甜羅勒提取物的抗氧化作用以及心血管疾病治療研究

晨曦等

【摘要】目的 探討甜羅勒提取物的抗氧化作用活性和臨床心血管疾病治療方向。方法 通過甜羅勒乙醇提取物對DPPH和ABTS自由基清除能力的測定研究其抗氧化活性根據(jù)其抗氧化活性檢測其治療心血管疾病的有效性和臨床應(yīng)用方案。結(jié)果 平行測定三次，結(jié)果表明甜羅勒70%乙醇提取物具有很好的清除DPPH自由基的作用，IC50為0.047 mg/mL，有很好的清除ABTS自由基的作用，IC50為0.043 mg/mL。結(jié)論 甜羅勒提取物具有良好的抗氧化作用和心血管疾病治療的研究價值。

【關(guān)鍵詞】甜羅勒；DPPH和ABTS；抗氧化；心血管

【中圖分類號】R54 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

甜羅勒學(xué)名（Sweet Basil），原產(chǎn)自埃及，系一年生草本，甜羅勒是一種從國外引進(jìn)的另類洋野菜，含有蛋白質(zhì)、纖維素，碳水化合物、維生素A、C和鈣，因其高營養(yǎng)、無公害而倍受消費者矚目。甜羅勒不僅口味獨特，而且還具有藥用養(yǎng)生價值?？芍挝腐d攣、腎臟病及跌打損傷諸癥，又具有消食、去惡氣、消水氣、明目的功效，久食健身、益智、滋顏、延緩機體衰老。但是，目前尚未見甜羅勒提取物在抗氧化活性和心血管疾病治療方面的實驗報道。本文通過甜羅勒乙醇提取物對DPPH和ABTS自由基清除能力的測定，研究其抗氧化活性；為甜羅勒臨床應(yīng)用的研究提供科學(xué)根據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般材料

甜羅勒購自廈門燕來福制藥有限公司（國藥準(zhǔn)字20090165）。DPPH（1，1-d-ipheny-l 2- picryhydrazyl）及ABTS（2，2.-azinobis-3-ethy -lbenzothiazolin-6-sulfonic acid）購自美國Sigma公司，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司）；SHB-ⅢA循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；水浴鍋（上海愛朗儀器有限公司）；電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；多功能酶標(biāo)儀 SpectraMax M2（Molecular Devices）；多功能粉碎機（永康市小寶電器有限公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 提取方法

甜羅勒晾干后，取30 g加入480 mL 70%乙醇浸泡40 min，85℃水浴回流提取2 h，過濾，將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓回收乙醇后得到粗浸膏，將粗浸膏置于-80℃結(jié)冰后用冷凍干燥機進(jìn)行干燥，備用。

1.2.2 甜羅勒提取物清除DPPH自由基能力的測定

將甜羅勒提取物用70%乙醇配成不同濃度的溶液備用，DPPH用70%乙醇配成0.04 mg/mL的溶液，吸取提取物溶液75 μL于96孔板中，加入DPPH溶液225 μL作為樣品組；以70%乙醇代替DPPH溶液作為樣品背景組，以70%乙醇代替提取物溶液作為陰性對照組，置于30°培養(yǎng)箱中反應(yīng)30 min， 混勻后于室溫避光靜置30 min，在517 nm處測定吸光度值，其中樣品孔為B，樣品背景孔為C，陰性對照孔為A[1]。

1.2.3 甜羅勒提取物清除ABTS自由基能力的測定

將甜羅勒提取物用70%乙醇配成不同濃度的溶液備用。

1.2.3.1 配置ABTS工作液

5 mL 7mmol/L ABTS和88μL 140 mmol/L過硫酸鉀混合，室溫，靜置過夜，使用前用無水乙醇稀釋至734 nm波長下吸光度為（0.70±0.02）。

1.2.3.2 加樣

稱取一定質(zhì)量樣品，溶于70%乙醇，然后稀釋到所需濃度

A1：0.1 mL樣品+4 mLABTS

A2：0.1 mL樣品+4 mL無水乙醇

A3：0.1 mL70%乙醇+4 mL ABTS

A0：0.1 mL70%乙醇+無水乙醇

混勻，混勻后開始計時，于734 nm測定每分鐘吸光度[2]。

2 實驗結(jié)果

2.1 采用DPPH法測定甜羅勒乙醇提取物抗氧化活性

按DPPH清除率（%）=[1-（B-C）/A]×100%公式計算甜羅勒乙醇提取物對DPPH自由基的抑制率的IC50值，平行測定三次。結(jié)果表明甜羅勒70%乙醇提取物具有很好的清除DPPH自由基的作用，IC50為0.047 mg/mL，實驗結(jié)果見表1，圖1。

