生長抑素對顱腦損傷伴休克大鼠肝損傷的保護作用

王麗，王華偉，李瑞

生長抑素對顱腦損傷伴休克大鼠肝損傷的保護作用

王麗，王華偉，李瑞

［作者單位］250031山東濟南，解放軍456醫(yī)院特檢科（王麗，王華偉，李瑞）

目的觀察生長抑素（SST）對顱腦損傷伴失血性休克（TBIS）大鼠肝損傷的保護作用。方法Wistar大鼠36只，按隨機數(shù)字表法分成假手術組（C組）、TBIS模型組和SST治療組，每組12只。對大鼠血清腫瘤壞死因子（TNF）-α、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉移酶（AST）及肝組織丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽（GSH）的水平進行檢測；病理切片觀察肝組織病理學改變。結果與C組比較，TBIS組血清TNF-α、ALT及AST水平與肝組織勻漿MDA水平明顯升高（P＜0.01）；肝組織勻漿SOD及GSH水平均明顯降低（P＜0.01）。與TBIS組比較，SST治療組血清TNF-α、ALT及AST水平，肝組織勻漿MDA水平均明顯降低（P＜0.01），肝組織勻漿SOD及GSH水平均明顯升高（P＜0.01）。病理學檢查可見TBIS組肝組織形態(tài)明顯受損，SST治療組肝組織受損較小。結論SST干預可抑制氧自由基產生及促炎細胞因子的釋放，從而減輕TBIS大鼠繼發(fā)性肝損傷。

顱腦損傷；休克；肝損傷；生長抑素

顱腦損傷伴失血性休克（TBIS）病情兇險、并發(fā)癥多見，是臨床上常見的危重癥之一，救治難度大，預后較差，而過度炎癥反應是引起機體二次損傷的重要原因［1］。在TBIS進展過程中，肝的損傷對患者的預后起著非常重要的作用。因此，如何抑制過度炎癥反應，減輕肝的損傷，對改善患者預后具有重要的意義。有研究證實生長抑素（SST）能夠抑制免疫過度激活，減輕炎癥反應［2，3］。

本研究對TBIS大鼠進行SST干預，檢測血清腫瘤壞死因子（TNF）-α、丙氨酸轉氨酶（ALT）、天冬氨酸轉移酶（AST）、肝組織超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及谷胱甘肽（GSH）的水平，并觀察肝組織病理學改變，旨在探討SST對TBIS大鼠肝損傷的保護作用及可能機制。

1　材料與方法

1.1實驗動物分組清潔級雄性Wistar大鼠36只，體重220～250 g，由山東大學醫(yī)學院實驗動物中心提供，實驗前8 h禁食。按隨機數(shù)字表法分成假手術組（C組）、TBIS模型組和SST干預組，每組12只。

SST干預組于模型制成后0.5、1、2 h皮下注射SST（注射用SST由瑞士默克雪蘭諾公司生產），給予量為20 μg/kg體重。C組及TBIS組皮下注射等量生理鹽水。

本研究動物處置方法符合動物倫理學標準。

1.2動物模型制備大鼠實驗前禁食12 h，不禁水。采用自由落體復制顱腦外傷合并休克模型［1］。假手術組僅開顱窗后骨蠟封閉骨窗，不予以打擊及放血。在各組模型制成120 min后快速從頸動脈采血，處死取肝組織。

1.3標本留取及指標測定

1.3.1血清TNF-α、ALT及AST水平測定取血2 ml，室溫放置30 min，離心取上清。以酶聯(lián)免疫吸附法測定TNF-α，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。用Olympus AU2700全自動生化分析儀測定ALT及AST活性，試劑盒由上海申能-德賽有限公司提供。

1.3.2肝組織MDA、SOD及GSH水平測定取肝組織，立即置于-70℃低溫冰箱保存。以硫代巴比妥酸法測定MDA，以黃嘌呤氧化酶法測定SOD，以二硫代硝基苯甲酸比色法測定GSH，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.3.3肝組織形態(tài)學觀察取肝組織1 cm×1 cm× 1 cm，用10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片，用HE染色，在光鏡下觀察肝組織形態(tài)學改變。

