HPLC法檢測市售紅花飲片染色研究

趙 宇，孫睿婷，金大偉，焦玉龍

(哈爾濱市食品藥品檢驗檢測中心，哈爾濱150525)

紅花原名紅藍花，又名草紅花，為菊科植物紅花(Carthamus tinctorius L.)的干燥花，氣味辛、溫，無毒，多產(chǎn)于新疆、河南、四川和云南等地，多為栽培品.具有活血祛痛，通經(jīng)活絡(luò)等功效.由于其特有的功效，近年來需求量大，價格上漲，導(dǎo)致不法分子將其摻雜后染色進行增重進而獲取利潤[1－4].本文采用HPLC法對紅花中的酸性紅73進行定性鑒定.

1 實驗材料

1.1 樣品

取市售紅花飲片20批.

1.2 主要設(shè)備

電子天平(設(shè)備廠商:梅特勒－托利多儀器上海有限公司)，超聲清洗儀(設(shè)備廠商:上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司)、液相色譜儀(設(shè)備廠商:沃特世上海科技有限公司，型號:Waters e2695－2998).

1.3 試劑試藥

酸性紅73對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號111733－200701);乙醇(分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號:20120530);水(純化水);乙腈(色譜純);乙酸銨(北京益利精細化學(xué)品有限公司，批號:20070119).

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件設(shè)定

色譜柱為Agilent ZORBAX Extend C18(4.6×250 mm，5 μm)，流動相為乙腈(0.05 mol/L)醋酸銨溶液(30∶70)，二極管陣列檢測器，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量為 10 μL.

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照溶液制備

精密稱定酸性紅73對照品，加70%乙醇制成每1 mL含酸性紅 73為 100 μg的對照品溶液[5－6].

2.2.2 樣品溶液制備

精密稱取紅花樣品2 g，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇20 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理20 min，放冷，用70%乙醇補足減失的質(zhì)量，混勻，濾過.

2.3 專屬性的實驗

分別取對照品溶液及樣品溶液各10 μL分別進樣，經(jīng)二極管陣列檢測器檢測，對照溶液與樣品溶液相應(yīng)保留時間色譜峰紫外吸收光譜圖一致.見圖1、2.

圖1 紫外掃描圖(左側(cè)為酸性紅73，右側(cè)為樣品)

圖2 色譜圖(左側(cè)為酸性紅73，右側(cè)為樣品)

2.4 線性關(guān)系的考察

精密稱取酸性紅73對照品25.21 mg，裝入100 mL量瓶中，量取對照品(70%乙醇)溶解、稀釋、搖動均勻;分 5 次精密量取 1、3、5、10、20 mL，分別置于25 mL的量瓶中，然后加水稀釋至刻度后，搖動均勻，再精密量取上述稀釋后的量瓶中溶液各10 μL，依次注入液相色譜儀，分色譜條件標記后測定，將峰面積(A)和質(zhì)量濃度(C)作線性回歸方程，線性方程式和參數(shù)如下:

方程式為:A=29.674 2C －2.502 8;設(shè)定:r=0.999 9;線性范圍設(shè)定為:10.1 ～201.7 μg/mL.

2.5 回收試驗

分別稱取已知含量的樣品6份，每份2 g，分別精密加入酸性紅73 對照溶液(100.9 μg/mL)1 mL，按照2.2項下的制備方法配制溶液，色譜條件和上述參數(shù)一致，測算回收率，測算結(jié)果(n=9)為98.7%，RSD為0.7%.測算結(jié)果表明，回收率較好.

2.6 溶液穩(wěn)定性實驗

取批號為20130407的樣品溶液，置于室溫下，每 0、4、12、16、24 h，取樣依照上述方法測定，結(jié)果表明酸性紅73峰面積值變化微弱，RSD值為0.6%.

2.7 重復(fù)性試驗

精確稱取(批號為20130407)細粉6份，依次如上法測定含量，RSD為0.8%.

2.8 定量限檢測

將酸性紅73對照品溶液加溶劑多次稀釋使得峰高大約是基線噪音的10倍(S/N≈10)，實驗結(jié)果表明定量限為 0.110 μg/mL.

3 討論

酸性紅73是一種工業(yè)染料，常用于毛絲織物、紙張和皮革的染色，以及塑料、木材、香料等的著色，是食品禁用色素，有致癌致畸作用.長時間食用染有酸性紅73的食物會對病人生命產(chǎn)生威脅.在所檢測的20批市售紅花藥材中有7批檢出酸性紅73，對安全食用紅花飲片產(chǎn)生一定影響.

酸性紅73易溶于乙醇和水，對紅花樣品分別用水、乙醇、70%乙醇、45%乙醇進行提取，通過實驗比較表明，采用70%的乙醇提取液雜質(zhì)少，高效液相分離效果好，峰純度高，故選用70%乙醇作為提取溶劑.

分別采用Waters symmetry C18(4.6×250 mm，5 μm)、welch ultimate C18(250 × 4.6 mm，5 μm)、Agilent ZORBAX Extend C18(4.6 ×250 mm，5 μm)三根不同品牌的C18柱進行分離，結(jié)果都取得了很好的分離效果;對乙酸銨的比例進行調(diào)整后，結(jié)果同樣較好.因此，該HPLC法檢測市售紅花飲片染色方法具有較好的耐用性.

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