五汁飲對酒精性肝、胃組織形態(tài)學的影響

馮楚雄，朱建平，瞿昊宇，謝夢洲，*，肖作為*，向 茗1，2，（1.湖南中醫(yī)藥大學中醫(yī)診斷研究所，湖南 長沙 410208;2.湖南中醫(yī)藥大學中醫(yī)診斷學湖南省重點實驗室，湖南 長沙 410208；.湖南省藥食同源功能性食品工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙 410208）

五汁飲對酒精性肝、胃組織形態(tài)學的影響

馮楚雄1,2，朱建平1,2，瞿昊宇3，謝夢洲1,2，3*，肖作為3*，向 茗1，2，3
（1.湖南中醫(yī)藥大學中醫(yī)診斷研究所，湖南 長沙 410208;2.湖南中醫(yī)藥大學中醫(yī)診斷學湖南省重點實驗室，湖南 長沙 410208；3.湖南省藥食同源功能性食品工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙 410208）

目的觀察五汁飲對急性酒精性肝細胞損傷、胃黏膜損傷的保護作用。方法SD大鼠分為5組，分別為空白組，模型組，葛花組，五汁飲低劑量組及高劑量組。預(yù)防性給藥后，空白對照組蒸餾水灌胃，其余各組按照1.5 mL/100 g的高度酒（酒精度52%）給予灌胃，連續(xù)1周，觀察并比較各組肝、胃的損傷情況。結(jié)果五汁飲低劑量組胃黏膜損傷指數(shù)低于模型組（P＜0.05），五汁飲高劑量組胃黏膜損傷指數(shù)顯著低于模型組（P＜0.01）；HE染色結(jié)果顯示，五汁飲可減輕酒精性肝細胞損傷及胃黏膜損傷，五汁飲高劑量組作用更明顯。結(jié)論五汁飲可以改善急性酒精性肝細胞損傷、胃黏膜損傷，具有保肝護胃作用。

五汁飲；酒精性肝損傷；酒精性胃黏膜損傷；蘇木精-伊紅染色；梨；荸薺；藕

長期飲酒可引起精神障礙、胃潰瘍以及脂肪肝和酒精性肝炎和肝硬化等疾病，長期飲酒會導(dǎo)致胃癌、肝癌[1]。五汁飲出自吳鞠通《溫病條辨》，由鮮梨汁、鮮荸薺汁、鮮蘆根汁、鮮麥冬汁和鮮藕汁組成，其中，鮮梨汁清熱化痰，潤燥生津；鮮荸薺潤肺養(yǎng)胃、清熱化痰；鮮藕汁清熱生津；蘆根汁生津除煩，清熱止嘔；麥冬汁滋肺養(yǎng)胃，生津潤燥；五味共奏清熱養(yǎng)陰，生津止渴之功，可以改善酒醉引起的口渴、嘔逆，頭痛等癥狀。本實驗通過觀察五汁飲對酒精性肝、胃損傷組織形態(tài)學的影響，探討五汁飲對酒精性肝胃損傷的保護作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 五汁飲：取梨200 g，荸薺500 g，藕500 g，蘆根50 g，麥冬25 g。梨、荸薺、蓮藕洗凈去皮，榨汁，過濾，得混合的新鮮汁液500 mL。蘆根、麥冬放入鍋內(nèi)，加入1 L水，煮沸5 min后，改文火煎煮30 min，濾過，濾液濃縮至135 mL，冷卻至室溫后合并混合的新鮮汁液，得2.0 g/mL濃縮液，密封，放入4℃冰箱冷藏備用。

陽性對照藥葛花濃縮液：取葛花50 g，加入500 mL水，煮沸后改文火煮10 min，濾過，重復(fù)煎煮一次，合并兩次濾液，將濾液濃縮為0.5 g/mL濃縮液，密封，放入4℃冰箱冷藏備用。

1.1.2 動物 SPF級SD大鼠50只，雄性，體質(zhì)量（200±20）g，由湖南中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供。

