橙皮苷對小鼠耐缺氧能力的影響

侯克鎮(zhèn)等

[摘要] 目的 研究橙皮苷對小鼠耐缺氧能力的影響。 方法 ①小鼠常壓耐缺氧實驗：取昆明種小鼠24只，分為4組，分別為溶劑對照組（二甲基亞砜，DMSO）、普萘洛爾陽性對照組、低劑量橙皮苷藥物組（0.2 ml/10 g）、高劑量橙皮苷藥物組（0.4 ml/10 g），灌胃給藥，給藥后25 min放入密封廣口瓶中，觀察并記錄小鼠死亡時間。②小鼠腦缺血實驗（斷頭喘息法）：取昆明種小鼠24只，分為4組，分別為空白對照組、普萘洛爾陽性對照組、低劑量橙皮苷藥物組（0.1 ml/10 g）、高劑量橙皮苷藥物組（0.4 ml/10 g）。灌胃給藥，給藥后25 min快速斷頭，觀察并記錄喘息時間。③對抗異丙腎上腺素實驗：取昆明種小鼠24只，分為4組，分別為異丙腎上腺素+生理鹽水對照組、異丙腎上腺素+普萘洛爾陽性對照組、異丙腎上腺素+低劑量橙皮苷藥物組（0.2 ml/10 g）、異丙腎上腺素+高劑量橙皮苷藥物組（0.4 ml/10 g），每組先給小鼠皮下注射異丙腎上腺素（0.3 ml/10 g），5 min后腹腔注射給藥，給藥20 min后，放入密封廣口瓶，觀察并記錄小鼠存活時間。④小鼠游泳運動實驗：取昆明種小鼠24只，分為4組，分別為1%溶劑對照組（DMSO）、低劑量橙皮苷藥物組（0.03 ml/10 g）、中劑量橙皮苷藥物組（0.06 ml/10 g）、高劑量橙皮苷藥物組（0.10 ml/10 g），連續(xù)灌胃給藥5 d后，于第6天分別對小鼠進行負(fù)重游泳運動，觀察并記錄小鼠存活時間。 結(jié)果 ①橙皮苷能顯著延長常壓缺氧條件下小鼠的存活時間。②橙皮苷能顯著延長斷頭小鼠的喘息時間。③橙皮苷不能顯著延長皮下注射異丙腎上腺素的小鼠在常壓缺氧條件下的存活時間。④橙皮苷能顯著延長小鼠的負(fù)重游泳運動時間。 結(jié)論 橙皮苷能顯著增強小鼠耐缺氧能力。

[關(guān)鍵詞] 橙皮苷；耐缺氧；異丙腎上腺素；普萘洛爾

[中圖分類號] R392.1 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2015）08（c）-0008-04

[Abstract] Objective To study the influence of hesperidin on the hypoxia tolerance ability of mice. Methods ①Hypoxia tolerance experiment in mice at normal pressure： 24 Kunming mice were selected and divided into 4 groups，which were solvent control group （DMSO），Propranolol positive control group，low-dose hesperidin drug group （0.2 ml/10 g） and high-dose hesperidin drug group （0.4 ml/10 g）.Intragastric administration was implemented，25 minutes after which the mice were placed into a sealed wide-mouth bottle，and the death time of mice was observed and recorded.②Cerebral ischemia experiment in mice （decapitation breathing method）： 24 Kunming mice were selected and divided into 4 groups，which were blank control group，Propranolol positive control group，low-dose hesperidin drug group （0.1 ml/10 g） and high-dose hesperidin drug group （0.4 ml/10 g）.Intragastric administration was implemented，25 minutes after which the mice were decapitalized rapidly，and the breathing time was observed and recorded.③Anti-Isoproterenol experiment： 24 Kunming mice were selected and divided into 4 groups，which were Isoproterenol+normal saline control group，Isoproterenol+Propranolol positive control group，Isoproterenol+low-dose hesperidin drug group （0.2 ml/10 g） and high-dose hesperidin drug group （0.4 ml/10 g）.Each group of mice was given subcutaneous injection of Isoproterenol （0.3 ml/10 g） first and intraperitoneal injection of drug 5 minutes later，20 minutes after which the mice were placed into a sealed wide-mouth bottle，and the survival time of mice was observed and recorded. ④Swimming exercise experiment in mice： 24 Kunming mice were selected and divided into 4 groups，which were 1% solvent control group （DMSO），low-dose hesperidin drug group （0.03 ml/10 g），mid-dose hesperidin drug group （0.06 ml/10 g） and high-dose hesperidin drug group （0.10 ml/10 g）.Intragastric administration was given continuously for 5 days and load swimming exercise was conducted in mice on the 6th day.The survival time of mice was observed and recorded. Results ①Hesperidin could significantly prolong the survival time of mice under normal pressure hypoxia condition.②Hesperidin could significantly prolong the breathing time of decapitalized mice.③Hesperidin could not significantly prolong the survival time of mice having received subcutaneous injection of Isoproterenol under normal pressure hypoxia condition.④Hesperidin could significantly prolong the load swimming exercise time of mice. Conclusion Hesperidin can significantly enhance the role of hypoxia tolerance.

