杭州地區(qū)乙型肝炎病毒基因分型與臨床指標(biāo)關(guān)系研究

陳燕敏　袁武鋒　龐珍珍

[摘要] 目的 分析杭州地區(qū)乙肝病毒基因分型分布情況及與乙肝病毒DNA定量、乙肝兩對半定性/半定量、AFP定量各項(xiàng)指標(biāo)間的聯(lián)系。 方法 對臨床146例乙肝病毒DNA陽性患者，用PCR 法進(jìn)行乙肝病毒基因分型及乙肝病毒DNA定量檢測；用ELISA法進(jìn)行乙型肝炎兩對半定量檢測；用夾心法進(jìn)行AFP定量檢測，以分析彼此間的相關(guān)性。 結(jié)果 經(jīng)統(tǒng)計(jì)，B型75例，占51.4%；C型62例，占42.5%；非B非C型共9例，占6.2%；男女性患者基因分型的構(gòu)成比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C型乙肝病毒DNA水平明顯高于B型，C型乙肝表面抗原及E抗原定量測定值高于B型。C型患者AFP定量測定均值較B型高，但二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 杭州地區(qū)乙肝病毒基因型以B型為主，C型次之；C型乙肝病毒DNA含量較B型高，肝臟損害較B型嚴(yán)重。

[關(guān)鍵詞] 乙型肝炎；基因分型；乙肝臨床指標(biāo)

[中圖分類號] R512.62 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2015）21-0097-04

[Abstract] Objective To study the distribution of HBV genotypes and the relationship between HBV genotypes and the clinical characteristics in Hangzhou area. Methods The genotype， content of HBV-DNA， serological indicators and AFP were detected by RT-PCR， time resolved immunofluorescence method respectively in 146 cases of HBV-DNA positive patients. The relationship between HBV genotype and the clinical characteristics were analyzed by the statistical analysis. Results In the HBV genotyping， there were 75 cases of type B （51.4%），62 cases of type C （42.5%），9 cases of no B or no C type （6.2%）；In type C， the HBV-DNA， HbsAg and HbeAg content were significantly higher than the type B. The content of AFP in type C was higher than type B， but with no statistical difference（P>0.05）. Conclusion In Hangzhou area， the priority genotype of HBV is type B. Genotype has a certain relationship with the clinical characteristics and the severity of the disease.

[Key words] Hepatitis B virus； Genotype； Clinical characteristics

乙型肝炎（hepatitis B virus，HBV）是我國發(fā)病率較高的疾病，現(xiàn)約有1.2億乙肝病毒攜帶者，現(xiàn)癥慢性乙型肝炎患者達(dá)2000多萬人，我國每年用于肝炎對癥治療的直接醫(yī)療費(fèi)用超過500億人民幣。

HBV病毒是嗜肝DNA病毒，是引起急、慢性肝炎的主要病原體之一，可導(dǎo)致不同程度肝硬化及肝癌等。而乙肝病毒在宿主體內(nèi)復(fù)制的過程中，會(huì)發(fā)生核苷酸的錯(cuò)誤配對，致使同一病毒核苷酸序列不同的差異，并表現(xiàn)為不同的病毒基因型。目前，根據(jù)乙肝病毒S區(qū)基因序列差異≥4%或全基因核苷酸序列的異質(zhì)性≥8%的特點(diǎn)，將乙肝病毒區(qū)分為A、B、C、D、E、F、G和H八種基因型[1，2]。大量研究表明乙肝病毒的基因型具有一定的地域分布特點(diǎn)，并且乙肝病毒的傳播方式、臨床疾病譜、預(yù)后判斷、疫苗預(yù)防及抗病毒治療效果與其關(guān)系密切。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR熒光探針法對146例乙肝患者的標(biāo)本進(jìn)行基因分型測定及乙肝病毒DNA定量、乙肝兩對半定量、AFP定量的測定，分析杭州地區(qū)乙型肝炎病毒基因型的分布與各項(xiàng)檢測指標(biāo)之間的聯(lián)系?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

選擇2013年1～10月就診于浙江省人民醫(yī)院的146例HBV感染者，均為門診就診或住院的杭州地區(qū)居民。診斷符合2000年全國病毒性肝炎會(huì)議制定的標(biāo)準(zhǔn)，入選病例均排除合并甲、丙、丁、戊型等其他肝炎病毒感染，且乙肝病毒DNA定量均為陽性。其中男108例，女38例，年齡11～78歲，平均（35.9±1.4）歲。

