發(fā)酵方竹筍對(duì)復(fù)方地芬諾酯誘導(dǎo)小鼠便秘的預(yù)防效果

李貴節(jié),王 存,況 剛,陳紹成,熊政委,趙 欣,6,*

(1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶 400715；2.重慶第二師范學(xué)院 生物與化學(xué)工程系,重慶 400067;3.重慶市功能性食品工程實(shí)驗(yàn)室，重慶第二師范學(xué)院，重慶 400067；4.重慶市功能性食品協(xié)同創(chuàng)新中心，重慶第二師范學(xué)院，重慶 400067；5.重慶市功能性食品工程技術(shù)中心，重慶第二師范學(xué)院，重慶 400067；6.重慶第二師范學(xué)院 功能性生態(tài)食品研究所,重慶 400067)

發(fā)酵方竹筍對(duì)復(fù)方地芬諾酯誘導(dǎo)小鼠便秘的預(yù)防效果

李貴節(jié)1,2,3,4,5,6,王 存2,3,4,5,況 剛2,3,4,5,陳紹成2,3,4,5,熊政委2,3,4,5,趙 欣2,3,4,5,6,*

(1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶 400715；2.重慶第二師范學(xué)院 生物與化學(xué)工程系,重慶 400067;3.重慶市功能性食品工程實(shí)驗(yàn)室，重慶第二師范學(xué)院，重慶 400067；4.重慶市功能性食品協(xié)同創(chuàng)新中心，重慶第二師范學(xué)院，重慶 400067；5.重慶市功能性食品工程技術(shù)中心，重慶第二師范學(xué)院，重慶 400067；6.重慶第二師范學(xué)院 功能性生態(tài)食品研究所,重慶 400067)

本研究就發(fā)酵方竹筍對(duì)復(fù)方地芬諾酯誘導(dǎo)小鼠便秘的預(yù)防效果進(jìn)行了研究。對(duì)發(fā)酵方竹筍纖維的觀察發(fā)現(xiàn)發(fā)酵方竹筍比未發(fā)酵方竹筍具有更疏松的纖維組織結(jié)構(gòu),有利于緩解便秘。飼喂發(fā)酵方竹筍9 d的便秘小鼠排出首粒黑便的時(shí)間低于對(duì)照組和方竹筍喂養(yǎng)組,高于正常組和比沙可啶藥物治療組;活性炭在發(fā)酵方竹筍喂養(yǎng)組小鼠小腸中推進(jìn)率高于對(duì)照組和方竹筍喂養(yǎng)組,低于正常組和比沙可啶藥物治療組。通過(guò)HE切片也觀察到,發(fā)酵方竹筍可以降低便秘對(duì)小腸造成的損傷,減少小腸絨毛的斷裂,效果優(yōu)于未發(fā)酵方竹筍。同時(shí)發(fā)酵方竹筍較對(duì)照組可以顯著升高小鼠血清中的胃動(dòng)素(MTL)、內(nèi)皮素-1(ET-1)、血管活性腸肽(VIP)和乙酰膽堿酯酶(AchE)水平。由此可見(jiàn),發(fā)酵方竹筍具有較好的便秘預(yù)防效果。

方竹筍,發(fā)酵,便秘,地芬諾酯

方竹(Chimonobambusaquadrangularis(Fenzi)Makino),禾本科竹亞科寒竹屬植物[1],主產(chǎn)于我國(guó)渝黔地區(qū)高海拔的叢林中,其竹筍是無(wú)污染的天然優(yōu)質(zhì)食品[2]。方竹筍一般在秋季成熟,其出產(chǎn)時(shí)間與大多數(shù)竹筍不同,從而具有特殊的品質(zhì)。方竹筍營(yíng)養(yǎng)成分豐富,含有蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、維生素C、維生素B族和鈣、磷、鐵、鋅、硒等礦物質(zhì)元素,此外還含有豐富的纖維素[3]。發(fā)酵可以提高食品原有的品質(zhì),包括改善口味、增加營(yíng)養(yǎng)成分和改善營(yíng)養(yǎng)素比例等;利用微生物發(fā)酵可改善竹筍中膳食纖維的生理功能[4]。

