過塘蛇藥材中沒食子酸含量分析

李兵 陳建惠 盧汝梅等

摘要：為研究過塘蛇（Jussiaea repens L.）藥材的質(zhì)量控制技術(shù)，分別采用薄層色譜和液相色譜法分析了過塘蛇樣品中活性成分沒食子酸含量。結(jié)果表明，薄層色譜法可半定量分析其沒食子酸含量，液相色譜法可定量分析沒食子酸，其進樣量在0.12～0.86 μg之間，與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0.999 9），平均回收率為97.87%（RSD=0.70%，n=6），10份樣品中的沒食子酸含量為0.48～2.21 mg/g。該方法簡單可行、重現(xiàn)性好，可用于過塘蛇藥材的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：過塘蛇（Jussiaea repens L.）；沒食子酸；藥材質(zhì)量；薄層色譜；液相色譜

中圖分類號：R917 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）14-3508-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.14.045

Analysis of Gallic Acid in the Medical Material of Jussiaea repens L.

LI Bing1，CHEN Jian-hui1，LU Ru-mei1，NONG Mei-dong1，ZHONG Jiang2

（1.Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning， 530200；

2.The First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning， 530012）

Abstract： The content of gallic acid in Jussiaea repens L. was analyzed by thin layer chromatography （TLC） and high performance liquid chromatography （HPLC） which provided an index of evaluation for this medical material quality. The results showed that TLC was a good semi-quantitative analysis for detecting gallic acid in this medical material， and HPLC had a good performance on quantitative analysis gallic acid. In the HPLC analysis， the good linearity in the range of 0.12～0.86 μg （r=0.999 9） was obtained. The average recovery reached 97.87% （RSD=0.70%，n=6），the contents of gallic acid in 10 samples were in the range of 0.48～2.21 mg/g. The methods are simple， feasible，repeatable for analyzing this medical material quality.

Key words： Jussiaea repens L.； gallic acid； medical material quality； TLC； HPLC

過塘蛇（Jussiaea repens L.）是柳葉菜科水龍屬植物水龍，主要分布于廣西、浙江、江西、廣東等地，曾收載于《廣西中藥材標準》，為多種中成藥的原料藥[1]。其味淡，性涼，以干燥全草入藥，具有清熱、解毒、利尿、消腫之功效，常用于治療感冒發(fā)燒、燥熱咳嗽、水腫、喉痛、風(fēng)火牙痛等癥[2]。目前國內(nèi)外對過塘蛇研究較少，Marzouk等[3]發(fā)現(xiàn)過塘蛇中廣寄生苷的?；a(chǎn)物具有保肝護肝、抗炎、治療糖尿病的作用。張尊聽等[4]采用分光光度法測定秦嶺太白山20種中草藥的乙醇提取液對DPPH·（1，1-二苯基-2-苦肼基自由基）的清除作用，發(fā)現(xiàn)過塘蛇濃度為0.4 mg（干重）/mL時，對DPPH·的清除作用高達84.1%，抗氧化作用最強。沒食子酸單體經(jīng)研究表明具有抗氧化[5]、抗腫瘤[6，7]、抗乙肝病毒[8]、降糖降脂[9]等多種生物學(xué)活性。因此，本文采用薄層色譜法對過塘蛇藥材進行定性鑒別，并采用 HPLC 法測定過塘蛇藥材中指標成分沒食子酸的含量，為過塘蛇藥材的制劑開發(fā)和質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

10批過塘蛇藥材均采收于廣西不同市縣，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授鑒定為柳葉菜科水龍屬植物水龍（Jussiaea repens L.）。

沒食子酸對照品購于中國食品藥品檢定研究院（批號110831-201204），甲醇（色譜純）購于西隴化工股份有限公司，其他試劑均為分析純。

1.2 主要儀器

LC-20A高效液相色譜儀（日本島津）

1.3 方法

1.3.1 對照品溶液的制備 稱取沒食子酸對照品適量，加甲醇制成1 mg/mL對照品溶液。

1.3.2 供試品溶液的制備 取樣品粗粉過二號篩，稱取粉末2.0 g，置于錐形瓶中，加甲醇50 mL，超聲提取30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加入適量甲醇溶解，作為薄層色譜供試品溶液；稱取樣品粉末約2.000 0 g置于圓底燒瓶中，加入32 mL水，稱定重量，加熱回流提取1 h，放冷，再稱定重量，用水補足損失的重量，搖勻，濾過?；亓魈崛?次，合并提取液，濾過，收集濾液，待HPLC分析。

