釀酒酵母SH 003生物轉(zhuǎn)化2-苯乙醇條件的優(yōu)化

黃筱萍，黃國昌，劉蘭，熊大維，張婷（江西省科學(xué)院微生物研究所，江西南昌330029）

釀酒酵母SH 003生物轉(zhuǎn)化2-苯乙醇條件的優(yōu)化

黃筱萍，黃國昌，劉蘭，熊大維，張婷
（江西省科學(xué)院微生物研究所，江西南昌330029）

摘要：以L-苯丙氨酸為底物，利用釀酒酵母轉(zhuǎn)化合成2-苯乙醇，對影響釀酒細(xì)胞轉(zhuǎn)化的因素進(jìn)行考察。確定酵母菌轉(zhuǎn)化的菌齡，通過單因素和正交試驗(yàn)，優(yōu)化轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件。優(yōu)化后的培養(yǎng)基組成：葡萄糖120 g/L，酵母粉5 g/L，L-苯丙氨酸8 g/L，MgSO40.2 g/L，KH2PO40.05mol/L，K2HPO40.05mol/L，28℃200 r/min培養(yǎng)轉(zhuǎn)化24 h，2-苯乙醇產(chǎn)率達(dá)4.37g/L，比優(yōu)化前提高30.1%。

關(guān)鍵詞：2-苯乙醇；釀酒酵母；優(yōu)化；生物轉(zhuǎn)化

β-苯乙醇（β-phenylethanol，2-PE）亦稱2-苯乙醇，具有柔和、愉快而持久的玫瑰香氣而廣泛用于各種食用香精和煙用香精中。目前主要是通過有機(jī)合成或從天然物中萃取獲得該產(chǎn)品。隨著食品生物技術(shù)的飛速發(fā)展和人們越來越重視食品的安全性，追求有機(jī)食品、生態(tài)食品、綠色食品已成為一種時(shí)尚，國內(nèi)外食品生產(chǎn)研發(fā)人員也越來越傾向于使用天然食品添加劑[1]。天然2-苯乙醇是通過玫瑰精油中提取獲得，受到植物原料等因素影響，無法進(jìn)行大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)，且價(jià)格昂貴[2]。由此，通過微生物發(fā)酵法生產(chǎn)天然苯乙醇香料的工藝研究得到國內(nèi)外業(yè)內(nèi)人士的廣泛關(guān)注與重視。多種酵母具有合成2-苯乙醇的能力，如馬克斯克魯維酵母[3]、發(fā)酵畢赤酵母[4]、乳酸克魯維酵母、釀酒酵母及異常漢遜酵母等[5]，主要通過艾氏途徑（Ehrlich pathway）合成2-苯乙醇，但通常產(chǎn)率較低，主要是嚴(yán)重的產(chǎn)物抑制成為酵母合成轉(zhuǎn)化2-苯乙醇的瓶頸。EtschmannM[6]和崔志峰[7]分別報(bào)道了在優(yōu)化的條件下單相分批發(fā)酵酵母菌株產(chǎn)2-苯乙醇達(dá)3.8 g/L和3.6 g/L，榮紹峰[8]篩選出一株釀酒酵母菌種，在優(yōu)化的條件下2-苯乙醇含量達(dá)3.2 g/L，汪琨[9]等用5 L發(fā)酵罐小試生產(chǎn)2-苯乙醇，產(chǎn)量最高達(dá)4.1 g/L，梅建風(fēng)[10]通過正交和響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，在最優(yōu)的培養(yǎng)條件下，2-苯乙醇產(chǎn)量達(dá)4.8 g/L，是至今搖瓶單批發(fā)酵產(chǎn)率最高的報(bào)道。因此篩選對2-苯乙醇耐受性好、轉(zhuǎn)化率高的菌株成為國內(nèi)外持續(xù)研究開發(fā)的關(guān)鍵。前期工作中，本實(shí)驗(yàn)室從葡萄園土壤中篩選獲得一株對2-苯乙醇耐受性較高的菌株SH003，具有較好的生物轉(zhuǎn)化合成2-苯乙醇能力，并鑒定為釀酒酵母。本試驗(yàn)通過單因子、正交試驗(yàn)，進(jìn)一步優(yōu)化轉(zhuǎn)化條件，探討各因素的影響水平，得到較優(yōu)的培養(yǎng)基組成和轉(zhuǎn)化條件。動(dòng)相為甲醇∶水=1∶1（mL/mL），流速為1.0mL/min，檢測波長260 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量10μL。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1菌種

釀酒酵母SH003：由江西省科學(xué)院微生物研究室分離鑒定。

1.1.2培養(yǎng)基

斜面及保藏培養(yǎng)基：麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基。

種子培養(yǎng)基（g/L）：葡萄糖30，蛋白胨5，酵母粉3，麥芽汁3。

基礎(chǔ)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基（g/L）：葡萄糖100，酵母粉3，L-苯丙氨酸10，KH2PO45，MgSO40.2。