在現(xiàn)代社會(huì)中,便秘是一種常發(fā)的生理狀態(tài),出現(xiàn)便秘狀態(tài)的人群排便次數(shù)下降且由于糞便的水分含量下降導(dǎo)致單次排便量下降和排便困難[5]。由于工作狀態(tài)等的影響,現(xiàn)代人群中有約70%的人處于亞健康狀態(tài),處于亞健康狀態(tài)的人群多有腸胃不適的表現(xiàn),這其中又有相當(dāng)多的人群處于便秘狀態(tài)。食用包括保健食品在內(nèi)的具有改善身體狀態(tài)和機(jī)能的食品可以使亞健康狀態(tài)人群恢復(fù)正常,而通過(guò)食品改善便秘狀態(tài)正是當(dāng)今提倡的改善腸道健康的重要方式[6]。竹筍中的纖維已經(jīng)被證實(shí)具有很好的抑制便秘的作用[7],有研究報(bào)導(dǎo)經(jīng)發(fā)酵后竹筍中的膳食纖維可以獲得改善,經(jīng)過(guò)發(fā)酵的竹筍對(duì)便秘的作用得到了提高[8]。

復(fù)方地芬諾酯是一種治療功能性腹瀉的藥物,可以阻滯腸粘膜上的受體,減輕腸道蠕動(dòng)使腸內(nèi)容物通過(guò)發(fā)生延遲,正常狀態(tài)下服用可導(dǎo)致便秘[9],利用復(fù)方地芬諾酯的這個(gè)藥理作用,采用其誘導(dǎo)小鼠便秘建立動(dòng)物便秘模型已經(jīng)成為檢驗(yàn)食品抑制便秘效果的重要實(shí)驗(yàn)手段[10]。本研究利用復(fù)方地芬諾酯片誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生便秘狀態(tài),觀察發(fā)酵方竹筍對(duì)復(fù)方地芬諾酯片誘導(dǎo)便秘的預(yù)防作用,對(duì)采用發(fā)酵方式對(duì)方竹筍的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供了新的理論支持,為發(fā)酵方竹筍開(kāi)發(fā)成胃腸道功能性食品提供了基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

新鮮方竹筍 由重慶雪瑞盛泉農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司提供。復(fù)方地芬諾酯片 國(guó)藥準(zhǔn)字H32022716常州康普藥業(yè)有限公司;比沙可啶 美國(guó)Sigma公司;小鼠胃動(dòng)素(MTL)、內(nèi)皮素-1(ET-1)、血管活性腸肽(VIP)ELISA Kit 武漢華美生物工程有限公司;小鼠乙酰膽堿酯酶(AchE)試劑盒 南京建成生物工程研究所;其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

嗜酸乳桿菌LA2和乳鏈球菌LS3分離自新鮮方竹筍殼。

SPF級(jí)6周齡雌性昆明小鼠100只 動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(渝)2012-0001,購(gòu)自于重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

FA2004電子分析天平 上海奕宇電子科技有限公司;SKY-IIIC恒溫培養(yǎng)振蕩器 上海蘇坤實(shí)業(yè)有限公司;FW177高效粉碎機(jī) 重慶邁克科技公司;DHG-9202-2SA恒溫干燥箱 常州一諾儀器制造有限公司;UV-1750型紫外分光光度計(jì) 日本島津公司;Y-2A生物研究顯微鏡 日本尼康公司;TG1650-WS高速離心機(jī) 重慶春鑫科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 發(fā)酵方竹筍 將培養(yǎng)好的嗜酸乳桿菌LA2和乳鏈球菌LS3分別以4000 r/min離心10 min,棄上清培養(yǎng)基,再用適量無(wú)菌生理鹽水洗滌一次,最后用生理鹽水重懸,調(diào)整菌液的濃度為7.5×109cfu/mL,植物乳桿菌和嗜熱鏈球菌菌液按1∶1比例混合制成方竹筍發(fā)酵菌液。取鮮方竹筍5 kg洗凈后適度破碎,加入500 mL混合發(fā)酵菌液在42 ℃下主發(fā)酵16 h,4 ℃下后發(fā)酵12 h,制成發(fā)酵方竹筍。