1.3.3 薄層色譜分析 吸取對照品溶液和10批不同產(chǎn)地的藥材樣品溶液適量，分別點于高效薄層硅膠G板，以乙酸乙酯-氯仿-甲酸（5∶4∶1，V/V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴5%的磷鉬酸乙醇液，在 105 ℃加熱至斑點顯色清晰。

1.3.4 HPLC分析 Cosmosil C18柱（5C18-PAQ，4.6 mm×250 mm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸（8∶92，V/V）；檢測波長270 nm，流速1.0 mL/min，柱溫為室溫。理論塔板數(shù)按沒食子酸計算應(yīng)不少于5 000。

2 結(jié)果與分析

2.1 薄層色譜分析

樣品的薄層色譜圖見圖1。由圖1可知，樣品與對照品色譜相應(yīng)的位置（Rf=0.5）上，顯相同顏色的斑點，重現(xiàn)性較好。

2.2 高效液相色譜分析

標準品和樣品的HPLC色譜圖見圖2。由圖2可知，對照品溶液和供試品溶液在相同的時間內(nèi)有對應(yīng)的吸收峰，且峰型對稱，無雜峰干擾，理論塔板數(shù)按沒食子酸計算不少于5 000，表明該方法可用于過塘蛇中的沒食子酸含量分析。

2.2.1 方法學(xué)分析 分別吸取對照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、14.0 μL，注入高效液相色譜儀測定，以對照品進樣量（μg）為橫坐標，對應(yīng)峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程y=3E+06x-7 444.7（r=0.999 9），結(jié)果表明沒食子酸進樣量在0.12～0.86 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

吸取沒食子酸對照品溶液（61.2 μg/mL）10 μL，重復(fù)進樣6次，測定峰面積，計算峰面積的RSD為0.48%（n=6），表明精密度良好。

取同一批號藥材（產(chǎn)地為賀州）6份，每份約2 g，按上述方法制備供試品溶液并進行液相色譜分析。結(jié)果表明，沒食子酸的平均含量為1.38 mg/g（RSD=2.99%，n=6），方法重復(fù)性良好。

取同一批號藥材（產(chǎn)地為賀州）2 g，按上述方法制備供試品溶液，常溫分別放置0、2、4、8、12和24 h后，進行液相色譜分析。結(jié)果表明，沒食子酸峰面積的RSD為0.56%（n=6），即供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

取同一批號藥材（產(chǎn)地賀州）約1 g，再分別加入濃度為1.53 mg/mL（已按干燥品折算）的沒食子酸對照品溶液1 mL，同上法處理并計算加樣回收率。結(jié)果表明，沒食子酸平均回收率為97.87%（RSD=0.73%，n=6，已按干燥品折算），即該法較為準確可靠。

2.2.2 不同產(chǎn)地過塘蛇中沒食子酸含量的測定 將樣品按照上述方法處理，每樣品設(shè)3份平行，經(jīng)液相色譜分析，外標法計算沒食子酸含量，結(jié)果見表1。由表1可知，各產(chǎn)地中過塘蛇中的沒食子酸含量為0.48～2.21 mg/g。

3 討論

在制備供試品溶液時，考察了水、無水甲醇和無水乙醇等提取溶劑對結(jié)果的影響，也比較了超聲、回流和冷浸提取的效果，同時還考察了溶劑倍數(shù)對指標成分的影響，結(jié)果表明，以水為溶劑，采取回流提取，提取3次，沒食子酸的提取率較高。試驗同時考察了甲醇-水、甲醇-0.1%磷酸水溶液等流動相對結(jié)果的影響，發(fā)現(xiàn)以甲醇-0.1%磷酸水溶液（8∶92，V/V）為流動相時，保留時間適中，分離度大于1.5，故采用此溶液作為流動相。

該方法快速、準確、靈敏度高、重現(xiàn)性好，對過塘蛇藥材的質(zhì)量控制和進一步制劑研究開發(fā)具有參考價值。

參考文獻：

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