1.4統(tǒng)計學處理采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件包進行分析。計量資料以均數(shù)±標準差表示，多組間比較采用方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1血清TNF-α、ALT及AST水平比較TBIS組血清TNF-α、ALT及AST水平明顯高于C組（P＜0.01）；SST干預組與TBIS組比較，SST干預組血清TNF-α、ALT及AST水平明顯降低（P＜0.01）。見表1。

表1　血清TNF-α、ALT及AST水平比較

表1　血清TNF-α、ALT及AST水平比較

注：與C組比較，＊P＜0.01；與TBIS組比較，#P＜0.01

組別TNF-α（ng/ml）ALT（U/L）AST（U/L）C組68.4±13.529.1±6.339.1±8.3 TBIS組309.7±36.1＊194.9±13.4＊217.7±22.1 SST干預組210.4±37.8＊#138.2±12.9＊#155.1±27.2

2.2肝組織MDA、SOD及GSH活性比較TBIS組肝組織勻漿MDA活性明顯高于C組（P＜0.01），SOD及GSH活性均低于C組（P＜0.01）。與TBIS組比較，與SST干預組肝組織勻漿MDA活性顯著降低（P＜0.01），SOD及GSH活性均明顯升高（P＜0.01）。見表2。

2.3肝組織病理形態(tài)學比較光鏡下觀察，對照組大鼠肝細胞結構正常，排列整齊，肝竇內無明顯炎性細胞浸潤。而TBIS組可見肝細胞結構紊亂，肝竇擴張，肝竇內有較多中性粒細胞浸潤，部分肝細胞變性、壞死。SST干預組肝組織破壞較輕，肝小葉結構尚清晰，肝竇內中性粒細胞浸潤較少。

表2　肝組織MDA、SOD及GSH活性比較

表2　肝組織MDA、SOD及GSH活性比較

注：與C組比較，＊P＜0.01；與TBIS組比較，#P＜0.01

組別MDA（nmol/mg pro）SOD（U/mg pro）GSH（mg/g pro）C組3.59±0.8732.51±8.04398.2±58.7 TBIS組7.13±1.62＊16.02±4.91＊211.7±52.9＊SST干預組4.82±1.07＊#24.55±5.14＊#296.2±64.3＊#

3　討論

顱腦損傷伴失血性休克（TBIS）病情兇險、并發(fā)癥多見，是臨床上常見的危重癥之一，救治難度大，預后較差。在TBIS進展過程中，肝的損傷對患者的預后起著非常重要的作用。因此，如何抑制過度炎癥反應，減輕因過度炎癥反應所引起的機體二次損傷，減輕肝的損傷，對改善患者預后具有重要的意義。

生長抑素（SST）是一種廣泛存在于胃腸道、腦、內外分泌腺等組織的環(huán)狀多肽，通過與細胞膜上的SST受體結合而發(fā)揮多種生物學效應。有研究證實，SST能夠抑制免疫過度激活，減輕炎癥反應［3，4］。本研究應用SST對TBIS大鼠進行干預，通過檢測血清TNF-α、ALT及AST和肝組織MDA、SOD及GSH的水平變化，光鏡下觀察肝組織病理改變，探討SST干預對TBIS所致肝損傷的影響。

本研究中TBIS大鼠組織病理學鏡檢可見肝竇擴張、瘀血明顯，肝竇內有較多中性粒細胞浸潤，肝小葉結構紊亂，部分肝細胞變性、壞死；血清ALT及AST活性均明顯升高，說明TBIS大鼠肝臟組織形態(tài)及肝功能均出現(xiàn)明顯的損害。而SST干預組肝組織結構尚清晰，肝竇內有散在的中性粒細胞浸潤，肝組織破壞較輕，血清ALT及AST活性明顯下降。說明在TBIS早期，肝臟組織結構遭受破壞，急性肝損傷表現(xiàn)明顯，而SST干預能有效減輕肝組織的損傷。