1.2.2 竹筍纖維顯微鏡觀察 將新鮮方竹筍和發(fā)酵方竹筍用粉碎機(jī)粉碎后,用10倍質(zhì)量生理鹽水清洗3次,棄去液體后加入10倍質(zhì)量95%乙醇清洗殘留物,以1000 r/min離心5 min,棄去上層液體。將洗凈固體取小塊壓片并滴3滴亞甲基藍(lán)1%乙醇溶液染色,制成方竹筍纖維玻片標(biāo)本,在顯微鏡下放大20×5倍觀察。

1.2.3 竹筍飼料制作 將新鮮方竹筍和發(fā)酵方竹筍巴氏滅菌后烘干,然后將烘干后的方竹筍和發(fā)酵方竹筍粉碎,按重量比1∶9分別與小鼠飼料混合并壓制成型,得到含10%新鮮方竹筍和發(fā)酵方竹筍的實(shí)驗(yàn)小鼠飼料。

1.2.4 小鼠便秘實(shí)驗(yàn) 將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為正常組、對(duì)照組、比沙可啶治療組、方竹筍喂養(yǎng)組和發(fā)酵方竹筍喂養(yǎng)組,每組10只。正常組小鼠實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不進(jìn)行任何處理;對(duì)照組小鼠在實(shí)驗(yàn)的前6 d不進(jìn)行任何處理,6 d后每天給小鼠灌胃復(fù)方地芬諾酯懸液(5 mg/kg)一次,連續(xù)灌胃3 d;比沙可啶治療組小鼠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每天給小鼠灌胃比沙可啶(100 mg/kg)一次,同時(shí)在6d后除繼續(xù)灌胃比沙可啶外每天還給小鼠灌胃復(fù)方地芬諾酯懸液(5 mg/kg)一次,連續(xù)灌胃3 d;在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中以上三組小鼠均給予自由攝入飲水和普通小鼠飼料。方竹筍喂養(yǎng)組和發(fā)酵方竹筍喂養(yǎng)組小鼠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中分別給予小鼠含10%方竹筍和10%發(fā)酵方竹筍的飼料,同時(shí)小鼠給予自由攝入飲水,在實(shí)驗(yàn)的后3 d每天灌胃一次復(fù)方地芬諾酯懸液(5 mg/kg)。所有小組小鼠在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行9 d后給予絕食24 h,然后給所有小鼠按濃度0.1 mL/10 g灌胃含10%活性炭冰水。各組10只小鼠平均分為兩部分,5只小鼠觀察排出首粒黑便的時(shí)間,5只小鼠灌胃活性炭冰水30 min后斷頸處死后觀察活性炭在小腸中的推進(jìn)率,推進(jìn)率(%)=活性炭在小腸中推進(jìn)距離/小腸總長(zhǎng)度×100[11-12]。

1.2.5 血清指標(biāo)檢測(cè) 小鼠血液在4500 r/min轉(zhuǎn)速下離心10 min,吸取上層清液獲得小鼠血清,按照小鼠胃動(dòng)素(MTL)、內(nèi)皮素-1(ET-1)、血管活性腸肽(VIP)和乙酰膽堿酯酶(AchE)試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定小鼠的MTL、ET-1、VIP和AchE指標(biāo)。

1.2.6 小鼠小腸病理學(xué)觀察 小鼠解剖后取小腸放入10%福爾馬林溶液中固定24 h,將小腸組織放入95%的乙醇中脫水后放入二甲苯中以替換出組織塊中的酒精使小腸組織透明化,然后將已透明的組織塊置于溶化的石蠟中浸蠟包埋,通過(guò)切片機(jī)切片后用蘇木精-伊紅(HE)染色后制成小鼠小腸病理切片,在顯微鏡下放大10×5倍觀察[13]。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

對(duì)各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次,實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用SAS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)采用one-way ANOVA法分析數(shù)據(jù)結(jié)果在p<0.05水平上是否具有顯著性差異。

