TSLC1和CD105在宮頸癌中的表達(dá)及其意義

鐘佳靜等

[摘要] 目的 探討TSLC1和CD105標(biāo)記微血管密度計(jì)數(shù)（MVD）在宮頸癌中的表達(dá)及兩者與臨床病理特征的關(guān)系。 方法 收集18例正常宮頸、18例宮頸上皮內(nèi)瘤樣變、45例宮頸癌組織標(biāo)本，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)TSLC1和CD105標(biāo)記MVD表達(dá)情況。 結(jié)果 在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變、宮頸癌組織中，TSLC1的陽(yáng)性表達(dá)率呈逐漸下降趨勢(shì)（P<0.01），TSLC1在宮頸癌組織中的表達(dá)與宮頸癌組織學(xué)分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）。在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變、宮頸癌組織中，CD105標(biāo)記MVD表達(dá)強(qiáng)度呈逐漸上升趨勢(shì)（P<0.01），CD105標(biāo)記MVD在宮頸癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度與宮頸癌FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）。 結(jié)論 宮頸癌組織中TSLC1呈低表達(dá)、而CD105呈高表達(dá)，提示TSLC1和CD105在宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展中有重要意義，TSLC1和CD105表達(dá)水平的檢測(cè)可用于輔助宮頸癌的診斷和病情評(píng)估。

[關(guān)鍵詞] TSLC1；CD105；正常宮頸；宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變；宮頸癌；免疫組織化學(xué)法

[中圖分類號(hào)] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2015）02（a）-0049-04

Expression and significance of TSLC1 and CD105 in cervical carcinoma

ZHONG Jia-jing1 WU Fei-yuan2 DONG Hua1

1.Zhanjiang Jiuhe Hospital in Guangdong Province，Zhanjiang 524000，China；2.Department of Obstetrics and Gynecology，Central People′s Hospital of Zhanjiang City in Guangdong Province，Zhanjiang 524000，China

[Abstract] Objective To analyze the expression of tumor suppressor in lung cancer 1（TSLC1）and microvessel density（MVD）marked with CD105 and their relation to clinicopathological feature in cervical carcinoma. Methods Immunohistochemical method was used to assess the expression of TSLC1 and CD105 in 18 cases of normal cervix，18 cases of cervical intraepithelial neoplasia（CIN）and 45 cases of cervical carcinoma. Results The positive expression of TSLC1 was decreased from normal cervical to CIN to cervical carcinomas（P<0.01）.The expression of TSLC1 was related to histological grade，F(xiàn)IGO stage and lymph node metastasis（P<0.05）.The expression of MVD marked with CD105 was increased from normal cervical to CIN to cervical carcinomas（P<0.05）.The expression of MVD marked with CD105 was related to FIGO stage and lymph node metastasis（P<0.05）. Conclusion There are low expression of TSLC1 but high expression of CD105 in cervical carcinoma，TSLC1 and CD105 may play closely reflect growth and regulation in cervical carcinomas，this study suggests that examine by using immunohistochemical method of TSLC1 and CD105 may be of value in indicating an important role in the occurrence and development of cervical carcinoma.

[Key words] TSLC1；CD105；Normal cervix；Cervical intraepithelial neoplasia；Cervical carcinoma；Immunohistochemical method