1.2 試劑與儀器

乙肝病毒基因分型及DNA定量檢測試劑來源于上海復(fù)星醫(yī)藥集團(tuán)公司；乙肝兩對半定量檢測試劑來源于英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司；AFP定量試劑來源于羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司。所使用的儀器包括ABI7500全自動(dòng)熒光實(shí)時(shí)定量PCR儀及羅氏E170。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察乙肝病毒感染者的基因分型，B型、C型和非B非C型乙肝病毒DNA定量及AFP定量、乙肝表面抗原及乙肝E抗原與乙肝病毒基因分型的相關(guān)性。

1.4 檢測方法

1.4.1 乙肝病毒基因分型和HBV-DNA定量檢測 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對乙肝病毒進(jìn)行基因分型，并對患者的HBV-DNA進(jìn)行定量檢測。

1.4.2 乙肝兩對半定量檢測 采用時(shí)間分辨熒光分析法進(jìn)行乙型肝炎兩對半定量檢測，包括HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc五種指標(biāo)。

1.4.3 AFP定量檢測 采用時(shí)間分辨熒光分析法對患者血清中AFP水平進(jìn)行定量檢測。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用成組設(shè)計(jì)t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布則用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基因分型測定結(jié)果

146例杭州地區(qū)的乙肝病毒感染者的基因分布為：B型75例，占51.4%，C型62例，占42.5%，非B非C型共9例，占6.2%，見表1。男女性患者基因分型的構(gòu)成比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.328，P>0.05）。

2.2 基因分型與乙肝病毒DNA定量測定

乙肝病毒DNA定量與乙肝病毒基因分型存在一定的相關(guān)性。對B型及C型的乙肝病毒DNA定量測定數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得出杭州地區(qū)C型乙肝患者與B型比較，乙肝病毒DNA定量測定值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），C型的乙肝病毒DNA定量測定均值較B型高，見表2。

2.3 基因分型與乙肝表面抗原定量測定

乙型兩對半定量檢測項(xiàng)目中，乙肝表面抗原、乙肝E抗原與乙肝病毒基因分型相關(guān)性較大。將B型與C型的乙肝表面抗原定量測定值分為>250 ng/mL和≤250 ng/mL兩組，進(jìn)行計(jì)量統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)表明C型乙肝表面抗原定量測定值較B型高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

2.4 基因分型與乙肝E抗原定量測定

對146例患者的乙肝E抗原定量測定值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得出杭州地區(qū)C型乙肝患者與B型比較，C型乙肝E抗原定量較B型高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表4。選取乙肝E抗原的陽性率作統(tǒng)計(jì)分析，C型的乙肝E抗原陽性率較B型高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表5。

2.5基因分型與AFP定量測定

對已做過AFP檢測的146例乙肝病毒DNA陽性患者的受檢樣本進(jìn)行秩和檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)，其中B型47例，C型36例。結(jié)果顯示C型乙肝患者的AFP定量測定均值較B型高，但二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表6。

3 討論

在世界各地中，乙型肝炎病毒感染有著不同程度的流行。其中，不同地區(qū)的乙型肝炎病毒基因型差異非常明顯，不同國家和國內(nèi)地區(qū)間流行程度的差異，除生活習(xí)慣、人體免疫遺傳特征等因素明顯相關(guān)外，其與乙型肝炎病毒本身的生物學(xué)基因型、血清亞型和基因變異等也呈一定程度的相關(guān)性。在不同的地理區(qū)域中，乙型肝炎病毒基因的分型呈不同的分布，在不同人種中的流行及傳播方式也存在很大差異。在我國，乙型肝炎病毒主要流行A、B、C、D四種HBV基因型，所占比例分別為1.2%、39.3%、50.2%及8.1%，且不同省份不同地區(qū)的基因型也存在較大的差異，北方地區(qū)以C型為主，約占81.6%；南方地區(qū)則以B型為主，C型則占很小一部分[3]。本研究統(tǒng)計(jì)146例乙肝病毒DNA定量陽性的受檢樣本的基因分型情況，結(jié)果顯示杭州地區(qū)乙肝基因型以B型為主，共75例，占51.4%；C型次之，共62例，占42.5%；非B非C型有9例，占6.2%。之前研究結(jié)果顯示江西萍鄉(xiāng)地區(qū)B型為優(yōu)勢基因型，占68.1%，C型占12.4%[4]；但廣東地區(qū)基因型以B型為主，C型次之[5]。本次統(tǒng)計(jì)結(jié)果與普遍報(bào)道的南方以感染B型乙肝病毒為主相符。