2 結(jié)果與討論

2.1 發(fā)酵方竹筍與新鮮方竹筍纖維的顯微形態(tài)觀察

由圖1可以看到發(fā)酵后的方竹筍的纖維較新鮮方竹筍空隙增大,顯得更為松弛,新鮮方竹筍纖維緊湊致密,纖維之間的空隙較小。發(fā)酵后的方竹筍纖維間隙增大,使水分更容易進(jìn)入纖維間,增大了竹筍纖維的吸水性和持水力,使纖維素更好的吸收水分膨脹,增加糞便的體積,增強(qiáng)對(duì)腸壁的刺激,促進(jìn)腸蠕動(dòng)[14];同時(shí)使糞便保持更多的水分,防止糞便干燥,有利于排便。有研究也表明發(fā)酵可以大大提升竹筍的持水力,與本研究得到了相似的結(jié)果[8]。由此可見(jiàn),發(fā)酵對(duì)方竹筍纖維產(chǎn)生的作用更有利于排便,可以有效的緩解便秘。

圖1 發(fā)酵方竹筍與新鮮方竹筍纖維的形態(tài)觀察(20×5)Fig.1 Morphologic observation of fibers offermented Chimonobambusa quadrangularis shoot andfresh Chimonobambusa quadrangularis shoot(20×5)

2.2 發(fā)酵方竹筍與新鮮方竹筍對(duì)小鼠首粒黑便排除時(shí)間的影響

對(duì)絕食24 h小鼠灌胃活性炭水后觀察小鼠排出黑便的時(shí)間。結(jié)果顯示,正常組小鼠排出首粒黑便所需時(shí)間最短,為62 min(圖2);對(duì)照組小鼠排出首粒黑便所需時(shí)間最長(zhǎng),達(dá)到171 min。比沙可啶作為臨床上治療便秘的有效藥物,在本研究中作為治療對(duì)照灌胃小鼠,該組小鼠首粒黑便排除時(shí)間較對(duì)照組大幅度下降(82 min);方竹筍對(duì)小鼠(未發(fā)酵方竹筍喂養(yǎng)組)排出黑便具有一定的促進(jìn)作用,使排出黑便的時(shí)間減少到117 min;發(fā)酵后的方竹筍(發(fā)酵方竹筍喂養(yǎng)組)使排出首粒黑便的時(shí)間進(jìn)一步下降,接近藥物比沙可啶組小鼠,僅為93 min。便秘患者排便困難,排便的頻率較正常人低,小鼠便秘模型模擬人便秘狀態(tài),在排便困難的狀態(tài)下排出由活性炭水產(chǎn)生的黑便的時(shí)間可以作為衡量便秘程度的標(biāo)準(zhǔn)[15]。方竹筍中豐富的膳食纖維可以增強(qiáng)腸道的蠕動(dòng),促進(jìn)腸道內(nèi)容物通過(guò)腸道,減少內(nèi)容物在腸道中滯留時(shí)間,發(fā)酵后的方竹筍持水性更好,更有利于腸道的蠕動(dòng)[14],加速內(nèi)容物的排出,有利于黑便的排出。結(jié)果顯示食用發(fā)酵方竹筍飼料的小鼠的排出黑便的時(shí)間顯著低于食用方竹筍的小鼠(p<0.05),發(fā)酵方竹筍更有利于促進(jìn)腸道健康,便于排便。

圖2 灌胃活性炭水后小鼠排除首粒黑便時(shí)間Fig.2 First black stool defecation time ofmice after treating with activated carbon water by gavage注:不同字母表示各組數(shù)據(jù)平均值具有顯著差異(p<0.05)。