宮頸癌居全球女性惡性腫瘤的第二位，全球?qū)m頸癌患者數(shù)量逐年增加，呈年輕化趨勢(shì)，宮頸癌的發(fā)生是多步驟、多階段、多基因相互作用的結(jié)果，涉及多種抑癌基因的失活與腫瘤新生血管的生成[1-3]；肺癌腫瘤抑制物1（tumor suppressor in lung cancer 1，TSLC1）是一種新的抑癌基因，研究表明，TSLC1失活與多種惡性腫瘤的發(fā)生、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及預(yù)后有重要的關(guān)系[4-6]；CD105又命名為Endoglin，研究表明，CD105由腫瘤組織及其轉(zhuǎn)移灶中新生血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[7-9]；本研究采用免疫組化法檢測(cè)TSLC1和CD105標(biāo)記的微血管密度計(jì)數(shù)（MVD）在宮頸癌中的表達(dá)情況，探討TSLC1和CD105與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集湛江市中心人民醫(yī)院2010年1月～2014年5月門診活檢或住院手術(shù)病理標(biāo)本81例，其中正常宮頸組織18例，宮頸上皮內(nèi)瘤樣變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）組織18例和宮頸癌組織45例，宮頸癌按FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，其中Ⅰ期7例，Ⅱ期15例，Ⅲ期18例，Ⅳ期5例；低分化15例、中分化17例，高分化13例；所有宮頸癌病例術(shù)前均未行化療或放療，各組間年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；兔抗人TSLC1多克隆抗體和鼠抗人CD105單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Chemicon有限公司，即用型免疫組織化學(xué)試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測(cè)

石蠟包埋組織以4 μm厚連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟至水，切片浸于50 mmol/L（pH8.0）乙二胺四乙酸溶液中，微波抗原修復(fù)10 min，冷卻至室溫，充分水洗，PBS浸洗，滴加正常山羊血清封閉液，室溫20 min；甩去多余液體，不洗，加入TSLC1多抗或CD105單抗4℃過夜；PBS洗；滴加SP 9000通用型生物素標(biāo)記二抗，37℃，40 min；二氨基聯(lián)苯氨顯色30 s，蘇木素復(fù)染，乙醇脫水、透明、中性樹膠封固。二氨基聯(lián)苯氨顯色液配制：取DAB 5 mg溶于100 ml 0.05 mol/L Tris-鹽酸（pH7.6）中，加入30%過氧化氫10 μl，攪拌混勻后過濾（用前新配制）；采用該公司提供的陽(yáng)性切片為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 陽(yáng)性結(jié)果判定

TSLC1以胞核和胞質(zhì)中出現(xiàn)棕色或棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。按半定量積分法判斷兩者表達(dá)情況，根據(jù)染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞所占比例分別記為0～3分。染色強(qiáng)度：未著色為0分，著色淺為1分，中度著色為2分，著色深為3分。陽(yáng)性細(xì)胞百分率：高倍鏡（×400）下隨機(jī)選取10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。計(jì)算其平均陽(yáng)性百分率，平均陽(yáng)性細(xì)胞百分率≥5%表示為陽(yáng)性。

CD105標(biāo)記的MVD計(jì)數(shù)：先在低倍鏡下全面觀察切片以確定腫瘤內(nèi)血管密度最高處，即熱點(diǎn)處；再在高倍鏡（0.189 mm2/視野）下，以與周圍腫瘤細(xì)胞和結(jié)締組織成分明顯區(qū)別的任何一個(gè)棕色染色的內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞叢維一個(gè)血管，只要結(jié)構(gòu)不相連，其分支結(jié)構(gòu)也作為一個(gè)血管計(jì)數(shù)；記錄3個(gè)視野內(nèi)的微血管數(shù)，取其平均數(shù)作為該患者的MVD值，雙盲分析結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)或方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TSLC1在不同病變宮頸組織中的表達(dá)情況

宮頸癌組織中TSLC1的表達(dá)陽(yáng)性率低于正常宮頸、CIN組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=23.1245，P<0.01）（表1）。

表1 TSLC1在不同病變宮頸組織中的表達(dá)情況（n）

與正常宮頸比較，χ2=5.7857、*P=0.0162，χ2=22.1518、#P=0.0000；與CIN比較，χ2=5.6606、▲P=0.0174

2.2 TSLC1表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系

TSLC1表達(dá)與宮頸癌組織學(xué)分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）（表2）。

表2 TSLC1表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3 CD105標(biāo)記MVD在不同病變宮頸組織中的表達(dá)強(qiáng)度

正常宮頸、CIN、宮頸癌組織中CD105標(biāo)記MVD的表達(dá)強(qiáng)度分別為（3.1217±0.6070）、（6.2411±1.0256）、（13.5956±1.2460），宮頸癌組織中CD105標(biāo)記MVD的表達(dá)強(qiáng)度高于正常宮頸、CIN組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=11.6267，P<0.01）。