1.1.3主要試劑

L-苯丙氨酸：河北冀海生物科技有限公司，純度99.5%；2-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)品：Sigma公司，純度98.5%；甲醇：色譜純；超純水：自制；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。1.2主要設(shè)備

LC-20A高效液相色譜儀、1250紫外分光光度計(jì)：日本島津公司；HC-C18反相色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）：美國Agilent公司；Prachtum 224-1CN分析天平：德國Sartorius公司。

1.3方法

1.3.1種子液制備

從斜面挑取1～2環(huán)菌苔至30 m L種子液中，于28℃、180 r/min培養(yǎng)24 h。

1.3.2轉(zhuǎn)化培養(yǎng)

種子液按10%的接種量接種于含有L-苯丙氨酸轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液中，于28℃200 r/min培養(yǎng)24 h，轉(zhuǎn)化液于10 000 r/min離心10min，上清液采用高效液相色譜法檢測發(fā)酵液中的L-苯丙氨酸和2-苯乙醇含量。

1.3.3酵母細(xì)胞生物量的測定

菌體細(xì)胞OD600與菌體干重（DCW）的關(guān)系：轉(zhuǎn)化液用純水稀釋15、20、25、30、40倍，以同樣稀釋度的未接種培養(yǎng)基為空白，用分光光度計(jì)測定波長600 nm處的OD值。取同樣稀釋度的轉(zhuǎn)化液50m L于已稱重量的離心管中，于8 000 r/min離心10min，用純水洗2次，于100℃烘干至恒重，測菌體干重。獲得菌體干重與OD600之間的線性曲線，通過測定菌體OD600計(jì)算菌體干重。

1.3.4反相高效液相色譜法測定L-苯丙氨酸和2-苯乙醇含量

發(fā)酵液經(jīng)10 000 r/min離心10min，取上清液，稀釋，用0.22μm聚醚水性濾膜過濾。于HPLC分析。流

2　結(jié)果與討論

2.1酵母菌體干重與OD600的關(guān)系

按方法1.3.3，得圖1，為酵母菌菌體干重與OD600間的關(guān)系曲線，呈良好的線性關(guān)系，可通過測定菌液的OD600獲得菌體干重。2.2釀酒酵母SH003生長曲線和種齡對轉(zhuǎn)化合成2-苯乙醇的影響

圖1　酵母細(xì)胞OD600與菌體干重的關(guān)系曲線Fig.1　The relationship curve between ofOD600and dry cellweight （DCW）

釀酒酵母SH003接種種子培養(yǎng)液中，于28℃200 r/min搖瓶培養(yǎng)，每2 h取樣，樣品稀釋放20倍，于紫外分光光度計(jì)測定OD600值，同時(shí)接種基礎(chǔ)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，于28℃200 r/min搖瓶培養(yǎng)24 h，測定2-苯乙醇產(chǎn)量，結(jié)果見圖2。

圖2　SH 003種子生長曲線和種齡對轉(zhuǎn)化合成2-PE的影響Fig.2　Thegrow th curveofseed SH003 and theeffectofseed culturing tim eon 2-PE production

由圖2可知，菌種培養(yǎng)6 h后，進(jìn)入對數(shù)生長期，培養(yǎng)22 h，菌體干重增速減緩，為穩(wěn)定期，26 h菌體干重最高，達(dá)5.58 g/L，繼續(xù)培養(yǎng)則略有下降。從菌齡8 h開始接種進(jìn)行轉(zhuǎn)化2-苯乙醇，隨著種齡的增長，生物合成轉(zhuǎn)化2-苯乙醇產(chǎn)量增加，種齡在20 h～28 h 時(shí)2-苯乙醇產(chǎn)量相差不大，達(dá)2.9 g/L～3.0 g/L，但繼續(xù)增加種齡，則合成2-苯乙醇產(chǎn)量明顯下降，這可能是處于衰亡期菌體細(xì)胞自溶和轉(zhuǎn)化酶活力下降有關(guān)，因此以下試驗(yàn)均采用培養(yǎng)24 h的菌體細(xì)胞作為轉(zhuǎn)化種子液。

2.3碳源種類對生物轉(zhuǎn)化2-苯乙醇的影響

根據(jù)釀酒酵母可同化碳源試驗(yàn)，選用葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、半乳糖、甘油、玉米淀粉為碳源，濃度均為80 g/L，L-苯丙氨酸為8 g/L，其余成分均相同，結(jié)果見表1。

表1　不同碳源對轉(zhuǎn)化合成2-苯乙醇的影響Table 1　Effectsof carbon sources concentrate on 2-PE production by bioconversion