2.3 發(fā)酵方竹筍與新鮮方竹筍對(duì)小鼠糞便的影響

對(duì)小鼠誘導(dǎo)便秘后收集各組小鼠每日的糞便,觀察便秘對(duì)小鼠排便的影響(圖3)。由小鼠的糞便狀態(tài)可以看出正常組小鼠的排便量最大;對(duì)照組小鼠的排便量最少;比沙可啶治療組小鼠的排便量與正常組相近;方竹筍喂養(yǎng)組和發(fā)酵方竹筍喂養(yǎng)組小鼠的排便量低于正常組,但大大高于對(duì)照組,且發(fā)酵方竹筍喂養(yǎng)組的排便量大于方竹筍喂養(yǎng)組。同時(shí)正常組、比沙可啶治療組、發(fā)酵方竹筍喂養(yǎng)組小鼠排出的糞便顆粒要大于對(duì)照組和方竹筍喂養(yǎng)組。便秘對(duì)身體造成的最明顯表現(xiàn)就是排便困難,排出的糞便量少且由于水分含量低導(dǎo)致顆粒干蔫[5],由觀察實(shí)驗(yàn)小鼠的糞便可以看出復(fù)方地芬諾酯誘導(dǎo)便秘后對(duì)照組小鼠的排便量大大下降,比沙可啶明顯的緩解了排便量下降的情況,方竹筍和發(fā)酵方竹筍也能起到緩解便秘增大排便的效果,且發(fā)酵方竹筍的效果更為優(yōu)異,明顯高于未發(fā)酵的普通方竹筍?？梢?jiàn)方竹筍是一種很好的緩解便秘的食品,并且發(fā)酵可以使其對(duì)便秘的緩解作用得到提高。

圖3 誘導(dǎo)便秘后小鼠糞便狀態(tài)Fig.3 Dejection states of mice after inducing constipation

2.4 發(fā)酵方竹筍與新鮮方竹筍對(duì)活性炭推進(jìn)率的影響

由圖4和表1可以看出活性炭水在正常組小鼠小腸中的推進(jìn)距離(50.3 cm)和推進(jìn)率(96.5%)最高,顯著高于其他各組小鼠(p<0.05)。對(duì)照組小鼠由于誘導(dǎo)便秘,活性炭在小腸中的推進(jìn)距離(16.7 cm)和推進(jìn)率(32.2%)最低。比沙可啶治療組小鼠由于藥物的治療,便秘得到緩解,活性炭的推進(jìn)距離和推進(jìn)率較對(duì)照組大幅度提高,略低于正常組。活性炭在方竹筍和發(fā)酵方竹筍喂養(yǎng)組小鼠小腸的推進(jìn)較對(duì)照組也有較大提高,推進(jìn)距離和推進(jìn)率都大于對(duì)照組,低于正常組和比沙可啶治療組(p<0.05),且發(fā)酵方竹筍喂養(yǎng)組小鼠小腸中的活性炭比方竹筍喂養(yǎng)組推進(jìn)得更多,推進(jìn)率更高?；钚蕴吭谛∧c中的推進(jìn)距離和推進(jìn)率是衡量小腸功能的重要指標(biāo),可以判斷小鼠的便秘程度,推進(jìn)距離越長(zhǎng),推進(jìn)率越高意味便秘的程度更低[15]。從小鼠排出首粒黑便的時(shí)間可以看出,由于方竹筍的作用,活性炭黑便在腸道中滯留時(shí)間減少,更快速的通過(guò)小腸;發(fā)酵后的方竹筍效果更為明顯,使活性炭盡量多的通過(guò)小腸。由此可見(jiàn),本研究中便秘模型建立后小鼠小腸的活力差異明顯,活性炭在正常組和對(duì)照組中推進(jìn)具有顯著差異(p<0.05),方竹筍可以顯著緩解便秘,使活性炭在小腸中的推進(jìn)大幅度提高,且發(fā)酵后的方竹筍具備比未發(fā)酵的方竹筍更好的緩解便秘效果。

表1 發(fā)酵方竹筍對(duì)活性炭水在便秘小鼠小腸中的推進(jìn)效果

注:同行不同字母表示各組數(shù)據(jù)平均值具有顯著差異(p<0.05)，表2同。

圖4 活性炭在便秘小鼠小腸中的推進(jìn)情況Fig.4 Propel state of activated carbonin small intestine of constipation mice Small intestineof activated carbon-induced constipation mice