1.2 方法

1.2.1 動物分組與處理 實驗動物按照隨機數(shù)字表法分成空白對照組、模型組、五汁飲低劑量組、五汁飲高劑量組、葛花組。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，各組大鼠禁食10 h，不禁水，空白組、模型組給予蒸餾水灌胃，五汁飲低劑量組、高劑量組以五汁飲灌胃，給藥劑量分別為23.0、46.0 g/kg，葛花組給予葛花水煎液0.15 g/kg。各組給藥容量為 10 mL/kg。給藥30 min后，空白對照組蒸餾水灌胃，其余各組按照1.5 mL/100 g的高度酒（酒精度52%）給予灌胃，每天一次，連續(xù)1周。末次給藥2 h后進行標本采集。

1.2.2 胃、肝標本采集 用 10%水合氯醛40 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，打開腹腔，暴露肝臟和胃。取出胃，沿胃大彎剪開，用0.9%生理鹽水沖去胃內(nèi)容物后展平，記錄肉眼可見胃黏膜改變，并計算胃黏膜損傷指數(shù)。在胃黏膜損傷明顯處，剪取1.0 cm×1.0 cm大小的組織，置于4%多聚甲醛中固定24 h。每只大鼠選取同一片肝臟同一位置1.5 cm×1.5 cm大小的組織，置于4%多聚甲醛中固定24 h。標本常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察肝臟、胃黏膜形態(tài)學變化（由湖南中醫(yī)藥大學病理實驗室協(xié)助完成）。

1.2.3 觀察指標 肝臟病理學觀察：肝臟有無肝細胞脂變、壞死；肝小葉及門管區(qū)有無炎癥，肝組織內(nèi)有無纖維組織增生，肝細胞病變范圍的大小。參考趙敏等[2]的方法對肝細胞病變進行分級：0級表示肝細胞無病變或變性范圍小，基本正常；I級表示病變的肝細胞不超過1/4；II級表示病變的肝細胞不超過1/2；III級表示病變的肝細胞不超過3/4；IV級表示肝組織幾乎都發(fā)生病變。胃黏膜損傷指數(shù)評定：肉眼觀察胃黏膜改變，按潰瘍指數(shù)[3]評定改良法計算損傷指數(shù)，具體評分如下：完整的胃黏膜為0分；黏膜充血水腫，散在出血點，點狀出血直徑≤1 mm，1～5點為1分；＞5點為2分；糜爛（出血直徑≤5 mm）1處為3分；條索狀出血（出血直徑≥5 mm）1處為5分。以全胃病灶得分總和作為動物胃黏膜損傷指數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 五汁飲對酒精性肝損傷的影響

表1 大鼠肝臟病理變化結(jié)果（n=10)

如表1所示，給藥后各組肝損傷比較有顯著差異（χ2=29.756，P＜0.01），提示酒精對肝臟具有損傷作用，急性酒精性肝損傷模型制備成功。模型組、葛花組、五汁飲低劑量組、五汁飲高劑量組的大鼠肝細胞有不同程度的病理改變（χ2=7.998，P＜0.05）。與模型組相比，葛花組、五汁飲高劑量組肝損傷程度均有統(tǒng)計學差異Z=－2.565，P＜0.05），五汁飲低劑量組無統(tǒng)計學差異Z=－1.362，P＞0.05）。葛花組與五汁飲高劑量組比較，無統(tǒng)計學差異W=105.000，Z=0.000，P＞0.05）。提示葛花組、五汁飲高劑量組的肝損傷比模型組輕，葛花、五汁飲高劑量對于酒精性肝損傷有一定改善作用，五汁飲改善酒精性肝損傷與給藥劑量有關(guān)。

2.2 五汁飲對胃黏膜損傷指數(shù)的影響

空白組大鼠均未見胃黏膜損傷，黏膜呈淡紅色，損傷指數(shù)為0。與空白組相比，其余各組酒精灌胃均出現(xiàn)不同程度的胃黏膜損傷（P＜0.01），肉眼可見黏膜充血，散在出血點，糜爛甚至條索狀出血。其中，模型組黏膜充血明顯，多見條索狀出血，葛花組、五汁飲低劑量組、五汁飲高劑量組主要是點狀出血為主，偶見糜爛、條索狀出現(xiàn)的現(xiàn)象。各組胃黏膜損傷指數(shù)統(tǒng)計結(jié)果顯示，與模型組相比，葛花組、五汁飲低劑量組的胃黏膜損傷指數(shù)有統(tǒng)計學差異 （P＜0.05），五汁飲高劑量具有顯著統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。提示葛花、五汁飲都能改善酒精性胃損傷，且五汁飲高劑量改善作用明顯。見表2。