[Key words] Hesperidin；Hypoxia tolerance；Isoproterenol；Propranolol

橙皮苷（hesperidin）異名陳皮苷、橘皮苷，分子式為C28H34O15，相對分子量為610.55，廣泛存在于豆科、白樺、唇形花科、蝶形花科、蕓香科、柑橘屬植物中，如枳實、陳皮、柑橘皮等。橙皮苷是橙皮素和蕓香糖形成的糖苷，為二氫黃酮衍生物，具有很多藥理活性，如抗炎、抗氧化、抗癌、延緩衰老、抗菌、調(diào)節(jié)免疫能力、降血壓、抗過敏、抑菌、防輻射、保護和預(yù)防心血管疾病、防齲、抗食管癌等作用[1-20]。本實驗主要研究橙皮苷耐缺氧作用，為橙皮苷新的藥理作用探究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 器械 灌胃針頭、注射針頭、1 ml注射器、膠手套、磨口廣口瓶（250 ml）、試劑瓶（250 ml）、剪刀、恒溫游泳池、鉗夾、燒杯（50、150 ml）、量筒（10、50 ml）、托盤天平、標(biāo)簽紙。

1.1.2 試劑與藥品 橙皮苷（天津尖峰天然產(chǎn)物公司，純度97%）；二甲基亞砜（DMSO）；異丙腎上腺素（上海禾豐制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：H31021344，批號：130403）；普萘洛爾（江西亞邦愛普森藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號：H32020133，批號：1305056）；生理鹽水。

1.1.3 動物 18～34 g昆明種小鼠，雄性，由湖南科學(xué)院提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 小鼠常壓耐缺氧實驗 取24只小鼠，隨機分為4組，每組6只，其中溶劑對照組（DMSO），每只小鼠按0.2 ml/10 g劑量給藥；普萘洛爾陽性對照組，每只小鼠按0.1 ml/10 g劑量給藥；低劑量橙皮苷藥物組，每只小鼠按0.2 ml/10 g劑量給藥；高劑量橙皮苷藥物組，每只小鼠按0.4 ml/10 g劑量給藥。灌胃給藥，給藥25 min后，將小鼠放入250 ml的磨口廣口瓶內(nèi)，每瓶放小鼠1只，放入濾紙用以吸收尿液，用凡士林涂抹瓶蓋封口防止漏氣，廣口瓶用前均已盛水校正過容量。以最后一次呼吸為死亡指標(biāo)，觀察并記錄每只小鼠從封口到呼吸停止的時間，即存活時間[21]。

1.2.2 小鼠腦缺血實驗 取24只小鼠，隨機分為4組，每組6只，其中空白對照組，不給任何試劑、藥品；普萘洛爾陽性對照組，每只小鼠按0.2 ml/10 g劑量給藥；低劑量橙皮苷藥物組，每只小鼠按0.1 ml/10 g劑量給藥；高劑量橙皮苷藥物組，每只小鼠按0.4 ml/10 g劑量給藥。灌胃給藥，給藥25 min后，快速斷頭，以最后一次喘息為指標(biāo)，觀察并記錄每只小鼠斷頭以后至最后一次喘息所需的時間[22]。

1.2.3 對抗異丙腎上腺素實驗 取24只小鼠，隨機分成4組，每組6只，其中異丙腎上腺素+生理鹽水對照組，先按0.3 ml/10 g劑量給小鼠皮下注射異丙腎上腺素，5 min后按0.2 ml/10 g劑量給小鼠腹腔注射生理鹽水；異丙腎上腺素+普萘洛爾陽性對照組，先按0.3 ml/10 g劑量給小鼠皮下注射異丙腎上腺素，5 min后按0.2 ml/10 g劑量給小鼠腹腔注射普萘洛爾；異丙腎上腺素+低劑量橙皮苷藥物組，先按0.3 ml/10 g劑量給小鼠皮下注射異丙腎上腺素，5 min后按0.2 ml/10 g劑量給小鼠腹腔注射橙皮苷溶液；異丙腎上腺素+高劑量橙皮苷藥物組，先按0.3 ml/10 g劑量給小鼠皮下注射異丙腎上腺素，5 min后按0.4 ml/10 g的劑量給小鼠腹腔注射橙皮苷溶液。給藥20 min后，分別將小鼠放入250 ml的磨口廣口瓶內(nèi)，每瓶放小鼠1只，放入濾紙用以吸收尿液，用凡士林涂抹瓶蓋封口防止漏氣，廣口瓶用前均已盛水校正過容量。以最后一次呼吸為死亡指標(biāo)，觀察并記錄每只小鼠從封口到呼吸停止的時間，即存活時間[23]。