2.5 發(fā)酵方竹筍與新鮮方竹筍對(duì)小鼠小腸的影響

由圖5可以看到正常組小鼠的小腸壁厚度正常,小腸絨毛整齊;對(duì)照組小鼠的小腸壁不同的位置厚度不一,小腸絨毛大部分出現(xiàn)斷裂變短的現(xiàn)象。比沙可啶治療組小鼠的小腸壁厚度出現(xiàn)輕微的變化,個(gè)別位置出現(xiàn)厚度不均衡,但是小腸絨毛沒(méi)有出現(xiàn)斷裂的現(xiàn)象,整體與正常組小鼠相似。方竹筍喂養(yǎng)組小鼠的小腸壁厚度也出現(xiàn)不均一的情況,相當(dāng)部分小腸絨毛也出現(xiàn)的斷裂;發(fā)酵方竹筍喂養(yǎng)組小鼠較方竹筍喂養(yǎng)組僅有小部分小腸絨毛發(fā)生的斷裂,小腸腸壁厚度接近正常組和比沙可啶治療組。便秘會(huì)導(dǎo)致小腸內(nèi)壁受到一定的損傷,包括小腸絨毛變短和斷裂,影響正常的吸收和排便[13]?；钚蕴吭谛∧c中滯留的時(shí)間越長(zhǎng),碳粒對(duì)腸道的影響越大,碳粒隨著小腸的蠕動(dòng)對(duì)腸壁造成損傷加大,使更多的小腸絨毛斷裂。從整體上看,便秘對(duì)小鼠小腸有較大影響,小腸壁的厚度出現(xiàn)不均一狀態(tài)且小腸絨毛發(fā)生斷裂,而發(fā)酵方竹筍能得到接近比沙可啶減輕便秘對(duì)小腸影響的效果,使活性炭通過(guò)小腸時(shí)間減少,減輕碳粒對(duì)小腸絨毛的影響,其作用明顯優(yōu)于新鮮方竹筍。

2.6 發(fā)酵方竹筍與新鮮方竹筍對(duì)小鼠血清指標(biāo)的影響

圖5 小鼠小腸的形態(tài)觀察(10×5)Fig.5 Morphologic observation of mice small intestine(10×5)

由表2可以觀察到正常組小鼠血清中的MTL、ET-1、VIP和AchE水平顯著高于其他各組(p<0.05),對(duì)照組小鼠的MTL、ET-1、VIP和AchE水平最低。比沙可啶治療組、發(fā)酵方竹筍喂養(yǎng)組和方竹筍喂養(yǎng)組小鼠的MTL、ET-1、VIP和AchE的血清水平依次降低,都低于正常組高于對(duì)照組。胃動(dòng)素(MTL)是一種能夠刺激分泌胃蛋白酶和促進(jìn)腸道蠕動(dòng)的胃腸激素,能夠有利于腸道的正常生理活動(dòng)和促進(jìn)排便[16]。內(nèi)皮素可以保持血管的張力和保持心血管系統(tǒng)正常,避免便秘造成的其他疾病,內(nèi)皮素-1(ET-1)是調(diào)節(jié)心血管功能的重要因子,具有促進(jìn)血管正常的收縮與舒張、緩解便秘造成的血管收縮不正常等作用[17]。血管活性腸肽(VIP)具有平滑肌松弛和舒張血管的作用,還能增加小腸分泌液的產(chǎn)生和刺激腸道的蠕動(dòng),VIP的分泌減少可以直接導(dǎo)致便秘[18]。乙酰膽堿酯酶(AchE)對(duì)調(diào)整腸道收縮和促進(jìn)粘液的分泌都有重要的作用,通過(guò)增強(qiáng)腸道收縮和腸道內(nèi)粘液的分泌能使糞便更容易排出,避免便秘[19]。小鼠血清中的MTL、ET-1、VIP和AchE水平會(huì)隨著便秘程度的增強(qiáng)而降低,本實(shí)驗(yàn)中發(fā)酵方竹筍較對(duì)照組可以顯著升高M(jìn)TL、ET-1、VIP和AchE水平[15],且升高的幅度也大于未發(fā)酵的新鮮方竹筍,可見(jiàn)發(fā)酵方竹筍對(duì)緩解便秘具有很好的效果。