表2 大鼠胃黏膜損傷指數(shù)統(tǒng)計結(jié)果 （±s,n=10)

表2 大鼠胃黏膜損傷指數(shù)統(tǒng)計結(jié)果 （±s,n=10)

注：與空白組相比，△P＜0.01；與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

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2.3 光鏡下肝臟病理組織觀察

如圖1所示，空白組肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，細胞核明顯，結(jié)構(gòu)正常。模型組、葛花組、五汁飲低劑量組、五汁飲高劑量組的肝細胞出現(xiàn)不同程度的水腫，表現(xiàn)為細胞染色不均，胞質(zhì)疏松化和氣球樣變，肝細胞腫大，排列紊亂，肝竇受壓變窄，并伴有炎癥細胞浸潤 （見圖1）。此外，模型組有1例出現(xiàn)脂肪變，HE染色不均，肝細胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大小不等的脂肪滴，有些細核被擠向一邊（見圖1.E）；模型組1例出現(xiàn)肝細胞壞死，大量炎癥細胞浸潤（見圖1.F）。總體上看，葛花組、五汁飲高劑量組相對模型組損傷程度輕。

2.4 光鏡下胃黏膜病理觀察

光鏡下可見空白組大鼠胃黏膜上皮完整，連續(xù)性好，腺體排列整齊，黏膜層組織結(jié)構(gòu)層次清楚。其余各組可見不同程度的胃黏膜受損，表現(xiàn)為黏膜上皮細胞受損脫落，黏膜上皮變薄、充血，壁細胞水腫，分泌物增多，毛細血管增生，黏膜層壞死，炎癥細胞浸潤。模型組見黏膜上皮細胞壞死脫落，排列稀疏，胃小凹結(jié)構(gòu)破壞，胃腺充血壞死，伴有大量炎癥細胞浸潤（見圖2.K-L）。與模型組相比，葛花組、五汁飲低劑量組、五汁飲高劑量組胃黏膜損傷程度明顯較輕，光鏡下可見胃黏膜有少量充血，以散在呈點狀充血為主，少量炎細胞浸潤，黏膜上皮細胞輕度脫落，胃小凹結(jié)構(gòu)完整，局部可見壁細胞輕度變性水腫。見圖2。

圖1 各組大鼠肝臟病理形態(tài)學光鏡圖（HE染色，×400）

圖2 各組大鼠胃黏膜病理形態(tài)光鏡圖（HE染色，×400）

3 討論與結(jié)論

酒精從口腔進入人體后，經(jīng)胃和腸道吸收后通過血液循環(huán)進入肝臟，有90%～95%的酒精在肝臟代謝。酒精的主要成分之乙醇，乙醇在乙醇脫氫酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)橐胰?，乙醛在乙醛脫氫酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)橐宜?，繼而轉(zhuǎn)變?yōu)橐阴］o酶A參與機體的物質(zhì)代謝，最后氧化為二氧化碳和水排出體外。

由于乙醇分子中既有疏水性的烴基，又含親水性的羥基，故可以破壞黏膜的防御系統(tǒng)，使胃腸黏膜極易遭受胃酸、各類消化酶、膽汁等的侵襲，進而引起黏膜組織水腫、糜爛、甚至出血、壞死，臨床上經(jīng)常表現(xiàn)為腹部燒灼樣痛，胃部不適，甚至出現(xiàn)嘔吐、嘔血、便血等癥狀[4]。目前研究認為酒精性胃黏膜損害可能與下列因素有關(guān)：（1）乙醇對胃黏膜上皮細胞的直接損傷，破壞胃黏膜屏障的結(jié)構(gòu)和功能，使胃內(nèi)H+反滲增加，進而加重胃黏膜損傷；（2）乙醇可引起黏膜下血管內(nèi)皮損傷，使血管擴張，小血管破裂、黏膜下出血等改變，進一步破壞黏膜屏障；（3）由于黏膜上皮和血管內(nèi)皮損傷產(chǎn)生大量炎癥介質(zhì)，引起中性粒細胞浸潤，進一步加重黏膜損害；（4）乙醇可刺激胃酸分泌；（5）乙醇可使前列腺素E2(PGE2)、內(nèi)源性一氧化氮（NO）合成和釋放減少，進而減少PGE2、NO對胃黏膜的保護作用[5]；（6）乙醇的代謝產(chǎn)物乙醛可生成氧自由基導(dǎo)致胃黏膜損傷[6]。

