不同類型老年冠心病患者外周血單核細(xì)胞程序性死亡因子配體2的表達(dá)及與血清超敏C反應(yīng)蛋白、白細(xì)胞介素6的相關(guān)性

于 靖 曹緒芬 趙榮誠 鄭 曄 顏利求 王佳旺

(滄州市中心醫(yī)院心血管內(nèi)一科，河北 滄州 061001)

冠心病(CHD)發(fā)生率呈上升的趨勢〔1〕。CHD分為急性心肌梗死(AMI)、不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)、穩(wěn)定型心絞痛(SAP)等多種類型，且發(fā)病機制復(fù)雜、病程長，容易并發(fā)多種并發(fā)癥。因此，對CHD的早期發(fā)現(xiàn)與治療顯得尤為重要。臨床研究證實〔2〕，外周血單核細(xì)胞程序性死亡因子配體(PD-L)2對老年CHD發(fā)生和發(fā)展具有一定的相關(guān)性。本文分析PD-L2水平與CHD發(fā)病機制的關(guān)系，及對血清高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、白細(xì)胞介素(IL)-6等炎性因子的聯(lián)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年5月至2014年7月我院治療的老年CHD患者112例，納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)冠狀動脈造影檢查，符合WHO診斷標(biāo)準(zhǔn);②患者及家屬知情同意，能配合研究。排除標(biāo)準(zhǔn):有自身免疫性疾病、嚴(yán)重肝腎功能不全;近2個月內(nèi)服用過他汀類、免疫抑制劑或類固醇藥物。其中AMI 34例，UAP 41例，SAP 37例，同時選取同期在我院體檢的健康人33名作為對照組。AMI組、UAP組、SAP組和對照組性別構(gòu)成、年齡、體質(zhì)指數(shù)(BMI)等一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性，見表1。

1.2 hs-CRP、IL-6以及IL-8檢測 采集空腹血8 ml，血液凝固后在4 000 r/min離心10 min，分離血清于－20℃的低溫保存。采用ELISA方法檢測IL-6、IL-8，試劑盒為美國RB生物技術(shù)有限公司生產(chǎn);hs-CRP的檢測采用免疫比濁法，試劑盒由廣州恒升科技實業(yè)有限公司生產(chǎn)，操作步驟均按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 PD-L2檢測 選取100 μl抗凝血置入2支試管，且將20 μl FITC標(biāo)記鼠抗人CD14單克隆抗體與PE標(biāo)記鼠抗人PD-L2單克隆抗體加入一支試管，將另一試管內(nèi)放入鼠抗人IgG1為同型對照。均避光孵育60 min后加入2 ml紅細(xì)胞裂解液，避光15 min。管內(nèi)液體透亮后，離心且分離血清。加入PBS，使用WINMDI2.9軟件測定標(biāo)本，計算其數(shù)值。

表1 各組一般資料比較(±s)

表1 各組一般資料比較(±s)

)〕AMI組 34 21/13 67.63±7.15 22.30±2.62 7(20.59)5(14.71)組別 n 男/女(n)年齡(歲)BMI(kg/m2)高血壓〔n(%)〕糖尿病〔n(%UAP組 41 23/18 68.84±8.04 21.47±2.55 9(21.95)6(14.63)SAP組 37 20/17 69.11±7.58 21.65±1.98 8(21.62)5(13.51)對照組 33 19/14 69.06±8.63 22.02±2.08 6(18.18)4(12.12)F或χ2值 0.461 0.983 1.265 0.186 0.128 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行SNK檢驗，χ2檢驗和Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 各組PD-L2蛋白表達(dá)情況 AMI組、UAP組、SAP組和對照組PD-L2蛋白表達(dá)情況比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，其中AMI組PD-L2蛋白表達(dá)水平明顯高于其他組，而對照組最低(P ＜0.05)，見表2、圖1。

2.2 各組血清hs-CRP、IL-6以及IL-8情況 AMI組血清hs-CRP、IL-6和IL-8水平明顯高于其他組(P＜0.05);SAP組和對照組血清hs-CRP、IL-6和IL-8比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表2 各組PD-L2蛋白表達(dá)、血清hs-CRP、IL-6及IL-8表達(dá)情況(±s)

表2 各組PD-L2蛋白表達(dá)、血清hs-CRP、IL-6及IL-8表達(dá)情況(±s)

與對照組比較:1)P＜0.05;與SAP組比較:2)P＜0.05;與UAP組比較:3)P＜0.05

組別 n PD-L2蛋白表達(dá)(%) hs-CRP(mg/L) IL-6(pg/ml) IL-8(pg/ml)AMI組 34 22.42±2.411)2)3) 11.24±2.511)2)3) 23.17±5.171)2)3) 117.28±14.931)2)3)291/＜0.05 UAP組 41 18.53±2.131)2) 6.52±1.731)2) 15.27±4.621)2) 101.17±12.181)2)SAP組 37 13.17±1.991) 2.16±1.84 7.48±3.38 75.02±11.92對照組 33 9.83±1.76 1.86±1.77 6.83±4.21 72.02±13.20 F/P值 25.783/＜0.05 18.285/＜0.05 15.283/＜0.05 14.