表1結(jié)果表明，SH003能較好地利用蔗糖和葡萄糖作為碳源轉(zhuǎn)化成2-苯乙醇，亦能利用麥芽糖，但以玉米淀粉、甘油和半乳糖為碳源轉(zhuǎn)化產(chǎn)物濃度很低，因此以后的試驗(yàn)選用蔗糖或葡萄糖為碳源。

2.4糖濃度對轉(zhuǎn)化2-苯乙醇的影響

在以葡萄糖為碳源的基礎(chǔ)上，考察了不同糖濃度對轉(zhuǎn)化2-苯乙醇的影響，糖濃度范圍在20 g/L～200 g/L之間，L-苯丙氨酸為8 h/L，結(jié)果見圖3。

圖3　葡萄糖濃度對2-苯乙醇合成的影響Fig.3　Theeffect ofglucose concentration on 2-PE bioconversion

從圖3中可以看出，在葡萄糖濃度為20g/L～100g/L時(shí)。隨著葡萄糖濃度的增加，2-苯乙醇產(chǎn)量逐漸增加，當(dāng)糖濃度大于100 g/L時(shí)，2-苯乙醇產(chǎn)量增加不明顯，當(dāng)糖濃度大于140 g/L時(shí)，2-苯乙醇產(chǎn)量略有下降。在低糖濃度時(shí)，菌體干重隨著糖濃度的增加而增加，當(dāng)糖濃度大于80 g/L時(shí)，菌體干重保持較平穩(wěn)的狀態(tài)，這表明菌株SH003對高濃度的葡萄糖耐受性較強(qiáng)。

2.5氮源對轉(zhuǎn)化2-苯乙醇的影響

酵母菌能利用無機(jī)氮和有機(jī)氮，在培養(yǎng)基中添加底物L(fēng)-苯丙氨酸8 g/L，考察不添加氮源和分別添加3種常用的氮源對酵母菌轉(zhuǎn)化合成2-苯乙醇的影響。表2為搖瓶培養(yǎng)24 h的結(jié)果。

表2　不同氮源對生物轉(zhuǎn)化2-苯乙醇的影響Table 2　Theeffect of differentnitrogen sourceson 2-PE production

表2表明，在未添加其它氮源僅以底物L(fēng)-苯丙氨酸為唯一氮源的條件下，2-苯乙醇產(chǎn)量僅次于添加了酵母粉的產(chǎn)量，但菌體干重略低于添加了其它氮源菌體干重。當(dāng)培養(yǎng)基中添加了無機(jī)氮源硫酸銨后，雖然其菌體得率最高，但2-苯乙醇產(chǎn)量非常低，僅為0.25 g/L，可能是由于大量NH4+離子存在，菌體不利用L-苯丙氨酸轉(zhuǎn)氨反應(yīng)釋放的NH3，導(dǎo)致艾氏代謝途徑不能順利進(jìn)行。添加蛋白胨為N源亦未能提高2-苯乙醇的產(chǎn)量，而添加酵母粉可明顯提高2-苯乙醇的產(chǎn)量，因此選用酵母粉作為輔助氮源。

圖4　酵母浸出粉濃度對生物轉(zhuǎn)化2-PE的影響Fig.4　The Effectofyeastextraction concentration on 2-PE bioconversion

分別在轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中添加0、1、3、5、7、9 g/L的酵母粉，在相同的轉(zhuǎn)化條件下分別測定2-苯乙醇的產(chǎn)量，結(jié)果見圖4。由圖4可知，隨著轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液中酵母粉濃度的增加，2-苯乙醇產(chǎn)物的濃度亦有所增加，當(dāng)酵母粉濃度達(dá)到5 g/L時(shí)，產(chǎn)物濃度最高，為3.4 g/L，而隨著添加酵母粉濃度的繼續(xù)升高，產(chǎn)物2-苯乙醇濃度反而開始下降，但菌體干重則隨著酵母粉的濃度增加而明顯增加，這表明添加適量的酵母粉有利于菌體轉(zhuǎn)化合成2-苯乙醇，而過量酵母粉只有利于菌體的生長。

2.6磷酸鹽及pH對酵母菌轉(zhuǎn)化合成2-苯乙醇的影響

磷是染色體和高能磷酸化合物的主要組成物質(zhì)，是細(xì)胞代謝必不可缺的元素之一。采用磷酸鹽類緩沖液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基初始pH和控制代謝過程中的pH以及加入CaCO3控制轉(zhuǎn)化過程的pH，考察pH對產(chǎn)物生成的影響，圖5為在基礎(chǔ)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中加入不同濃度的CaCO3（滅菌后加入），對SH003菌株生物轉(zhuǎn)化2-PE的作用。

