標(biāo)準(zhǔn)：急性心肌梗死、冠狀動(dòng)脈痙攣、冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張、冠狀動(dòng)脈夾層、心肌病、瓣膜病、全身系統(tǒng)性疾病、腫瘤、EF<45%的心力衰竭，嚴(yán)重肝腎功能不全。兩組患者在年齡、性別、高血壓、糖尿病、吸煙史、血糖、尿素氮、肌酐、膽固醇（Tch）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）等臨床資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。觀察組高密度脂蛋白（HDL）水平較對(duì)照組減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

表1　兩組患者血生化指標(biāo)比較（±s）

表1　兩組患者血生化指標(biāo)比較（±s）

觀察組（n=17）對(duì)照組（n=17）P血清葡萄糖（mmol/L）6.1±3.85.9±2.00.875尿素氮（mmol/L）7.0±3.85.0±1.10.052肌酐（μmol/L）69.8±19.864.2±13.90.347 LDL（mmol/L）2.1±0.92.9±1.00.071 HDL（mmol/L）1.0±0.41.5±0.3<0.01 TG（mmol/L）1.8±1.31.5±0.70.411 Tch（mmol/L）4.1±1.14.7±1.30.117

1.2方法（1）冠狀動(dòng)脈慢血流診斷標(biāo)準(zhǔn)：以橈動(dòng)脈途徑行冠狀動(dòng)脈造影，使用TIMI血流幀數(shù)（TIMI frame count，TFC）評(píng)定冠狀動(dòng)脈血流速度。TFC評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：第一幀為造影劑進(jìn)入某冠狀動(dòng)脈血管起始部并開(kāi)始顯影；最后一幀為造影劑到達(dá)各支冠狀動(dòng)脈遠(yuǎn)端標(biāo)記：LAD為靠近心尖部的遠(yuǎn)端分叉處；LCX為鈍緣支最遠(yuǎn)端的分叉；RCA為后降支發(fā)出后側(cè)支的第一個(gè)分支。TFC是第一幀至最后一幀的幀數(shù)。Gibson等[3]的研究中采用30幀/秒的速度測(cè)得TFC，研究規(guī)定LAD、LCX、RCA正常血流速度分別為（36.2±2.6）幀，（22.2±4.1）幀，（20.4±3.0）幀。如有任一冠脈血流速度大于正常血流速度2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差即可定義為冠脈慢血流。但因本實(shí)驗(yàn)是以15幀/秒的速度采集圖像，故將實(shí)際所測(cè)幀數(shù)乘以2。（2）檢測(cè)方法：患者均于冠脈造影術(shù)前采靜脈血3mL。將血液標(biāo)本以3 000r/min離心10min，取上清液，于-74℃保存待測(cè)。使用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定sVEGFR-2。ELISA試劑盒（武漢華美生物工程有限公司）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS21．0軟件分析，計(jì)量資料用±s表示，差異性比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson線性相關(guān)分析。P＜0．01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組患者TFC的比較觀察組LAD、LCX、RCA的TFC及三支冠脈平均血流幀數(shù)均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2　兩組TIMI血流幀數(shù)比較（±s）

表2　兩組TIMI血流幀數(shù)比較（±s）

觀察組對(duì)照組P值LAD44.9±5.831.5±5.5<0.01 LCX31.1±6.021.7±5.5<0.01 RCA30.3±7.120.9±3.6<0.01平均幀數(shù)35.5±3.924.7±2.4<0.01

2.2兩組患者血清sVEGFR-2水平比較血清sVEGFR-2觀察組為0.38±0.7（ng/mL），對(duì)照組為0.28±0.7（ng/mL），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.01）。

2.3患者血清sVEGFR-2水平與高密度脂蛋白、3支冠脈平均血流幀數(shù)相關(guān)性分析結(jié)果顯示血清sVEGFR-2與高密度脂蛋白顯著負(fù)相關(guān)，見(jiàn)圖1；與3支冠脈平均血流幀數(shù)顯著正相關(guān)，如圖2。

圖1　血清sVEGFR-2與HDL水平相關(guān)分析

圖2　血清sVEGFR-2與三支冠脈平均血流幀數(shù)相關(guān)性分析

3　討論

冠狀動(dòng)脈慢血流（CSF）在日常冠脈造影中并不少見(jiàn)，研究顯示CSF誘發(fā)靜息心絞痛或心電圖異常改變提示存在心肌缺血的發(fā)病率可高達(dá)1%~7%[4-5]。Yaymaci等[6]采用正電子發(fā)射心肌顯像（SPECT）技術(shù)證實(shí)約83.4%的CSF患者存在心肌缺血。CSF不僅可導(dǎo)致不穩(wěn)定性心絞痛甚至非ST段抬高型心肌梗塞，亦可導(dǎo)致心律失常、暈厥等癥狀[7-9]。因此臨床對(duì)于CSF的重視逐漸加深，對(duì)其發(fā)病機(jī)制的研究也越來(lái)越多。

