適宜香蕉不定芽疊氮化鈉誘變的磷酸鹽緩沖液配制

李洪波++呂順++劉文清++劉建平++何建齊++韓秀香

摘要 研究了不同pH值和濃度的磷酸鹽緩沖液對香蕉不定芽生長的影響，結果表明：0.043 mol/L、pH值3.07的磷酸鹽緩沖液是疊氮化鈉誘變香蕉不定芽的適宜緩沖液。

關鍵詞 磷酸鹽緩沖液；香蕉；不定芽；疊氮化鈉

中圖分類號 S668.1 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2015）12-0081-02

自從Spence在1965年首先發(fā)現(xiàn)疊氮化鈉（NaN3）對大麥的誘變作用以來，國內(nèi)外許多研究者對NaN3在農(nóng)作物上的誘變作用進行了廣泛研究[1-3]，證明NaN3是一種有效的化學誘變劑。根據(jù)有關資料[1-6]，應用NaN3進行化學誘變時，一般將NaN3溶解于pH值3.0的磷酸緩沖液進行處理，但未查到有關pH值3.0的磷酸緩沖液的配制方法。本試驗研究了適宜香蕉不定芽NaN3誘變的pH值3.0的磷酸緩沖液配制方法，以為NaN3誘變劑在香蕉不定芽上的應用提供技術參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料為香蕉品種巴西蕉，來源于東莞市香蕉蔬菜研究所建立的香蕉種質(zhì)資源圃。從資源圃中挖取性狀優(yōu)良、長勢健壯的香蕉吸芽苗，切取生長點消毒后建立外植體。將外植體接種于誘導培養(yǎng)基誘導不定芽的分化，分化的不定芽轉移到增殖培養(yǎng)基進行擴繁，經(jīng)3～4代繼代增殖培養(yǎng)后獲得大量不定芽，選擇大小一致的不定芽進行試驗。

1.2 試驗方法

1.2.1 pH值3.0的磷酸鹽緩沖液配制方法。參照0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH值2.0）配制方法（http：//wenku.baidu.com/view/），取甲液（磷酸16.6 mL，加水至1 000 mL，搖勻）60 mL、乙液（磷酸氫二鈉71.6 g，加水使溶解成1 000 mL）30～80 mL混勻，用美國生產(chǎn)的IQ150便攜式pH計測定不同體積比的混合液的pH值。

1.2.2 適宜香蕉不定芽誘變的磷酸鹽緩沖液濃度篩選方法。按1.2.1可得到pH值為3.0的磷酸鹽緩沖液，但該濃度的磷酸鹽緩沖液是否會對香蕉苗的生長造成影響，需進一步探究。以蒸餾水為對照，用蒸餾水將0.172 mol/L、pH值3.0的磷酸鹽緩沖液稀釋至0.172、0.086、0.043、0.022 mol/L 4種不同濃度，在105 ℃下高溫滅菌30 min備用，并用IQ150便攜式pH計測定pH值。

選擇生長基本一致、健壯的巴西蕉第3～4代不定芽，將其放入滅菌后的磷酸鹽緩沖液和蒸餾水中浸泡3 h，用無菌水清洗3遍，接到固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。3次重復，每重復接種12瓶，每瓶接種4個芽，培養(yǎng)20 d后，調(diào)查接種株數(shù)、死亡株數(shù)、分化株數(shù)、有效芽數(shù)、芽高等指標。

1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計

接種株數(shù)指接種于培養(yǎng)基上的不定芽總數(shù)；死亡株數(shù)指接種于培養(yǎng)基上死亡的不定芽總數(shù)；分化株數(shù)指接種于培養(yǎng)基上分化有不定芽的不定芽總數(shù)；有效芽數(shù)指培養(yǎng)基上有效的不定芽總數(shù)；芽高指瓶內(nèi)不定芽的平均株高。調(diào)查數(shù)據(jù)使用SPSS進行統(tǒng)計和方差分析。各指標計算公式如下：

致死率（%）=死亡株數(shù)/接種株數(shù)×100

分化率（%）=分化株數(shù)/接種株數(shù)×100

增殖系數(shù)=有效芽數(shù)/接種株數(shù)

2 結果與分析

2.1 pH值3.0的磷酸鹽緩沖液配制

從表1可以看出，當甲液體積為60 mL，乙液體積也為60 mL時，兩者的混合液pH值為2.96，接近3.0。因此，甲液∶乙液=1∶1，搖勻，可得到pH值接近3.0的磷酸鹽緩沖液。

2.2 不同濃度磷酸鹽緩沖液對香蕉生長的影響

從表2和圖1～5可以看出，當用蒸餾水作對照時，溶液pH值為5.50，不定芽致死率為0，植株分化率、增殖系數(shù)和芽高較高，不定芽無褐化現(xiàn)象，長勢強健。隨著磷酸鹽緩沖液濃度的增加，pH值降低，不定芽的致死率明顯提高，分化率、增殖系數(shù)和芽高明顯降低，長勢變?nèi)?。其中?.086 mol/L處理和0.172 mol/L處理致死率、分化率、增殖系數(shù)與蒸餾水處理差異顯著，明顯抑制香蕉不定芽的生長；0.043 mol/L處理、0.022 mol/L處理與蒸餾水處理的致死率、分化率、增殖系數(shù)、芽高差異不顯著，對香蕉不定芽的正常生長沒有明顯影響。0.043 mol/L處理磷酸鹽緩沖液處理pH值（3.07）接近3.0，且該濃度對香蕉不定芽的正常生長沒有影響。因此，疊氮化鈉誘變香蕉不定芽采用0.043 mol/L，pH值3.07磷酸鹽緩沖液比較適宜。

3 結論

NaN3是一種點突變劑，其與DNA的作用方式是堿基替換，使DNA單鏈斷裂。NaN3在pH值為3.0時，NaN3溶液中主要產(chǎn)生HN3分子，其呈中性，易透過細胞膜進入細胞內(nèi)，以堿基替換方式影響DNA的正常合成，從而導致點突變的產(chǎn)生[7]。因此，在應用NaN3進行化學誘變時需要提供pH值為3.0的酸性環(huán)境，誘變效果最好。本試驗系統(tǒng)研究了不同pH值和濃度磷酸鹽緩沖液對香蕉組培苗的影響，篩選出0.043 mol/L、pH值3.07的磷酸鹽緩沖液是疊氮化鈉誘變香蕉不定芽的適宜緩沖液。其配制方法如下：①甲液。取磷酸4.2 mL，加水至1 000 mL，搖勻。②乙液。取磷酸氫二鈉17.9 g，加水溶解成1 000 mL，搖勻。取甲液1 000 mL與乙液1 000 mL混合，即甲液∶乙液=1∶1混合均勻，可得pH值為3.07的磷酸鹽緩沖液。

4 參考文獻

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