定西市脫毒馬鈴薯病毒攜帶情況及趨勢分析

趙小龍

定西市脫毒馬鈴薯病毒攜帶情況及趨勢分析

趙小龍*

（定西市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督管理站，甘肅定西743000）

應用DAS-ELISA法對定西市脫毒馬鈴薯種薯企業(yè)生產(chǎn)的脫毒苗、原原種和原種分別進行PVX、PVY、PVS和PLRV病毒檢測。結(jié)果表明，脫毒苗的病毒攜帶率為31.21%，原原種的病毒攜帶率為14.11%，原種的病毒攜帶率為31.47%。攜帶1種病毒的情況下，PVS的攜帶率均最高，攜帶2種以上復合病毒的情況也有檢出，其中PVX+PVS復合病毒的攜帶率均最高；PLRV只有在脫毒苗樣品中檢出，PVX+PVY+PVS復合病毒只有在原原種的1個樣品上檢出。此外，對影響當?shù)胤N薯質(zhì)量的主要病毒及各級種薯攜帶病毒的趨勢進行了討論。

馬鈴薯；病毒；脫毒種薯；DAS-ELISA；檢測

病毒病是馬鈴薯生產(chǎn)中重要的病害［1］，病毒的侵染可引起病毒病害，導致種質(zhì)退化，產(chǎn)量下降，嚴重時可減產(chǎn)70%～80%［2］，目前已報道的病毒多達30種以上，危害較嚴重的有6～7種［3，4］。定西市作為馬鈴薯種植基地和種薯生產(chǎn)基地，種植面積常年穩(wěn)定在20萬hm2以上，年生產(chǎn)原原種達6.05億粒，然而病毒病制約了當?shù)伛R鈴薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。近年來，雖然在控制病毒病的各個方面研究均取得了成效，但最有成效的手段仍然是脫毒種薯的生產(chǎn)和應用［5，6］，而解決的方法是通過莖尖脫毒組織培養(yǎng)，獲得脫毒基礎種苗，擴繁后得到種薯［7］。通過多年對定西市馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的脫毒苗、原原種和原種應用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附（DAS-ELISA）法進行PVX、PVY、PVS和PLRV檢測，并對結(jié)果進行分析討論，為指導企業(yè)生產(chǎn)提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。

1　材料與方法

1.1樣品采集

脫毒苗樣品是從馬鈴薯種薯生產(chǎn)企業(yè)通過莖尖脫毒組織培養(yǎng)后，沒有進行病毒檢測的基礎種苗中隨機采集，共采集樣品1035份；原原種和原種是從種薯擴繁基地采集，分別采集樣品489份和483份。

1.2檢測試劑

檢測試劑為馬鈴薯病毒檢測試劑盒，購自黑龍江省農(nóng)業(yè)科學院植物脫毒苗木研究所。

1.3檢測方法

依據(jù)《馬鈴薯脫毒種薯》（GB18133）規(guī)定，應用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附（DAS-ELISA）法分別對脫毒苗、原原種和原種進行PVX、PVY、PVS和PLRV4種病毒檢測。

表1　2008～2014年馬鈴薯脫毒苗攜帶病毒總體情況Table1 Generalinformationofinvitroplantletsinfectedwithvirusesbetween2008-2014

表2　馬鈴薯脫毒苗攜帶病毒種類情況Table2 Virustypesofinvitroplantletsinfectedwithviruses

2　結(jié)果與分析

2.1馬鈴薯脫毒苗、原原種、原種攜帶病毒情況

2.1.1馬鈴薯脫毒苗攜帶病毒情況

馬鈴薯脫毒苗病毒攜帶情況見表1。連續(xù)7年對定西市馬鈴薯種薯生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的脫毒基礎瓶苗共采集1035份樣品進行了檢測，結(jié)果顯示，攜帶病毒的樣品數(shù)量達323份，病毒攜帶率為31.21%。

從表2可以得出，脫毒苗樣品在攜帶1種病毒的情況下，其攜帶病毒種類及攜帶率由高到低依次為：PVS＞PVY＞PLRV＞PVX，其中PVS的攜帶率最高為22.32%；2種病毒復合攜帶的檢出率較高，其復合病毒的種類及攜帶率由高到低依次為：PVS+PVX＞PVS+PVY＞PVS+PLRV＞PVX+ PLRV，其中PVS+PVX的攜帶率最高為1.45%，PVS+PLRV只有在2011年抽檢的4個樣品上檢出，PVX+PLRV只有在2012年抽檢的1個樣品上檢出，其他2種及以上的復合病毒均未檢出。