本實(shí)驗(yàn)旨在研究血清sVEGFR-2水平與CSF的相關(guān)性。sVEGFR-2是除細(xì)胞膜型受體外的另一種表達(dá)形式。目前研究已知多數(shù)細(xì)胞因子受體主要表達(dá)于細(xì)胞表面，即通常所說(shuō)的膜型受體。但在一些情況下，許多細(xì)胞因子受體，可從細(xì)胞膜上脫落形成可溶性細(xì)胞因子受體或由自身細(xì)胞分泌可溶性細(xì)胞因子受體，且以前者居多。

內(nèi)皮細(xì)胞可表達(dá)的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體包括VEGFR-1和VEGFR-2。在內(nèi)皮細(xì)胞上VEGFR-2表達(dá)數(shù)量較VEGFR-1高，且有研究表明VEGFR-1在配體刺激下不能有效進(jìn)行自身磷酸化激活，而VEGFR-2的激活與內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、分化密切相關(guān)。確定VEGFR-2是唯一保證其配體血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞遷移、血管生成、血管通透性增加的受體[10-12]。

VEGF為目前公認(rèn)的最強(qiáng)的血管生成因子，其中VEGF-A是我們最常提及的。正常人血清VEGF水平及內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)其受體水平維持在極低水平。如有缺氧或炎癥存在時(shí)，血清VEGF、VEGFR水平均可明顯升高，且VEGF可上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞VEG－FR-2的表達(dá)水平[13]。Kikuchi等[14]實(shí)驗(yàn)則證實(shí)VEGFA于血管受損的病理狀態(tài)下可高表達(dá)。由此表明內(nèi)皮受損情況下VEGF-A水平是升高的。同時(shí)VEGF作為最強(qiáng)的血管通透性因子，與VEGFR-2結(jié)合可增加血管通透性，促使脂質(zhì)沉積及泡沫細(xì)胞形成，從而進(jìn)一步損害內(nèi)皮功能促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展[15]。

本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果示觀察組血清sVEGFR-2水平高于對(duì)照組，將所有患者血清sVEGFR-2水平與三支冠脈平均血流幀數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)sVEGFR-2水平與三支冠脈平均血流幀數(shù)顯著正相關(guān)。前文已述血管內(nèi)皮受損情況下VEGF可高表達(dá)，且目前已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)VEGF-A可以促使VEGFR-2由內(nèi)皮細(xì)胞上的脫落形成sVEGFR-2[16]。故由此推測(cè)內(nèi)皮受損情況下sVEGFR-2也可高表達(dá)。但sVEGFR-2水平升高與內(nèi)皮功能受損是否存在直接相關(guān)尚不明確。故本實(shí)驗(yàn)僅能提示慢血流可能與循環(huán)中sVEGFR-2水平升高有一定相關(guān)性。

本實(shí)驗(yàn)除了檢測(cè)血清sVEGFR-2水平外，對(duì)慢血流患者基本臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，與對(duì)照組比較顯示差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但高密度脂蛋白水平卻明顯低于對(duì)照組，兩組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。一般認(rèn)為血脂水平異常是引起內(nèi)皮功能受損重要因素之一，近年來(lái)對(duì)HDL的多項(xiàng)研究則表明HDL可促進(jìn)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)、有抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)內(nèi)皮功能等抗動(dòng)脈粥樣硬化功能。Benjo等[17]報(bào)道HDL水平降低者內(nèi)皮功能存在明顯減退。實(shí)驗(yàn)中我們將患者血清sVEGFR-2與HDL水平進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果提示兩者呈負(fù)相關(guān)，由此推測(cè)HDL水平下降、內(nèi)皮功能受損后sVEGFR-2水平升高，可作為慢血流存在內(nèi)皮功能受損一項(xiàng)檢測(cè)標(biāo)志物。現(xiàn)已明確VEGFR-2脫落增加繼發(fā)于VEGF升高，而VEGF既可高表達(dá)于血管受損情況下，也可發(fā)揮自身生物學(xué)活性進(jìn)一步增加血管通透性損傷內(nèi)皮功能。這也進(jìn)一步表明冠脈慢血流現(xiàn)象存在內(nèi)皮功能受損，冠脈慢血流與sVEGFR-2水平升高相關(guān)。

綜上所述，本研究推測(cè)冠脈慢血流可能與循環(huán)中sVEGFR-2的升高相關(guān)。但因研究樣本量仍偏少，且VEGF、VEGFR-2、sVEGFR-2的生物活性作用機(jī)制比較復(fù)雜，仍需更多樣本量探索慢血流發(fā)病機(jī)制研究及sVEGFR-2于慢血流情況下高表達(dá)的詳細(xì)病理機(jī)制。

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1006-2440（2015）02-0141-04

徐標(biāo)，E-mail：xubiao@medmail.com.cn

2015-01-30