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      銅基殺菌劑對柑橘炭疽病菌的室內(nèi)毒力測定

      2015-08-06 20:30:38郭洋洋張宇宏毛潤乾鄭基煥
      湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年10期
      關(guān)鍵詞:銅基炭疽培養(yǎng)皿

      郭洋洋 張宇宏 毛潤乾 鄭基煥

      摘要:為確定銅基殺菌劑防治柑橘炭疽?。–olletotrichum gloeosporioides)的潛力,采用水平擴散法和生長速率法對3種銅基殺菌劑進行了室內(nèi)毒力測定。結(jié)果表明,生長速率法可定量測定這3種銅基殺菌劑的毒力;77%氫氧化銅和30%琥膠肥酸銅在設(shè)定濃度完全抑制柑橘炭疽病生長,95%葡萄糖酸銅對柑橘炭疽病菌的抑制中濃度EC50=1.62 g/L,濃度不小于8 g/L時,可完全抑制柑橘炭疽病菌的生長。因此,3種銅基殺菌劑皆有防治柑橘炭疽病的潛力。

      關(guān)鍵詞:柑橘炭疽?。–olletotrichum gloeosporioides);銅基殺菌劑;毒力測定

      中圖分類號:S482.2 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2015)10-2384-03

      DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.10.020

      柑橘炭疽?。–olletotrichum gloeosporioides)是一種普遍發(fā)生的真菌性病害,該病可為害柑橘樹的葉、梢、花、果,不僅能引起田間的葉斑、落葉、枯梢、落果,還可以導(dǎo)致植株各器官的潛伏性侵染,嚴重影響樹勢和果實的產(chǎn)量與品質(zhì)[1,2]。目前,防治柑橘炭疽病主要依靠化學(xué)防治,生產(chǎn)上多用苯并咪唑類和取代苯類殺菌劑[3,4]。但是,多年連續(xù)使用此類殺菌劑,炭疽病菌已對其產(chǎn)生了抗藥性,防治效果不斷下降[5,6]。因此,篩選出針對柑橘炭疽病的新型殺菌劑顯得非常迫切。

      銅基殺菌劑可通過釋放銅離子殺滅病菌,是防治常見細菌和真菌性病害的一種理想藥劑[7,8]。但要確定其是否可以用于防治柑橘炭疽病,首先要進行室內(nèi)毒力水平的生物測定[9]。為此,用水平擴散法和生長速率法對3種銅基殺菌劑的毒力進行了測定,以期確定銅基殺菌劑用于防治柑橘炭疽病的潛力,為后續(xù)的大田試驗奠定基礎(chǔ)。

      1 材料與方法

      1.1 供試菌株

      供試菌株由廣西柑橘研究所采集病株,分離獲得。經(jīng)鑒定,其病原菌為膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz.),鑒定方式為培養(yǎng)性狀和形態(tài)學(xué)特征觀測[10]。

      1.2 試驗藥劑

      本試驗采用3種銅基殺菌劑,分別為77%氫氧化銅,美國杜邦公司生產(chǎn),商品名為可殺得;30%琥膠肥酸銅,由廣東省昆蟲研究所下屬公司羅定市生物化工有限公司生產(chǎn)提供,商品名為潰枯靈;95%葡萄糖酸銅原粉,由北京信諾科美科技有限公司提供。供試真菌的培養(yǎng)與保存均使用馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基。

      1.3 室內(nèi)毒力測定

      目前常用的室內(nèi)毒力測定方法主要有水平擴散法和生長速率法[11,12],其主要原理是將殺菌物質(zhì)作用于細菌、真菌或其他病原微生物,根據(jù)抑制作用大小來判斷藥劑的毒力。

      1.3.1 水平擴散法

      1)殺菌劑的濃度梯度制作:準備無菌三角瓶,將殺菌劑按比例稀釋成不同的濃度梯度,每種藥劑設(shè)定20、40、60、80和100 g/L 5個濃度。

      2)接菌:在超凈臺中,用接種針從供試菌的試管中挑取帶有柑橘炭疽病菌的菌塊,均勻點接到含PDA培養(yǎng)基15 mL、直徑為20 cm的培養(yǎng)皿中。然后用打孔器打取濾紙片(直徑5 mm)分別投入到配制好的供試藥劑稀釋液中吸附1 min,取出并將其靠在無菌的燒杯壁上,淌落多余的藥液后移入凝固的培養(yǎng)基表面,每一培養(yǎng)皿對角排列放入4片吸附同一濃度藥液的濾紙片,中央放一片吸附無菌水的空白濾紙。迅速蓋上培養(yǎng)皿,用封條密封,在恒溫培養(yǎng)箱中27~28 ℃培養(yǎng)24~48 h后觀察結(jié)果。