表2 實(shí)驗(yàn)小鼠胃動(dòng)素(MTL)、內(nèi)皮素-1(ET-1)、血管活性腸肽(VIP)和乙酰膽堿酯酶(AchE)血清水平

3 結(jié)論

本研究通過(guò)復(fù)方地芬諾酯誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生便秘,建立小鼠便秘模型來(lái)檢測(cè)發(fā)酵方竹筍對(duì)便秘的預(yù)防作用。小鼠通過(guò)攝取含有發(fā)酵方竹筍的飼料模擬人體食用方竹筍的過(guò)程,使發(fā)酵方竹筍在小鼠體內(nèi)發(fā)揮作用。觀察活性炭在小鼠體內(nèi)作用發(fā)現(xiàn),食用發(fā)酵方竹筍飼料的小鼠排出黑便的時(shí)間小于對(duì)照組小鼠和食用方竹筍飼料的小鼠,略高于正常小鼠和比沙可啶處理小鼠;活性炭在食用發(fā)酵方竹筍飼料的小鼠小腸中的推進(jìn)率也得到了相似的結(jié)果,低于正常小鼠,高于對(duì)照小鼠和方竹筍喂養(yǎng)小鼠。通過(guò)HE切片觀察到便秘可以使小腸受到損傷、小腸壁和小腸絨毛形態(tài)受到顯著影響;發(fā)酵方竹筍可以明顯緩解和降低便秘造成的不良影響。通過(guò)檢測(cè)小鼠血清中的胃動(dòng)素(MTL)、內(nèi)皮素-1(ET-1)、血管活性腸肽(VIP)和乙酰膽堿酯酶(AchE)水平也發(fā)現(xiàn),發(fā)酵方竹筍相對(duì)對(duì)照組可以顯著升高以上指標(biāo),使上述血清指標(biāo)接近正常組小鼠。對(duì)發(fā)酵方竹筍纖維的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)發(fā)酵過(guò)程可以改善方竹筍的纖維結(jié)構(gòu),使纖維有更好的緩解便秘效果。由以上結(jié)果可以得出發(fā)酵方竹筍可以提高方竹筍原有的便秘預(yù)防效果,是一種優(yōu)質(zhì)的緩解便秘的發(fā)酵食品。

[1]李睿,吳良如,周昌平. 方竹筍礦質(zhì)元素營(yíng)養(yǎng)成分的研究[J]. 竹子研究匯刊,2007,26(4):37-39.

[2]王莉,付甫永. 金佛山方竹筍的生物學(xué)特性及采收加工技術(shù)[J]. 中國(guó)農(nóng)村小康科技,2008(11):64-66.

[3]張仁固,李明,汪曉晴,等. 南川方竹筍特殊品質(zhì)形成原因初探[J]. 世界竹藤通訊,2010,8(1):30-33.

[4]李安平,胡春水,謝碧霞,等. 乳酸菌發(fā)酵制備竹筍膳食纖維的研究[J]. 食品工業(yè)科技,1999,20(1):38-39.

[5]史紅,周銘心. 便秘的病因研究[J]. 便秘的病因研究,2007,25(3):107-111.

[6]鄧向雷. 消除便秘的七種食物武器[J]. 飲食科學(xué),2009,30(10):16.

[7]王瑩,蔡?hào)|聯(lián),袁靜玨,等. 多種膳食纖維配伍改善便秘的效果[J]. 武警醫(yī)學(xué),2014,25(1):13-15.

[8]李安平,謝碧霞. 發(fā)酵竹筍膳食纖維改善小鼠胃腸道功能的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 食品工業(yè)科技,2005,26(7):171-173.

[9]楊宗澤,張翠丹,楊彩然. 復(fù)方地芬諾醋對(duì)雛雞腸道蠕動(dòng)的影響[J]. 中國(guó)家禽學(xué)報(bào),2005,9(1):158-161.

[10]賈紅慧,袁潔,李強(qiáng)華,等. 實(shí)驗(yàn)條件對(duì)復(fù)方地芬諾酯小鼠便秘模型的影響[J]. 中藥藥理與臨床,2008,24(4):70-72.

[11]Qian Y,Zhao X,Kan J. Preventive effect of resistant starch on activated carbon-induced constipation in mice[J]. Experimental and Therapeutic Medicine,2013,6(1):228-232.

[12]鄭慧伶,李艷霞,張翠麗,等. 四種小鼠便秘模型建立方法的比較[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2013,13(28):5456-5459.