2.2 采用ABTS法測定甜羅勒乙醇提取物抗氧化活性

按ABTS清除率（%）=[1-（B-C）/A]×100%公式計算提取物對ABTS自由基的抑制率，平行測定三次。計算甜羅勒乙醇提取物對不同提取物對ABTS自由基清除的IC50值。結(jié)果表明甜羅勒70%乙醇提取物具有很好的清除ABTS自由基的作用，IC50為0.043 mg/mL，實驗結(jié)果見表2，圖2。

3 討 論

氧化和抗氧化的失衡是很多心血管疾病發(fā)病機制中的重要環(huán)節(jié)，是導(dǎo)致心血管系統(tǒng)結(jié)構(gòu)功能異常的重要原因之一。一系列對抗自由基、防止損傷的洗脫在機體進(jìn)化過程中形成，其中包括酶性清除劑（如VitE，VitA，VitC，谷胱苷肽等）。如果氧自由基生成異常增多或腎抗氧化能力下降，超過體內(nèi)自由基清除系統(tǒng)地清除能力，造成體內(nèi)氧自由基（ROS）大量堆積[4]。氧自由基作用于人體細(xì)胞，引起核酸（DNA）、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等的氧化或再氧化損害，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性和功能，造成細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。大量研究證實機體抗氧化能力的下降，氧化與抗氧化的失衡，導(dǎo)致活性氧產(chǎn)生過多，在高血壓、糖尿病和冠心病的發(fā)生發(fā)展過程中有重要意義。機體內(nèi)氧自由基可產(chǎn)生大量導(dǎo)致病理損害因素，此時就必須有外來提供的物質(zhì)才能消除其鏈?zhǔn)椒磻?yīng)， 這就是自由基清除劑[5]。已知維生素C、維生素E、輔酶Q等是存在于機體的正性分子物質(zhì)， 亦是抗氧化劑。DPPH在有機溶劑中是一種穩(wěn)定的自由基，其醇溶液呈紫色，且需低溫避光儲藏，具有單一電子，故能接受一個電子或氫離子，在波長為517nm下具有最大吸收[6]，從而以評價試驗樣品的抗氧化的能力。ABTS在適當(dāng)?shù)难趸瘎┳饔孟卤谎趸示G色，而當(dāng)有抗氧化物存在的情況下ABTS的產(chǎn)生就會受到抑制 [7]。因此，增加內(nèi)源性抗氧化酶的活性，減輕人體細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷，已成為目前延緩臟器疾病的有效方法。

抗氧化劑可以幫助捕獲并中和自由基， 防止自由基對人體的損害。臨床治療動脈粥樣硬化、糖尿病、腎病等各個領(lǐng)域都應(yīng)用到抗氧化劑。常見維生素，維生素C和維生素E的抗氧化強度嫌貴較弱，并不是人體內(nèi)有效的抗氧化劑，但是目前合成的抗氧化劑普羅布考的有效性雖然已得到證實，但因為合成抗氧化劑通常具有一定的毒副作用，不適合長期使用。因此，尋找天然、高效、低毒的抗氧化劑成為一種必然的趨勢。植物類中藥是天然抗氧化劑的重要來源，其所含的天然抗氧化劑不但有抑制體內(nèi)脂質(zhì)過氧化和清除自由基的作用，同時可促進(jìn)體內(nèi)抗氧化酶與內(nèi)源性抗氧化劑的合成，具有比合成抗氧化劑更多的優(yōu)越性，在心血管藥物治療領(lǐng)域的抗氧化作用和調(diào)節(jié)氧化平衡等方面有重大的研究價值，而甜羅勒提取物有良好的抗氧化作用，能有效減輕機體的氧化應(yīng)激損傷，進(jìn)一步細(xì)化后可作為復(fù)方單體應(yīng)用于臨床心血管治療也可作為臨床心血管藥物開發(fā)的一個研究方向。

參考文獻(xiàn)

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