肥胖相關(guān)基因與叉頭轉(zhuǎn)錄因子在非酒精性脂肪肝中的作用機(jī)制

竇芊 杜敬佩 楊瑞 劉淑媛 李長(zhǎng)安 趙巍峰

·臨床與基礎(chǔ)研究·

肥胖相關(guān)基因與叉頭轉(zhuǎn)錄因子在非酒精性脂肪肝中的作用機(jī)制

竇芊 杜敬佩 楊瑞 劉淑媛 李長(zhǎng)安 趙巍峰

目的研究FTO與FoxO1在非酒精性脂肪肝中的作用機(jī)制。方法采用高能高脂飼料將非酒精性脂肪肝小鼠動(dòng)物模型制備出來，對(duì)其肝指數(shù)進(jìn)行測(cè)定，采用全自動(dòng)生化儀對(duì)其ALP、ALT、AST、TC、TG、LDL、HDL進(jìn)行檢測(cè)，運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法對(duì)其FTO、FoxO1、AMPK蛋白進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果模型組小鼠的肝重、體重、肝指數(shù)均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），ALP、ALT、AST、TC、TG、LDL濃度均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），HDL濃度顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），F(xiàn)TO、FoxO1的陽性表達(dá)積分均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），AMPK的陽性表達(dá)積分顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。結(jié)論FTO與Fox O1共同作用和非酒精性脂肪肝中的作用機(jī)制密切相關(guān)。

FTO；Fox O1；非酒精性脂肪肝；作用機(jī)制

本研究對(duì)FTO（肥胖相關(guān)基因）與Fox O1（叉頭轉(zhuǎn)錄因子）在非酒精性脂肪肝中的作用機(jī)制進(jìn)行了簡(jiǎn)要研究，以期為臨床治療酒精性脂肪肝的工作提供科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)告如下。

材料和方法

一、材料

本研究所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和主要試劑具體見表1。

表1 本研究所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和主要試劑

二、研究方法

（一）非酒精性脂肪肝小鼠模型的建立

讓小鼠自由進(jìn)食和飲水，定期對(duì)小鼠的飲食變化、自由活動(dòng)、毛發(fā)變化等進(jìn)行認(rèn)真細(xì)致的觀察，每天1次，同時(shí)定期對(duì)飼料進(jìn)行稱量，每天1次，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后依據(jù)體重隨機(jī)抽取6只對(duì)非酒精性脂肪肝小鼠模型進(jìn)行制備，將高能高質(zhì)飼料喂養(yǎng)給它們，持續(xù)10周；其余6只小鼠作為空白對(duì)照組，將正常固體鼠糧喂養(yǎng)給它們，持續(xù)10周［1］。

（二）肝臟的分離和血液標(biāo)本的采集

對(duì)兩組小鼠進(jìn)行12 h的禁食，然后運(yùn)用10%水合氯醛對(duì)其進(jìn)行麻醉，采用斷頭法將其血液取出來，室溫下對(duì)血樣進(jìn)行2 h的靜置，然后對(duì)其進(jìn)行20 min的離心，離心速率為你2 000 r/min。處死小鼠后第一時(shí)間將其肝臟取出來，將肝指數(shù)計(jì)算出來，稱量肝臟的重量后將一部分組織取出來，用甲醛溶液將其固定，常規(guī)石蠟切塊，并進(jìn)行HE染色，在光學(xué)顯微鏡下對(duì)其進(jìn)行認(rèn)真細(xì)致的觀察，在液氮中儲(chǔ)存剩余肝臟組織［］。

（三）小鼠血清生化檢測(cè)

選用德國(guó)羅氏試劑公司生產(chǎn)的Cobas6000全自動(dòng)生化儀，采用甘油三酯試劑盒及肝酶試劑盒對(duì)小鼠血清天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）進(jìn)行檢測(cè)［3］。

三、小鼠肝臟中FTO、Fox O1、AMPK的陽性表達(dá)積分評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)細(xì)胞陽性著色率及著色深度將小鼠肝臟中肥胖相關(guān)基因（FTO）、叉頭轉(zhuǎn)錄因子（FoxO1）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）的陽性表達(dá)量綜合計(jì)算出來。在著色深度方面，1分=弱陽性（+），2分=中等陽性（++），3分=強(qiáng)陽性（+++）；在陽性細(xì)胞數(shù)方面，0分=陰性（-），沒有陽性細(xì)胞著色，1分=陽性細(xì)胞數(shù)在1%-25%之間，2分=陽性細(xì)胞數(shù)在26%-50%之間，3分=陽性細(xì)胞數(shù)在51%以上。低表達(dá)=二者乘積在2以下；高表達(dá)=二者乘積在3及以上［4］。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