1.2.4 小鼠游泳運動實驗 取24只小鼠，隨機分為4組，每組6只，分別為1%溶劑對照組（DMSO）；低劑量橙皮苷藥物組，每只小鼠按0.03 ml/10 g劑量給藥；中劑量橙皮苷藥物組，每只小鼠按0.06 ml/10 g劑量給藥；高劑量橙皮苷藥物組，每只小鼠按0.10 ml/10 g劑量給藥。連續(xù)灌胃給藥5 d后，于第6天分別給小鼠尾巴夾上2 g重的金屬夾然后放入恒溫游泳池進行負(fù)重游泳運動，以小鼠最后一次沉入水底且頭部不再冒出水面10 s為死亡指標(biāo)，觀察并記錄每只小鼠從開始游泳到沉入水底10 s的時間，即存活時間[24]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計軟件SPSS 15.0對實驗數(shù)據(jù)進行分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間各測定指標(biāo)的總體比較采用單因素方差分析，組內(nèi)各指標(biāo)的多重比較采用SNK檢驗。計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1橙皮苷對小鼠常壓耐缺氧能力的影響

0.2、0.4 mg/10 g的橙皮苷能顯著延長小鼠常壓耐缺氧時間，與溶劑對照組（DMSO）比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）（表1）。

2.2 橙皮苷對小鼠腦缺血能力的影響

0.1、0.4 ml/10 g的橙皮苷能顯著延長小鼠快速斷頭喘息時間，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）（表2）。

2.3橙皮苷對異丙腎上腺素增加心肌耗氧量的影響

0.2、0.4 ml/10 g的橙皮苷能顯著延長小鼠對異丙腎上腺素增加心肌耗氧量時間，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）（表3）。

2.4 橙皮苷對小鼠游泳運動時間的影響

0.03、0.06、0.10 ml/10 g的橙皮苷能顯著延長小鼠游泳運動時間，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）（表4）。

3 討論

橙皮苷具較多的藥理作用，筆者通過昆明種小鼠研究橙皮苷的耐缺氧作用，主要包括小鼠常壓耐缺氧、小鼠腦缺血（斷頭喘息法）、抗異丙腎上腺素、游泳運動等實驗。結(jié)果顯示，小鼠在密閉容器中受到外界缺氧因素的損害，其傷害主要反映在心和腦缺氧，由于常壓耐缺氧為非特異性缺氧，本文實驗數(shù)據(jù)顯示，橙皮苷似顯著延長小鼠常壓耐缺氧的存活時間，這表明橙皮苷對腦缺氧和心肌缺氧具有良好的改善作用；在斷頭喘息實驗中，腦血液供應(yīng)中斷，但腦中原有的血和營養(yǎng)物質(zhì)在一段時間內(nèi)仍然能夠維持腦的正常功能，表現(xiàn)在小鼠有規(guī)律地喘息，可見橙皮苷能顯著延長小鼠的喘息時間，即能使小鼠腦耗氧量減少，對小鼠的斷頭腦缺血具有保護作用；在對抗異丙腎上腺素引起的心肌耗氧量增加所致心肌缺氧實驗中，橙皮苷能延長小鼠對異丙腎上腺素引起的心肌耗氧量增加所致心肌缺氧的存活時間；運動性疲勞是機體經(jīng)過長時間運動后導(dǎo)致運動能力下降的一種狀態(tài)，在游泳實驗中，橙皮苷能顯著延長小鼠的游泳運動時間，增強小鼠的耐力，表明其對小鼠外周組織的缺氧也具有顯著的改善作用。

綜上可知，橙皮苷對腦缺氧、全身性缺氧所致的心肌缺氧有明顯的改善作用，對異丙腎上腺素所致心肌耗氧量增加引起的心肌缺氧有明顯的改善作用。其原因可能是橙皮苷可拮抗兒茶酚胺類物質(zhì)，進而降低血壓，減慢心率，降低心肌耗氧量，保護和改善缺血缺氧的心肌。

志謝：感謝贛南醫(yī)學(xué)院曾靖教授對本課題的關(guān)心和指導(dǎo)。

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（收稿日期：2015-04-20 本文編輯：衛(wèi) 軻）