2.1.2馬鈴薯原原種攜帶病毒情況

馬鈴薯原原種病毒攜帶情況見表3。通過對馬鈴薯種薯生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的馬鈴薯原原種共抽取489份樣品進行了檢測，結(jié)果顯示，攜帶病毒的樣品數(shù)量達69份，病毒攜帶率為14.11%。

從表4可以得出，原原種樣品在攜帶1種病毒情況下，其攜帶病毒種類及攜帶率由高到低依次為：PVS＞PVY＞PVX，其中PVS的攜帶率最高為7.98%，PLRV未檢出；2種病毒復合攜帶的檢出率也較高，其復合病毒的種類及攜帶率由高到低依次為：PVX+PVS＞PVX+PVY＞PVS+PVY，其中PVX+PVS的攜帶率最高為2.25%；攜帶PVX+PVY+ PVS復合病毒的情況只有2011年抽檢的1個樣品上檢出，其他2種及以上復合病毒均未檢出。

2.1.3馬鈴薯原種攜帶病毒情況

馬鈴薯原種病毒攜帶情況見表5。通過對馬鈴薯種薯生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的馬鈴薯原種共抽取483份樣品進行了檢測，結(jié)果顯示，攜帶病毒的樣品數(shù)量為152份，病毒攜帶率為31.47%。由于2011、2012年抽檢樣品數(shù)量較少，結(jié)果僅供參考。

從表6可以得出，原種樣品在攜帶1種病毒情況下，其攜帶病毒種類及攜帶率由高到低依次為：PVS＞PVY＞PVX，其中PVS的攜帶率最高為17.60%，PLRV未檢出；2種病毒復合攜帶的情況也有檢出，其復合病毒的種類及攜帶率由高到低依次為：PVX+PVS＞PVY+PVS，其中PVX+PVS的攜帶率最高為1.45%，其他2種及以上復合病毒均未檢出。

表3　馬鈴薯原原種攜帶病毒總體情況Table3 Generalinformationofpre-eliteseedpotatoinfectedwithviruses

表4　馬鈴薯原原種攜帶病毒種類情況Table4 Virustypesofpre-eliteseedpotatoinfectedwithviruses

表5　馬鈴薯原種攜帶病毒總體情況Table5 Generalinformationofeliteseedpotatoinfectedwithviruses

2.2影響脫毒馬鈴薯質(zhì)量的主要病毒

由圖1可知，在攜帶1種病毒的情況下，PVX、PVY和PVS3種病毒在脫毒苗、原原種和原種上均有檢出，且PVS的攜帶率均最高，其次為PVY，說明PVS病毒最難脫除，其次為PVY病毒。在攜帶2種以上復合病毒的情況下，PVX+PVS、PVY+PVS、PVS+PLRV和PVX+PVY+PVS復合病毒都有不同程度的檢出，說明PVS易與PVX、PVY、PLRV復合侵染；PVX+PVS和PVY+PVS復合病毒在脫毒苗、原原種和原種上均有檢出，而且PVX+ PVS的攜帶率均最高，說明PVS極易于PVX復合侵染；PVX+PVY+PVS復合病毒侵染的情況只有在原原種的1個樣品上檢出，其他復合病毒均未檢出。因此，當前影響定西市脫毒馬鈴薯種薯質(zhì)量的病毒多且復雜，其主要為PVS、PVY、PVX病毒和PVX+PVS、PVY+PVS復合病毒，如果不嚴格控制，將對馬鈴薯的生產(chǎn)造成嚴重減產(chǎn)。

2.3脫毒馬鈴薯各級種薯的病毒攜帶趨勢

由圖2可知，馬鈴薯種薯企業(yè)通過莖尖脫毒組織培養(yǎng)獲得的脫毒苗的病毒總體攜帶率較高，為31.21%；由脫毒苗生產(chǎn)的原原種的病毒總體攜帶率為14.11%，呈明顯下降趨勢；由原原種擴繁生產(chǎn)的原種的病毒總體攜帶率為31.47%，又呈明顯的上升趨勢，而且在此過程中PVS和PVY病毒最易傳播侵染。據(jù)調(diào)查，馬鈴薯種薯企業(yè)生產(chǎn)的脫毒苗首先要經(jīng)過病毒檢測，如果合格將做為生產(chǎn)原原種的基礎種苗進行擴繁生產(chǎn)，如果不合格將被淘汰，因此，脫毒苗的病毒攜帶率高低只作為指導企業(yè)生產(chǎn)的依據(jù)；但是，經(jīng)過對企業(yè)生產(chǎn)的原原種進行檢測，結(jié)果病毒攜帶率仍較高，其主要原因是部分企業(yè)對不合格脫毒苗淘汰不完全；由于原原種的病毒攜帶率較高，因此擴繁生產(chǎn)獲得的原種的病毒攜帶率將呈明顯的上升趨勢。