圖1 各組PD-L2蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測圖

2.3 PD-L2與hs-CRP、IL-6、IL-8表達(dá)水平相關(guān)性 CHD患者外周血單核細(xì)胞PD-L2表達(dá)水平與hs-CRP、IL-6表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.832，0.487，P＜0.05)，而與IL-8表達(dá)水平無相關(guān)性(r=0.037，P ＞0.05)。

3 討論

CHD主要是由冠狀動脈血管出現(xiàn)粥樣斑塊破裂而引發(fā)血管阻塞或狹窄，進(jìn)而導(dǎo)致心肌出現(xiàn)缺血、缺氧性壞死，最終誘發(fā)的心臟病〔3〕。動脈粥樣硬化的形成過程涉及損傷、炎癥與血栓形成，且炎癥反應(yīng)會增加CHD事件發(fā)生。病原體感染會引發(fā)患者全身炎癥反應(yīng)，促使CRP與IL等細(xì)胞因子變化，激活炎癥細(xì)胞，參與炎癥反應(yīng)，加速動脈粥樣硬化的形成〔4〕。

PD-L2是共刺激分子B7家族成員，與其受體PD-1的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(IgVh)相結(jié)合，通過PD-L2/PD-L1信號途徑影響T細(xì)胞增殖與分泌細(xì)胞因子，誘導(dǎo)活化T細(xì)胞凋亡，在免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要的負(fù)性調(diào)控作用〔5〕。PD-L2水平升高，會增強單核細(xì)胞及炎癥免疫系統(tǒng)的敏感性。IL-6、IL-8、hs-CRP是重要的炎性細(xì)胞因子，在CHD患者機體的免疫與炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用〔6〕。IL-6是一種分布極為廣泛的炎性細(xì)胞因子，可激活B細(xì)胞和T細(xì)胞參與免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞生長分化、炎癥反應(yīng)等病理生理過程。正常情況下，人體中的IL-6對機體有利，但如患者出現(xiàn)感染、炎癥時，IL-6可誘使人體出現(xiàn)一系列的炎癥損傷〔7〕。CRP是由患者機體組織損傷與炎癥反應(yīng)產(chǎn)生一種急性蛋白，由IL-6及TNF-α介導(dǎo)產(chǎn)生，也是CHD病變的標(biāo)志物之一，當(dāng)心肌缺血時，血清CRP水平不但顯著升高，且升高程度與患者預(yù)后具有密切聯(lián)系〔8〕。IL-8擁有趨化與激活中性粒細(xì)胞的作用，促使中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶釋放，生成活性氧化代謝物，引發(fā)組織浸潤反應(yīng)，且該因子可以有效調(diào)節(jié)黏附分子的表達(dá)，增強白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附。臨床上常將 IL-6、IL-8、hs-CRP作為反映組織損傷和炎癥的特異性標(biāo)志物，以反映疾病的嚴(yán)重程度〔9〕。本實驗表明CHD患者外周血單核細(xì)胞PD-L2表達(dá)上調(diào)與血清炎性細(xì)胞因子hs-CRP、IL-6水平升高，參與了CHD的發(fā)生發(fā)展。CHD早期動脈粥樣硬化引發(fā)PD-L2蛋白水平升高，刺激血清hs-CRP、IL-6的大量分泌，破壞患者免疫機制，加重了CHD病情，這一結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報道的數(shù)據(jù)相一致〔10〕。因此，聯(lián)合檢測PD-L2與血清hs-CRP、IL-6可以作為CHD患者心血管事件發(fā)生的預(yù)測指標(biāo)，為闡明CHD的發(fā)生機制提供了新的思路。但PD-L2與其受體PD-1相結(jié)合后的信號通路是否影響CHD免疫調(diào)控，需要進(jìn)一步探討。本文中，CHD患者中血清hs-CRP、IL-6等炎性因子濃度與PD-L2蛋白水平明顯升高，且以UAP與AMI患者升高作為顯著。這可能與CHD患者動脈粥樣硬化進(jìn)展及板塊不穩(wěn)定性具有密切聯(lián)系。

1 何疆春，楊 曄，張寧坤，等.冠狀動脈慢血流患者血清炎性標(biāo)志物的檢測水平及意義〔J〕.心肺血管病雜志，2012;31(3):246-8.

2 劉 虹，徐慶科，夏 偉，等.冠心病與炎癥因子IL-6、IL-8、IL-10、hs-CRP及TNF的相關(guān)性研究〔J〕.實用心腦肺血管病雜志，2011;19(9):1446-7.

3 何東明.血清高敏C反應(yīng)蛋白和白細(xì)胞介素-6水平對冠心病病情評估的價值〔J〕.中華實用診斷與治療雜志，2012，26(2):135-6.

4 張 銳，葛建軍.四種炎癥因子與冠心病的關(guān)系研究〔J〕.安徽醫(yī)藥，2014;18(4):695-7.

5 江 玲，劉映峰，吳沛鏘，等.冠心病患者程序性死亡因子配體2的表達(dá)及其與炎性因子的相關(guān)性〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2011;31(6):941-2.

6 趙 偉，李婷婷，李 瑩.冠心病患者炎性因子水平與急性冠狀動脈綜合征的相關(guān)性分析〔J〕.中華老年心腦血管病雜志，2014;16(2):207-8.

7 劉麗軍，馬燕霞，邵麗莉，等.冠狀動脈介入治療對冠心病血漿單核細(xì)胞趨化因子-1和白細(xì)胞介素-6水平的影響〔J〕.心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2013;22(2):146-9.

8 梁潔玲.單核細(xì)胞趨化蛋白-1與動脈粥樣硬化形成機制研究進(jìn)展〔J〕.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2013;34(14):1844-5.

9 李懷祥，唐朝貴.冠心病患者肺炎衣原體感染與血清超敏C反應(yīng)蛋白及白介素-6表達(dá)的相關(guān)性研究〔J〕.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2013;23(5):972-4.

10 呂自明.重組人腫瘤壞死因子α影響人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞活性及表達(dá)PD-L1蛋白表達(dá)的研究〔D〕.廣州:南方醫(yī)科大學(xué)，2013.