2.4 CD105標(biāo)記MVD表達(dá)強(qiáng)度與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系

CD105標(biāo)記MVD表達(dá)強(qiáng)度與宮頸癌FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）（表3）。

表3 CD105標(biāo)記MVD表達(dá)強(qiáng)度與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

TSLC1屬于細(xì)胞黏附分子中免疫球蛋白超家族成員，與神經(jīng)細(xì)胞黏附分子NCAM1（neural cell adhesion molecule）和NCAM2具有很高的同源性，TSLC1定位于人染色體11q23.2，全長(zhǎng)>300 kb，含有10個(gè)外顯子，編碼一段4.4或1.6 kb的mRNA序列，最終翻譯成一種442個(gè)氨基酸的跨膜糖蛋白，研究表明，TSLC1與細(xì)胞黏附、細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)、抑制細(xì)胞生長(zhǎng)周期、免疫調(diào)節(jié)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起負(fù)性作用[10-11]。Yang等[12]通過研究TSLC1在卵巢癌中的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，TSLC1在卵巢癌、卵巢交界性腫瘤、卵巢囊腺瘤中表達(dá)缺失率分別為：59%、45%、7%，但在正常卵巢中未見減少（0%），在卵巢囊腺瘤→卵巢交界性腫瘤→卵巢癌3個(gè)不同階段TSLC1基因的表達(dá)呈明顯下降趨勢(shì)，其表達(dá)減少或缺失與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，與患者的存活率呈顯著相關(guān)性，是一個(gè)重要的獨(dú)立預(yù)后因素和預(yù)測(cè)患者存活率的指標(biāo)，以上研究表明，TSLC1失活促進(jìn)卵巢癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，抑制癌細(xì)胞的凋亡，在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中起負(fù)相關(guān)作用。本研究結(jié)果表明，TSLC1在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度依次降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，隨FIGO分期增高，TSLC1陽(yáng)性表達(dá)率亦降低；低分化者TSLC1陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于高、中分化者；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者TSLC1陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，提示TSLC1在宮頸癌組織中的表達(dá)與宮頸癌組織學(xué)分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，TSLC1作為腫瘤抑制基因，在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中起一定的作用。

CD105位于人染色體9q34，是一種同型二聚體的膜結(jié)合性糖蛋白，分子量為180 kD，CD105在多種腫瘤組織的內(nèi)皮細(xì)胞中特異性高表達(dá)，與細(xì)胞增殖指標(biāo)Ki67、CyclinA的表達(dá)明顯相關(guān)，是內(nèi)皮細(xì)胞增殖的相關(guān)標(biāo)志物，能定量區(qū)別腫瘤新生血管和已存在血管，多因素分析顯示，用CD105測(cè)定的MVD是一個(gè)惡性腫瘤獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)[13-14]。梁?jiǎn)⒘萚15]通過動(dòng)物模型的研究發(fā)現(xiàn)，抗Endoglin單克隆抗體可顯著抑制人類胰腺癌PC-3細(xì)胞株的生長(zhǎng)，最高抑瘤率可達(dá)67.13%，抗Endoglin單克隆抗體有望作為胰腺癌的生物基因工程治療方法之一。本研究結(jié)果表明，隨著正常宮頸組織→CIN→宮頸癌的轉(zhuǎn)化，CD105標(biāo)記MVD表達(dá)強(qiáng)度依次增加，隨FIGO分期增高，CD105標(biāo)記MVD表達(dá)強(qiáng)度亦隨之增加，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，提示CD105標(biāo)記MVD與宮頸癌FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，上述結(jié)果表明宮頸癌組織中TSLC1呈低表達(dá)、而CD105呈高表達(dá)，提示TSLC1和CD105在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中有重要意義，TSLC1和CD105表達(dá)水平的檢測(cè)可用于輔助宮頸癌的診斷和病情評(píng)估。

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（收稿日期：2014-12-02 本文編輯：李亞聰）