表6　馬鈴薯原種攜帶病毒種類情況Table6 Virustypesofeliteseedpotatoinfectedwithviruses

圖1　影響脫毒馬鈴薯質(zhì)量的主要病毒Figure1 Mainvirusesaffectingseedpotatoquality

3　討論

連續(xù)7年的脫毒苗的檢測結(jié)果看出，病毒的攜帶種類和攜帶率都相對較高，說明企業(yè)生產(chǎn)過程中脫毒不完全。孫秀梅［8］進行了影響馬鈴薯莖尖剝離脫毒效果各種因素的系統(tǒng)試驗研究，需要從外植體的選擇、剝離莖尖的大小、培養(yǎng)條件、人為處理等方面進行嚴格控制，才能生產(chǎn)出合格的脫毒苗。因此，生產(chǎn)企業(yè)必須建立嚴格質(zhì)量控制體系，全面提升技術(shù)人員素質(zhì)，加強自檢，自行淘汰攜帶病毒的脫毒苗，才能確保生產(chǎn)的原原種質(zhì)量合格。

圖2　脫毒馬鈴薯的病毒攜帶趨勢Figure 2 Virus infection trend in various grades of seed potato

從原原種和原種的攜帶病毒情況分析可以看出，當原原種不同程度攜帶病毒時，在繁育過程中由于田間管理措施不到位引起病毒的再次侵染，尤其是PVS和PVY病毒最易傳播侵染，所以生產(chǎn)的原種的病毒攜帶率將明顯呈增加趨勢。因此，在馬鈴薯種薯的擴繁過程中，要創(chuàng)造良好的種植條件，規(guī)范種植，并加強田間管理和質(zhì)量檢測。對于不同級別、不同品種的種薯攜帶病毒趨勢的相關性需要進一步研究。

從檢測結(jié)果看出，PVS在脫毒苗、原原種和原種上的攜帶率均最高，其次為PVY病毒，這與安穎蔚等［9］研究結(jié)果PVS最難脫除的理論基本相符，而且PVS極易與PVX、PVY、PLRV復合侵染，復合侵染后將對其產(chǎn)量的影響加大。據(jù)研究，PVS減產(chǎn)10%～20%，PVX減產(chǎn)10%～50%，PVY減產(chǎn)20%～50%，PVX+PVS減產(chǎn)20%～30%［10，11］。

新國標《馬鈴薯種薯》（GB18133-2012）于2013年12月19日正式實施，代替了國標《馬鈴薯種薯》（GB18133-2000），其中增加了對馬鈴薯PVM和PVA2種病毒的檢測項目。自2008年檢測發(fā)現(xiàn)PVM和PVA后，PVA檢出率不高，但是PVM檢出率逐年升高，在2008年之后已成為第二大檢出病害，應提高重視程度［12］，據(jù)研究，PVA減產(chǎn)40%，PVS+ PVM減產(chǎn)20%～30%，PVY+PVA減產(chǎn)80%［10，11］。因此，今后各級種薯質(zhì)量檢測和檢疫機構(gòu)要增加PVM和PVA的檢測項目，嚴格防控擴散的風險，確保生產(chǎn)和流通的種薯質(zhì)量合格。

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Status Quo and Trend Analysis of Virus Infection for Various Grades of Seed Potato in DingxiCity

ZHAO Xiaolong*
(DingxiSupervision and Management Station for Agricultural Products Quality and Safety,Dingxi,Gansu 743000,China)

Potato in vitro plantlets,pre-elite seeds and elite seeds produced by DingxiCity seed potato companies were tested for potato virus X(PVX),potato virus Y(PVY),potato virus S(PVS)and potato leafrollvirus(PLRV)using DAS-ELISA method.The infection rate was 31.21%,14.11%and 31.47%,respectively,for in vitro plantlets,pre-elite seeds and elite seeds. Forsingle virus infection,PVS infection rate was the highest.Double infection was also found,with PVX+PVS being the most popular.PLRV infection was detected only in in vitro plantletsamples and PVX+PVY+PVS complex infection in one pre-elite sample.The main viruses affectingseed potatoquality and infection trend forvarious grades ofseed potatowere also discussed.

potato;virus;seed potato;DAS-ELISA;detection

S532

B

1672—3635（2015）04-0228-05

2014-10-13

趙小龍（1977-），男，農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管及馬鈴薯種薯質(zhì)量檢驗檢測工作。

（Corresponding author）：趙小龍，E-mail：36358381@qq.com。