[13]騫宇,趙欣. 抗消化淀粉(RS3)對(duì)昆明小鼠的便秘預(yù)防效果[J]. 食品科學(xué),2014,35(16):241-245.

[14]張雪芳,徐桂華,陳金珍,等. 便秘的病因及治療進(jìn)展[J].中華全科醫(yī)學(xué),2009,7(11):1229-1231.

[15]Li GJ,Qian Y,Sun P,et al. Preventive effect of polysaccharide of Larimichthys Crocea swimming bladder on activated carbon-induced constipation in mice[J]. Journal of the Korean Society for Applied Biological Chemistry,2004,57(2):167-172.

[16]劉昳,趙小睿,王銳,等. 枳術(shù)丸對(duì)2型糖尿病功能性便秘血清胃腸激素的影響[J]. 中國(guó)中藥雜志,2008,33(24):2966-2968.

[17]宋惠麗,田風(fēng)勝,喬萍,等. 三黃片對(duì)糖尿病便秘患者內(nèi)皮素-1及一氧化氮的影響[J]. 中國(guó)中醫(yī)藥科技,2010,17(4):285-287.

[18]King SK,Sutcliffe JR,Ong SY,et al. Substance P and vasoactive intestinal peptide are reduced in right transverse colon in pediatric slow-transit constipation[J]. Neurogastroenterology & Motility,2010,22(8):883-892.

[19]Moriya R,Fujikawa T,Ito J,et al. Pancreatic polypeptide enhances colonic muscle contraction and fecal output through neuropeptide Y Y4 receptor in mice[J]. European Journal of Pharmacology,2010,627(1-2):258-264.

Preventive effect of fermentedChimonobambusaquadrangularisshoot on diphenoxylate induced constipation

LI Gui-jie1,2,3,4,5,6,WANG Cun2,3,4,5,KUANG Gang2,3,4,5,CHEN Shao-cheng2,3,4,5,XIONG Zheng-wei2,3,4,5,ZHAO Xin2,3,4,5,6,*

(1.College of Food Science,Southwest University,Chongqing 400715,China;2.Department of Biological and Chemical Engineering,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China;3.Chongqing Engineering Laboratory of Functional Food,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China;4.Chongqing Enterprise Engineering Research Center of Functional Food,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China;5.Chongqing Collaborative Innovation Center of Functional Food,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China;6.Institute of Functional Ecological Food,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China)

This study was to determine the preventive effect of fermentedChimonobambusaquadrangularisshoot(FCQS)on diphenoxylate induced constipation in mice. The FCQS had more loosened fiber tissue structure than unfermentedChimonobambusaquadrangularisshoot(UCQS),which was more helpful to relieve constipation. After the mice were fed with FCQS for 9 days,the time consumption for their first black stool defecation was shorter than the control group and UCQS groups but longer than normal group and bisacodyl treatment group. The gastrointestinal transit of FCQS group was higher than control group and UCQS group,but lower than normal group and bisacodyl group. By observing the HE section of mice intestine,it was found that FCQS reduced the injury of intestinal tract suffering from constipation and alleviated the damages of the intestinal villi which were better than UCQS played. FCQS also can increase the serum levels of MTL(motilin),ET-1(endothelin-1),VIP(vasoactive intestinal peptide)and AchE(acetylcholinesterase)comparing with the control group. These results showed that FCQS had good preventive effect on constipation.

Chimonobambusaquadrangularisshoot;fermentation;constipation

2014-11-24

李貴節(jié)(1983-)，男，碩士，副教授，研究方向:功能性食品及食品營(yíng)養(yǎng)與安全，E-mail:ligj@cque.edu.cn。

*通訊作者:趙欣(1981-)，男，博士，教授，研究方向：功能性食品及食品營(yíng)養(yǎng)與安全，E-mail：foods@live.cn。

重慶市教委科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(KJ1401411)；重慶第二師范學(xué)院創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)計(jì)劃(KYC-cxtd03-20141002)；重慶高校創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)計(jì)劃資助項(xiàng)目( KJTD201325)。

TS201.1

A

1002-0306(2015)15-0357-05

10.13386/j.issn1002-0306.2015.15.067