酒精對肝的損傷主要是其代謝產(chǎn)物乙醛引起的。乙醛易在肝中堆積，乙醛是肝毒性物質(zhì).可引起肝細胞壞死，包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝硬化乃至肝癌。乙醛對肝功能損傷的機理：（1）干擾線粒體氧化磷酸化和電子傳遞系統(tǒng)；（2）通過黃嘌呤氧化酶產(chǎn)生超氧離子，使脂質(zhì)過氧化，破壞細胞膜，氧化應(yīng)激反應(yīng)還會導(dǎo)致線粒體功能障礙、脂質(zhì)沉積、炎癥、凋亡等[7]；（3）使微管蛋白解聚，細胞內(nèi)蛋白質(zhì)和水分滯留，細胞腫脹，繼而壞死[8-9]；（4）乙醛可與肝細胞膜結(jié)合形成新抗原，產(chǎn)生相應(yīng)抗體，從而觸發(fā)自身免疫反應(yīng),導(dǎo)致肝臟的免疫損傷[10]；（5）乙醛通過促進肝星狀細胞產(chǎn)生膠原，從而導(dǎo)致酒精性肝纖維化和肝硬化形成[11]。

本實驗結(jié)果顯示，五汁飲、葛花均能減輕酒精所致的肝損傷、胃黏膜損傷，五汁飲改善急性酒精性肝胃損傷，與低劑量組相比，高劑量組肝胃損傷比低劑量組輕，改善作用比低劑量組明顯。在改善酒精性肝損傷方面，五汁飲高劑量組與葛花組改善的效果都能減輕肝細胞損傷，而低劑量組改善作用并不明顯。在改善酒精性胃黏膜損傷方面，五汁飲高劑量組效果顯著，低劑量組及葛花組也能減輕酒精對胃黏膜的損傷。

五汁飲的組成成分蓮藕、荸薺、梨、麥冬、蘆根，具有清熱生津的功效，此外，鮮蓮藕還具有涼血化瘀的功效，現(xiàn)代醫(yī)學研究表明，蓮藕所含的鞣酸有收縮血管和止血的作用[12]，這對于酒精所致的胃黏膜充血、糜爛具有一定的改善作用。蘆根中的蘆根多糖具有抗肝纖維化作用[13]，并能夠增加GSH的含量，增強機體細胞的防御和解毒作用，降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量，從而減輕有害物質(zhì)對肝臟的損傷[14]，這些可能是五汁飲保肝護肝的物質(zhì)基礎(chǔ)。此外，與葛花（湯）相比，五汁飲富含糖類、淀粉等，飲用后需要消化吸收的時間長，在一定程度上可以減少酒精的吸收，從而減少酒精對胃、肝臟的損傷。綜上所述，五汁飲保肝、護胃作用可能與其組分抗氧化、抗自由基作用或減少酒精吸收有關(guān)。

[1]李 楊,鞠玉林,齊 林,等.中藥復(fù)方熊膽解酒汁對小鼠酒精性肝胃損傷的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2009,37(2):608-610.

[2]趙 敏,池莉平,王鳳巖,等.小鼠急性酒精性肝損傷模型的建立及應(yīng)用[J].華南預(yù)防醫(yī)學,2005,31(1):14-17.

[3]甘愛萍,胡曉英,陳宏慈.酒客樂對酒精性胃黏膜損傷的療效及其機制的探討[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2012,20(1):18-22.