對(duì)本研究中所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理的過程中運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 20.0，用±s）表示計(jì)量資料，用t檢驗(yàn)組間比較，P＜0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

結(jié) 果

一、兩組小鼠的肝重、體重、肝指數(shù)比較

模型組小鼠的肝重、體重、肝指數(shù)均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。具體見表2。

表2 兩組小鼠的肝重、體重、肝指數(shù)比較（±s）

表2 兩組小鼠的肝重、體重、肝指數(shù)比較（±s）

組別 只數(shù) 肝重（g） 體重（g） 肝指數(shù)（%）模型組 6 1.28±0.68 22.66±0.72 0.91±0.17對(duì)照組 6 0.37±0.29 18.45±0.77 0.40±0.09 t值 4.303 3.182 2.776 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

二、兩組小鼠的生化指標(biāo)濃度比較

模型組小鼠的ALP、ALT、AST、TC、TG、LDL濃度均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），HDL濃度顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。具體見表3。

表3 兩組小鼠的生化指標(biāo)濃度比較±s）

表3 兩組小鼠的生化指標(biāo)濃度比較±s）

05 ALT（U/L） 41.46±3.76 24.28±1.41 4.541＜0.05 AST（U/L） 237.70±12.86 50.43±8.22 3.747＜0.05 TC（mmol/L） 6.34±0.55 2.33±0.37 3.365＜0.05 TG（mmol/L） 1.17±0.10 0.64±0.08 3.143＜0.05 LDL（mmol/L） 2.82±0.22 0.40±0.14 2.998＜0.05 HDL（mmol/L） 1.86±0.09 2.82±0.17 2.896＜0.t P ALP（U/L） 102.40±6.43 78.00±4.55 6.965＜0.組別 模型組（n=6只）對(duì)照組（n=6只）05

三、兩組小鼠肝臟中FTO、Fox O1、AMPK的陽性表達(dá)積分比較

模型組小鼠肝臟中FTO、Fox O1的陽性表達(dá)積分均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），AMPK的陽性表達(dá)積分顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。具體見表4。

表4 兩組小鼠肝臟中FTO、Fox O1、AMPK的陽性表達(dá)積分比較±s）

表4 兩組小鼠肝臟中FTO、Fox O1、AMPK的陽性表達(dá)積分比較±s）

AMPK模型組 6 6.67±1.97 4.67±1.63 1.17±0.組別 只數(shù) FTO Fox O1 41對(duì)照組 6 1.33±0.52 2.17±0.98 2.67±1.03 t值 9.925 5.841 4.604 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

討 論

近年來，脂肪肝的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)，且發(fā)病年齡越來越低。相關(guān)醫(yī)學(xué)報(bào)道表明，脂肪肝和高脂血癥將嚴(yán)重威脅著我國(guó)人民的身體健康，其中脂肪肝中非酒精性脂肪肝患者極易發(fā)生血脂異常癥、高血壓、中風(fēng)等，給人民的身體健康造成了嚴(yán)重的不良影響［5-10］?，F(xiàn)階段，臨床還沒有完全弄清楚非酒精性脂肪肝的發(fā)病機(jī)制［11］。本實(shí)驗(yàn)采用高能高脂飼料對(duì)和臨床特點(diǎn)相符的非酒精性脂肪肝小鼠模型進(jìn)行制備，運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)FTO、Fox O1的表達(dá)水平及組織學(xué)定位進(jìn)行了研究，對(duì)非酒精性脂肪肝發(fā)生的可能分子機(jī)制進(jìn)行了簡(jiǎn)要探討，結(jié)果表明，模型組小鼠的肝重、體重、肝指數(shù)均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），ALP、ALT、AST、TC、TG、LDL濃度均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），HDL濃度顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），F(xiàn)TO、Fox O1的陽性表達(dá)積分均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），AMPK的陽性表達(dá)積分顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），充分說明了FTO與Fox O1共同作用和非酒精性脂肪肝中的作用機(jī)制密切相關(guān)。這一研究結(jié)果可以將新思路提供給臨床治療非酒精性脂肪肝的工作。

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2014-12-13）

（本文編輯：賴榮陶）

453000 河南新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院感染科