不同基因型的乙型肝炎病毒具有不同的致病性及流行特征，故了解患者乙肝病毒基因分型具有重要的臨床意義。本研究統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示杭州地區(qū)C型乙肝病毒DNA定量測定值較B型高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示C型乙肝病毒DNA復(fù)制較活躍。目前認(rèn)為，乙型肝炎發(fā)病機(jī)制中乙肝病毒的復(fù)制狀態(tài)與其基因型之間有無關(guān)系尚存在爭議，但乙肝病毒誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)及血清中高滴度的乙肝病毒是其發(fā)病危險(xiǎn)因素之一[6]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)C型較B型高HBV-DNA血癥，認(rèn)為可能是因?yàn)橐腋尾《綝NA高復(fù)制水平的長期存在導(dǎo)致C型患者更為嚴(yán)重的肝臟炎癥活動(dòng)和肝硬化發(fā)生率。但樊笑霞等[7]研究報(bào)道B、C型感染患者血清乙肝病毒DNA之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，盡管乙肝病毒的復(fù)制狀態(tài)與其基因型之間有無關(guān)系尚存在爭議，從以上研究我們認(rèn)為C型乙肝病毒感染者在進(jìn)入免疫清除期時(shí)乙肝病毒反復(fù)活動(dòng)，持續(xù)造成肝臟組織損傷，轉(zhuǎn)歸與預(yù)后較B型差。

文獻(xiàn)[8]報(bào)道B型乙肝病毒較C型乙肝病毒更容易通過前C區(qū)變異誘導(dǎo)e 抗原的轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)歸及預(yù)后較C型好。通過對146例患者乙肝兩對半的檢測顯示，C型乙肝表面抗原定量測定值較B型高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；C型乙肝E抗原定量較B型高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且乙肝E抗原陽性率C型較B型高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示C型乙肝病毒復(fù)制較活躍，易形成持續(xù)的病毒血癥，但不易發(fā)生e系統(tǒng)的血清轉(zhuǎn)換。

據(jù)研究顯示[9]，AFP約在83%的肝癌患者血清中升高，而在肝硬化等患者中亦可出現(xiàn)不同程度的升高。而有研究[10]發(fā)現(xiàn)C型乙肝感染者較B型更易發(fā)展至肝硬化等重癥肝病，炎癥程度更為嚴(yán)重，且與肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生更為密切。故對146例乙肝病毒DNA陽性的患者中檢測過AFP定量的樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，其中B型47例，C型36例。結(jié)果顯示C型乙肝患者AFP定量測定均值較B型高，但二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。該統(tǒng)計(jì)結(jié)果可能受標(biāo)本量的影響，乙肝病毒基因分型結(jié)果與AFP定量值是否存在聯(lián)系，還需進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)研究。

大量研究表明，抗乙肝病毒的藥物治療，尤其是干擾素治療的臨床療效與HBV-DNA的定量水平有直接關(guān)聯(lián)，HBV-DNA 載量低則干擾素治療療效好，HBV-DNA 載量高則干擾素治療療效差[11-14]。本研究分析2013年杭州地區(qū)乙型肝炎病毒基因型的分布情況及與乙肝病毒DNA定量、乙肝兩對半定量和AFP定量各項(xiàng)指標(biāo)的關(guān)系，結(jié)果對于了解本地區(qū)乙型肝炎病毒各基因型的特點(diǎn)做了初步的研究。由于不同乙肝病毒基因型之間的地理分布、分子生物學(xué)特征以及臨床轉(zhuǎn)歸不同[15-22]，深入研究乙肝病毒的基因型對于進(jìn)一步明確乙肝病毒的分子流行病學(xué)特點(diǎn)、確定傳播關(guān)系、鑒別傳染源、闡明發(fā)病機(jī)制和臨床治療的療效等都具有重要意義。

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（收稿日期：2015-03-05）