磷酸伯氨喹原料及片劑中主要雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)鑒定

李玉鳳，林春燕，任杰紅，張赟華*（云南省食品藥品檢驗所，云南 昆明 650011）

磷酸伯氨喹原料及片劑中主要雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)鑒定

李玉鳳，林春燕，任杰紅，張赟華*
（云南省食品藥品檢驗所，云南 昆明 650011）

采用LC-MS 聯(lián)用技術(shù)進行鑒定；利用半制備高效液相色譜從磷酸伯氨喹原料中分離制備該雜質(zhì)，進一步采用核磁技術(shù)進行結(jié)構(gòu)確證。得到了磷酸伯氨喹原料的1個主要雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)確證結(jié)果，對磷酸伯氨喹原料的雜質(zhì)分析、質(zhì)量控制和生產(chǎn)工藝的改進具有重要作用。

磷酸伯氨喹原料；磷酸伯氨喹片劑；雜質(zhì)結(jié)構(gòu)；液質(zhì)聯(lián)用；半制備高效液相色譜；核磁鑒定

0 引言

伯氨喹由Elderfield于1946年化學合成，并于1955年改良工藝，其成鹽形式有磷酸鹽與草酸鹽兩種，主要應用形式為磷酸伯氨喹，其藥用價值很快被發(fā)現(xiàn)并應用于臨床，作為抗瘧藥載入英美藥典。磷酸伯氨喹于《中國藥典》1963年版首次收載，此后每版《中國藥典》均收載了該品種。磷酸伯氨喹包括美國藥典規(guī)定的對照品中都含有明顯的特殊雜質(zhì)，但《中國藥典》2010年版二部酸伯氨喹原料項下僅用薄層色譜法來控制雜質(zhì)總量，未控制特殊雜質(zhì)的限量。國內(nèi)外文獻有過對此雜質(zhì)的一些結(jié)構(gòu)推測，國內(nèi)認為是光學異構(gòu)體，國外文獻有的認為是叔氨喹，有的認為是異伯喹。但都未做結(jié)構(gòu)鑒定，只有推測。本文采用液相色譜-質(zhì)譜（HPLC-MS）聯(lián)用技術(shù)對該雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)進行初步分析，并進一步利用半制備高效液相色譜從磷酸伯氨喹原料中分離制備該雜質(zhì)，采用核磁技術(shù)進行了結(jié)構(gòu)確證，從而為磷酸伯氨喹的質(zhì)量控制、生產(chǎn)工藝的改進提供依據(jù)，圖1 為磷酸伯氨喹的化學結(jié)構(gòu)

圖1 磷酸伯氨喹的化學結(jié)構(gòu)

1　儀器與試藥

Waters e2695高效液相色譜儀，Agilent 1200高效液相色譜儀，waters質(zhì)譜儀，waters半制備液相色譜儀，avance核磁共振波譜儀，mettler電子天平。

甲醇（ 色譜純，Merck 公司） ，超純水，甲酸，磷酸伯氨喹對照品（usp），3批磷酸伯氨喹片樣品收集自1個廠家，4批磷酸伯氨喹原料收集自2個廠家。

2　磷酸伯氨喹的雜質(zhì)考察

2.1常規(guī)液相色譜法

2.1.1色譜條件

圖2 磷酸伯氨喹對照品色譜圖

圖3 磷酸伯氨喹樣品色譜圖（12批次樣品的色譜圖）

2.1.2溶液的制備

原料藥：精密稱取磷酸伯氨喹原料20mg，置50mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理使其溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

磷酸伯氨喹片：取該品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于磷酸伯氨喹10mg）置50mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理使其溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

另取磷酸伯氨喹對照品適量，加流動相制成每1 mL 中約含0.2mg的溶液，搖勻即得。

2.1. 3 雜質(zhì)的考察與結(jié)果

以“2.1. 2”項下方法對3 批次磷酸伯氨喹片、4批次磷酸伯氨喹原料進行雜質(zhì)考察，發(fā)現(xiàn)在7 批次樣品的色譜圖中，有一主成分峰，主峰前有一共同明顯的雜質(zhì)峰，稱其為雜質(zhì)1。以購買到的磷酸伯氨喹對照品進樣，也有同樣的兩個峰，如圖2和圖3所示。

2.2液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用法

液相條件：Waters e2695高效液相色譜儀，采用3.5μm，4.6×150mm Waters SunFire的C18色譜柱；以戊烷磺酸鈉溶液—甲醇（50∶50）為流動相；流速為0.5mL/min，檢測波長為264nm。

式(10)表示根據(jù)zn,p,h,kn,p,f,wn,p計算每一個分塊p與芯片f分區(qū)交集數(shù)值上限，式(11)規(guī)約分塊p在左右兩側(cè)與f分區(qū)部分相交時重疊區(qū)域的范圍.