在TBIS進展過程中生物膜脂質過氧化或氧應激損傷引起多種炎癥介質的釋放，是促進休克惡化，誘發(fā)“炎性瀑布”發(fā)生的重要因素之一。SOD、MDA及GSH是目前公認的能較好地反映機體內氧自由基及脂質過氧化損傷程度和機體對氧自由基清除能力的間接指標。TNF-α是多種炎癥介質復合網(wǎng)中的中心因子，是引起多種促炎細胞因子和炎癥介質失控性釋放的關鍵因素，其除直接損失組織細胞外，還進一步活化炎性細胞，形成復雜的網(wǎng)絡系統(tǒng)，產生炎癥瀑布效應，引起多器官功能損傷。

本研究結果顯示，TBIS組肝組織勻漿MDA活性和血清TNF-α的水平均高于對照組，SOD及GSH活性均低于對照組。說明在TBIS早期，肝組織即發(fā)生了較強的脂質過氧化，并產生大量氧自由基。而SOD水平的降低使得機體對氧自由基的清除能力下降，并可進一步造成機體的氧化與抗氧化平衡體系被打破，導致肝組織中大量脂質過氧化終產物的蓄積，引起急性肝損傷的發(fā)生。與TBIS組比較，SST干預組肝組織勻漿MDA活性和血清TNF-α的水平均降低，肝組織勻漿SOD及GSH活性均升高。說明SST干預，能明顯降低TNF-α及氧自由基的產生，有效增強機體的抗氧化水平，從而減輕肝組織的脂質過氧化損傷。

總之，SST干預可有效降低TBIS大鼠的脂質過氧化水平，增強清除氧自由基的能力，減輕炎癥反應，對TBIS所致肝損傷具有保護作用。

［1］許會彬，王青，王化芬，等.ω-3 PUFA對顱腦損傷伴休克大鼠繼發(fā)性肝損傷的保護作用［J］.中華急診醫(yī)學雜志，2013，22 （12）：1104-1107.

［2］徐麗艷，劉瑤，韓文文，等.生長抑素對內毒素致小鼠急性肺損傷中炎癥反應的影響和機制［J］.中華危重病急救醫(yī)學，2014，26（05）：315-320.

［3］王文進，邵莉莉，顏加云，等.大黃聯(lián)合生長抑素治療急性重癥胰腺炎的系統(tǒng)評價［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志，2014，23（01）：31-35.

［4］瞿星光，張朝暉，周剛，等.生長抑素與前列腺素E1聯(lián)合應用治療重癥急性胰腺炎初步臨床研究［J］.重慶醫(yī)學，2014，43 （01）：79-82. ［2015-04-27收稿，2015-05-25修回］

［本文編輯：韓仲琪］

Protective effects of somatostatin on liver injury in rats with traumatic brain injury complicated with hemorrhagic shock

WANG Li，WANG Hua-wei，LI Rui.Department of Special Examination，the 456th Hospital of Chinese PLA，Jinan，Shandong 250031，China

ObjectiveTo investigate the effects of preconditioning with somatostatin（SST）on liver injury in rats with traumatic brain injury complicated with hemorrhagic shock（TBIS）and its underlyingmechanisms. MethodsThe 36 male Wistar rats of clean grade were assigned randomly into 3 groups：sham operation group （C），TBIS model group and SST pretreatment group，each group included 12 rats.The arterial blood samples were taken for determination of serum levels of TNF-α，ALT and AST.The liver were removed for determination of levels of malondialdehyde（MDA），superoxide dismutase（SOD）and glutathione（GSH）.Pathological changes in liver tissues were observed by light microscope.ResultsCompared with group C，the serum levels of TNF-α，ALT and AST and the liver levels of MDA were significantly higher（P＜0.01），but the liver levels of SOD and GSH in group TBIS（P＜0.01）.The serum levels of TNF-α，ALT and AST and the liver levels of MDA were significantly lower（P＜0.01），but the levels of SOD and GSH in liver tissues were significantly higher（P＜0.01）in group SST than those in group TBIS.Histological examination revealed the injury of liver in TBIS group，and the rats in SST treated group showed alleviated severity of liver injury.ConclusionThe supplementation of SST can ameliorate liver injury in rats with TBIS which may contribute to the inhibition of peroxide injury and oxygen free radicals.

Traumatic brain injury；Shock；Liver injury；Somatostatin

R683.5

A