[4]陳韶華,厲有名.酒精性胃黏膜損傷的研究進展[J].國際消化病雜志,2006,26(4):249-250.

[5]羅永祥.乙醇對胃黏膜損傷的機制研究概況[J].西南軍醫(yī),2011,13 (1):122-123.

[6] Yoshimura T, Sugata H. Alcohol scavenges nitric oxide in gastric lumen[J].Nitric Oxide,2002,6:347-352.

[7] Levene AP, Goldin RD. The epidemiology, pathogenesis and histopathology of fatty liver disease [J].Histopathol,2012, 61(2):141-152.

[8]SubirKD,Vasudevan DM.Alcohol-induced oxidativestress [J].Life sciences,2007,81(2):177-187.

[9]Lu Y,Wang X,Cederbaum AI.Lipopolysaccharide-induced liver injury in rats treated with the CYP2E1 inducer pyrazole[J].Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2005,289(2):308-319.

[10]邱 萍,李 相,孔德松,等.酒精性肝病發(fā)病機制研究的新進展[J].中國藥理學通報,2014,30(2):160-163.

[11]劉國紅,李 麗,李 錦,等.酒精性肝病發(fā)病機制的研究進展[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學,2009,36(22):4 355-4 356.

[12]李 泱.蓮藕藕節(jié)鞣質(zhì)提取純化及其抗氧化活性研究[D].武漢:華中農(nóng)業(yè)大學,2013.

[13]李立華,韓光磊,高家榮,等.蘆根多糖對免疫性肝纖維化大鼠TGF-β/Smads信號通路的影響[J].中國中醫(yī)藥科技,2011,18(3): 206-208.

[14]王 珍,尤其嘉,楊靖亞,等.蘆根多糖對鎘中毒小鼠肝腎組織損傷的保護作用[J].食品工業(yè)科技,2013,34(2):349-352.

（本文編輯 楊 瑛）

Effect of Wuzhiyin on the Cell Morphology of Alcoholic Hepatocytes and Gastric Mucosal Cells

FENG Chuxiong1,2,ZHU Jianping1,2,QU Haoyu3,XIE Mengzhou1,2*,XIAO Zuowei3*,XIANG Ming1,2,3
（1.Institute of TCM Diagnostics,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China；2.Hunan Key Laboratory of TCM Diagnostics,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China 3.Hunan Engineering Research Center of Drug and Food Homology Functional Food,Changsha,410208,China）

ObjectiveTo observe the protective effect of Wuzhiyin on acute alcoholic liver injury and gastric mucosal injury.MethodsSD ratswererandomlydivided intonormalgroup,modelgroup,Gehuagroup,low dosegroup of Wuzhiyin,high dose group of Five Juice Drink.After prophylactic administration of medicine,the blank control group was given distilled water by gavage,other groups were given 1.5 mL/100 g wine(alcohol 52%)for one week by gavage,and the injury of liver and gastric mucosa in each group were observed.ResultsThe gastric mucosal lesionindex of low dose group of Wuzhiyin was lower than that of model group (P＜0.05),and the high dose group of Wuzhiyin was also lower than that of model group (P＜0.01).The results of HE staining showed that Wuzhiyin could reduce the damage of alcohol induced liver injury and gastric mucosal injury,and the effect of high dose group of Wuzhiyin was more obvious.ConclusionWuzhiyin can improve the acute alcoholic liver injury,gastric mucosal injury,show protective effect on stomach.

Wuzhiyin;alcoholic liver injury;alcoholic gastric mucosal injury;hematoxylin-eosin staining;pear;water chestnut;lotus root

R575.5

A

doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2015.12.014

2015-10-30

湖南省教育廳創(chuàng)新平臺基金資助（12K083）；湖南中醫(yī)藥大學中醫(yī)診斷學國家重點學科開放基金資助（2014-27）。

馮楚雄，女，在讀碩士研究生，研究方向：常見疾病中醫(yī)藥膳防治。

*謝夢洲，女，教授，碩士研究生導(dǎo)師；E-mail：xiemz@163.com。肖作為，男，講師，E-mail:574512660@qq.com.