      1.3.2 生長速率法

      1)病原菌的純培養(yǎng):在超凈臺中,用接種針從供試菌的試管中挑取帶有柑橘炭疽病菌的菌塊,點接到含PDA培養(yǎng)基15 mL、直徑為 20 cm的培養(yǎng)皿中,迅速蓋上培養(yǎng)皿,用封條密封,在恒溫培養(yǎng)箱中27~28 ℃培養(yǎng)。當(dāng)菌落分布均勻后,用無菌打孔器(內(nèi)徑5 mm)打孔,得到直徑為0.5 mm的小菌餅。

      2)含藥培養(yǎng)基的制作:準備無菌三角瓶,將殺菌劑按比例稀釋成不同的濃度梯度,在培養(yǎng)皿中加入上述的藥液1 mL,然后再加入9 mL的PDA培養(yǎng)基,搖勻。每種藥劑設(shè)定20、40、60、80和100 g/L 5個濃度。

      3)殺菌劑毒力測定:將打制好的菌餅移入帶藥培養(yǎng)基平板,每一培養(yǎng)皿對角排列放入4個菌餅,同時設(shè)空白對照。

      4)置于27~28 ℃恒溫箱培養(yǎng)24~48 h,分別測定每個菌餅擴散的菌落直徑。

      5)根據(jù)殺菌劑濃度與供試菌的關(guān)系曲線,求得各殺菌劑濃度與抑制機率值間的毒力回歸方程,再通過回歸方程計算出各殺菌劑的EC50值。

      1.4 數(shù)據(jù)測量與統(tǒng)計分析

      用直尺十字交叉測量菌落的直徑,以殺菌劑濃度的對數(shù)值為自變量,抑菌率的機率值為因變量,以最小二乘法建立毒力回歸方程,求出各藥劑的有效中量(EC50)。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 水平擴散法試驗結(jié)果

      瓊脂紙片擴散法的試驗結(jié)果表明,3種銅基殺菌劑對菌絲生長均有抑制作用,但抑制形成的抑菌圈不呈規(guī)則的圓形,只能定性看出它們之間的差異。因此,此法不適合用于室內(nèi)定量判斷銅基殺菌劑對柑橘炭疽病菌的毒力(圖1—圖3)。

      2.2 生長速率法試驗結(jié)果

      生長速率法的試驗結(jié)果表明,柑橘炭疽病菌在加有設(shè)定濃度的77%氫氧化銅和30%琥膠肥酸銅的培養(yǎng)皿內(nèi)生長均被完全抑制,95%葡萄糖酸銅對柑橘炭疽病毒力效果如圖4。

      測定每個菌餅擴散的菌落直徑如表1,95%葡萄糖酸銅配制濃度20、40、60、80、100 g/L時,各濃度抑菌圈直徑平均值分別為24.80、17.80、12.10、5.00和5.00 mm;抑制率分別為72%、88%、96%、100%和100%,機率值為5.582 8、6.175 0、6.750 7、8.091 2和8.091 2(表1)。由此可以得出毒力曲線(圖5)。

      經(jīng)計算,95%葡萄糖酸銅對柑橘炭疽病菌的抑制中濃度EC50=1.62 g/L,即為1 620 mg/L。95%葡萄糖酸銅對柑橘炭疽病菌毒力作用曲線方程為:y=3.875 6x+4.159 69,R2=0.895 951,P=0.014 7。

      其中,x為95%葡萄糖酸銅濃度對數(shù);y為95%葡萄糖酸銅對柑橘炭疽病菌的抑制機率值;R2為擬合優(yōu)度;P為0.05顯著水平時解釋變量的回歸系數(shù)顯著性t檢驗對應(yīng)值,P<0.05,證明模型的線性關(guān)系顯著(表1,圖5)。