質(zhì)譜條件：離子源為ESI，質(zhì)量分析器為四極桿飛行時間，正離子檢測模式，離子掃描范圍m/ z 50～ 1500，離子源前進樣分流比為3∶ 1。離子源參數(shù)：毛細管電壓3. 5 kV，噴霧電壓0. 31 MPa，脫溶劑氣（ N2） 流量為10 L·min - 1，干燥氣溫度350 ℃，碎裂電壓120 V，碰撞能量15 eV。

溶液制備同2.1.2項下。

結(jié)果：雜質(zhì)1與主成分2個組分結(jié)構(gòu)不同，見圖4，圖5。

圖4 雜質(zhì)1的質(zhì)譜圖

圖5 磷酸伯氨喹（主峰）的質(zhì)譜圖

3　雜質(zhì)1的分離與結(jié)構(gòu)鑒定

3.1雜質(zhì)1的分離

利用制備液相色譜法進行雜質(zhì)1分離。Agilent 1200液相色譜儀，采用Agilent ZORBAX StableBond C18 規(guī)格： 250mm*9.4mm*5um色譜柱，以40%甲醇-0.5%甲酸水為流動相，流速1. 0 mL·min - 1，檢測波長264nm，進樣量50μl。

取磷酸伯氨喹原料制成100mg/mL的溶液按上述色譜條件進行雜質(zhì)1的分離，并進行純化，得到純度大于98%的單體化合物20mg。

3.2雜質(zhì)1的結(jié)構(gòu)鑒定

雜質(zhì)1通過MS、1H-NMR、13C-NMR及二維核磁進行結(jié)構(gòu)分析與確認，得知雜質(zhì)1為異伯喹（8-［（4-aninopentyl）anio］-6-methoxyquinoline），結(jié)構(gòu)如圖6所示。

圖6雜質(zhì)1 異伯喹（8-［（4-Aminopentyl）amino］-6-methoxyquinoline）的化學結(jié)構(gòu)圖

雜質(zhì)1（異伯喹）1H-NMR（400MHz， C5D5N）：

8.67（1H， d， J=2.8Hz， H-2’）， 8.03（1H， dd，J=8.0，1.2Hz， H-4’）， 7.32（1H， dd， J=8.0， 2.8Hz，H-3’），6.74（1H， t，J=4.8Hz， 1-H）， 6.60（1H， d，J=2.4Hz，HHH H-7’）， 6.55（1H， d， J=2.4Hz， H-5’），3.81（3H， s， OCH3），3.25（2H， m， H-2），2.84（1H， m，H-5），1.73（2H， m， H- 3）， 1.39（2H，m，H-4）， 1.00（3H，d， J=5.6Hz， H-6）.

雜質(zhì)1（異伯喹）13C-NMR（100MHz， D2O）： δ

160.0（C-6’），149.9（C-8’）， 146.4（C-9’），144.4（C-2’）， 134.8（C-4’）， 130.2（C-10’），122.1（C-3’）， 96.7（C-7’）， 92.0（C-5’），55.0（OCH3）， 47.0（C-5）， 43.4（C-2）， 37.8（C-4），26.0（C-3）， 24.3（C-6）.

4　雜質(zhì)的來源分析

雜質(zhì)異伯喹可能是由肼解反應的原料丁胺喹啉的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體，在生成游離伯喹時同時產(chǎn)生反應生成的，見圖7。

5　討論

1）本文的研究確定了伯氨喹原料及制劑中的雜質(zhì)1為8-［（4-Aminopentyl）amino］-6-methoxyquinoline（異伯喹），而不是磷酸伯氨喹的光學異構(gòu)體也不是叔氨喹。

圖7 雜質(zhì)來源分析圖

2）對雜質(zhì)1（異伯喹）的來源進行了推測，異伯喹可能是由肼解反應的原料丁胺喹啉的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體，在生成游離伯喹的時候同時產(chǎn)生反應生成的。要想控制雜質(zhì)1異伯喹的量，必須對肼解反應的原料丁胺喹啉的質(zhì)量進行控制。

3）在美國藥典對照品中也檢出了此雜質(zhì)，說明在現(xiàn)有條件下無法回避異伯喹雜質(zhì)的產(chǎn)生。

R927

B

1004-1168（2015）03-0067-04

2015-04-03

李玉鳳（1980-），女，云南昆明人，主管藥師，主要從事化學藥品的質(zhì)量檢驗、藥品標準起草和藥品的產(chǎn)品質(zhì)量評價研究工作。