      3 小結(jié)與討論

      目前,銅基殺菌劑已被用于防治多種細菌和真菌性病害,而且常與殺蟲劑和其他殺菌劑混配,以達到減少農(nóng)藥用量、降低污染和減少成本的目的[13,14]。文中所述銅基殺菌劑中,氫氧化銅為無機銅殺菌劑,琥膠肥酸銅和葡萄糖酸銅為有機銅殺菌劑。其中,無機銅殺菌劑在使用中存在不能與酸性農(nóng)藥混配、易引起螨類和蚧殼蟲猖獗和花期及幼果期易產(chǎn)生要害等不足[15]。而有機銅殺菌劑不僅兼有無機銅基殺菌劑傳統(tǒng)優(yōu)勢,還有易自然降解、不傷害天敵“多毛菌”和與農(nóng)藥親和性好等優(yōu)勢。因此,某些有機銅基殺菌劑可能成為新一代殺菌劑的最佳選擇。

      試驗結(jié)果表明,77%氫氧化銅、30%琥膠肥酸銅和95%葡萄糖酸銅對柑橘炭疽病菌都有很強的抑制力。當(dāng)3種銅基殺菌劑設(shè)定為20、40、60、80和100 g/L時,水平擴散法只能定性其對柑橘炭疽病菌的毒力。當(dāng)用生長速率法試驗時,77%氫氧化銅和30%琥膠肥酸銅在設(shè)定濃度梯度可完全抑制柑橘炭疽病菌的生長,無法做出相應(yīng)毒力曲線,95%葡萄糖酸銅對柑橘炭疽病菌的抑制中濃度EC50=1.62 g/L,濃度不小于8 g/L時,可完全抑制柑橘炭疽病菌的生長。因此,以上3種銅基殺菌劑都可用于防治柑橘炭疽病,其中30%琥膠肥酸銅為首選。但是,室內(nèi)環(huán)境條件與大田應(yīng)用差異很大,故殺菌劑的室內(nèi)毒力測定僅可作為新型藥劑篩選的初步標準,田間應(yīng)用還需可靠的大田試驗。

      參考文獻:

      [1] TIMMER L W,AGOSTINI J P,ZITKO S E,et al. Postbloom fruit drop,an increasingly prevalent disease of citrus in the America[J]. Plant Disease,1994(78):329-334.

      [2] BROWN G E. Factors affecting postharvest development of Collectotrichum gloeosporioides in citrus fruits[J]. Phytopathology, 1975,65(4):404-409.

      [3] 許文耀,林成輝.溴菌腈·多菌靈混劑對柑橘炭疽病的防治效果[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2002,31(4):459-462.

      [4] 蒲占湑,黃振東,胡秀榮,等.六種殺菌劑對柑橘炭疽病菌的室內(nèi)毒力和田間防治效果[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報,2014,26(1):122-126.

      [5] ZHANG J X,TIMMER L W. Preharvest application of fungicides for postharvest disease control on early season tangerine hybrids in Florida[J].Crop Protection,2007,26(7):886-893.

      [6] 葉琪明. 浙江桔園農(nóng)藥使用現(xiàn)狀及減少用藥對策[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理,2001(S1):39-41.

      [7] 段路路,張 民.波爾多液營養(yǎng)保護劑對花生黃化癥的矯治及生長效應(yīng)的影響[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報,2006,22(4):224-226.

      [8] 劉金成,許長敏,陳清云.馬鈴薯晚疫病藥劑防治篩選試驗[J].農(nóng)藥,2002,41(2):31-32.

      [9] 張敏恒.農(nóng)藥商品手冊[M].沈陽:沈陽出版社,1999.500-521.

      [10] 王 震,楊 媚,楊迎青,等.廣東省柑橘炭疽病病原菌的形態(tài)與分子鑒定[J].菌物學(xué)報,2010,29(4):488-493.

      [11] 丁愛云.植物保護學(xué)實驗[M].北京:高等教育出版社,2004.83-84.

      [12] 方中達.植病研究方法[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1998.140-141.

      [13] 丁秀麗,吳澤和,陳 麗,等.4種壬菌銅細菌專用配方的抑菌活性篩選[J].農(nóng)藥,2005,44(8):377-378.

      [14] BRATITHWAITE M,F(xiàn)ALLOON R E,GENET R A,et al. Control of powdery scab of potatoes with chemical seed tuber treatments[J]. New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science,1994,22(2):121-128.

      [15] 張德雍,黃 華,廖苑其,等.新型無機銅基殺菌劑王銅的研制與開發(fā)[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2009,30(3):36-40.

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