圖5　CaCO3對轉(zhuǎn)化液pH和2-PE產(chǎn)量的影響Fig.5　Theeffect of CaCO3on pH and 2-PE bioconversion

由圖5可以看出，加入CaCO3調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化液中的pH，最高產(chǎn)量可達(dá)3.92 g/L，較不控制pH的對照提高15.3%，轉(zhuǎn)化結(jié)束終止pH亦較高，為5.2～5.3，而未加入CaCO3的對照轉(zhuǎn)化液終止pH為3.97，因此在轉(zhuǎn)化過程中控制轉(zhuǎn)化液的pH為5.2左右有利于轉(zhuǎn)化的順利進(jìn)行。細(xì)胞生物量沒有較大的波動(dòng)，這表明轉(zhuǎn)化液中的pH對菌體生長影響不大。以上結(jié)果表明，在轉(zhuǎn)化液中添加2 g/L的CaCO3有利于產(chǎn)物的合成。

由于CaCO3難溶于水，過量的CaCO3對用樹脂原位吸附2-PE和后續(xù)的提取工藝造成不利的影響，因此采用磷酸鹽緩沖液控制轉(zhuǎn)化液中的pH，圖6為不同摩爾濃度的pH6.8磷酸鉀緩沖液對生物合成轉(zhuǎn)化2-PE的影響。

圖6　磷酸鉀緩沖液濃度對轉(zhuǎn)化液pH和2-PE產(chǎn)量的影響Fig.6　Theeffectof potassium phosphate buffer solution（pH6.8）on pH and 2-PE production

由圖6可以看出，隨著磷酸鹽緩沖液（pH6.8）摩爾濃度的增加，2-PE產(chǎn)量明顯培加，當(dāng)磷酸鉀緩沖液為0.025mol/L時(shí)，產(chǎn)量為3.8 g/L，之后隨著濃度的增加，產(chǎn)量增加明顯減緩，當(dāng)磷酸鉀緩沖液濃度達(dá)0.075mol/L時(shí)，2-PE產(chǎn)量達(dá)3.98 g/L，增加36.2%，轉(zhuǎn)化液終止pH 為5.6，生物量亦明顯增加，這表明添加適量的磷酸鉀緩沖液可較好地控制轉(zhuǎn)化過程中的pH，有利于細(xì)胞生長和產(chǎn)物合成。

2.7無機(jī)鹽對酵母菌SH003生物轉(zhuǎn)化2-苯乙醇的作用

細(xì)胞生長繁殖和產(chǎn)物代謝過程中均需要無機(jī)鹽和微量元素，考察了在不同濃度的NaCl、MgSO4·7H2O、ZnSO4對合成2-苯乙醇的影響。MgSO4·7H2O對2-苯乙醇的合成有明顯的促進(jìn)作用，當(dāng)MgSO4·7H2O濃度達(dá)0.6 g/L時(shí)2-苯乙醇產(chǎn)率最高，達(dá)3.88 g/L，低濃度的ZnSO4對2-苯乙醇的合成無明顯影響，隨著濃度升高有輕微的抑制作用，而NaCl對2-苯乙醇的合成無影響。因此在培養(yǎng)基中可不添加ZnSO4和NaCl。

2.8培養(yǎng)基主要組分的正交試驗(yàn)

通過單因素優(yōu)化試驗(yàn)初步確定了影響酵母菌SH003生物轉(zhuǎn)化2-苯乙醇的主要影響因子為酵母粉、葡萄糖、磷酸鉀和MgSO4·7H2O，由于單因素試驗(yàn)不能綜合反應(yīng)各因素、水平間的交互作用，因此在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，即0.75mol/L磷酸鹽和0.6 g/L MgSO4·7H2O的條件下，采用L9（34）正交試驗(yàn)對培養(yǎng)基主要組分L-苯丙氨酸、葡萄糖和酵母粉進(jìn)行優(yōu)化，試驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果分析見表3和表4。

表3　L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析Table3　L9（34）orthogonaldesign and statisticalanalysis

表4　正交試驗(yàn)方差分析表Table4　Analysisof variance for orthogonal test

正交試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果表明，在優(yōu)化的單因子磷酸鹽和MgSO4·7H2O基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)的正交試驗(yàn)，2-PE產(chǎn)量均有較大的提高，而最佳培養(yǎng)基組成為葡萄糖120 g/L，酵母粉5 g/L，L-苯丙氨8 g/L。葡萄糖濃度對酵母細(xì)胞SH003合成轉(zhuǎn)化2-苯乙醇具有顯著影響，而酵母粉和L-苯丙氨酸對生物合成2-苯乙醇無顯著影響。

從表3中正交試驗(yàn)結(jié)果K值表明，底物L(fēng)-苯丙氨酸濃度越高，2-苯乙醇產(chǎn)量越高，為驗(yàn)證底物濃度對轉(zhuǎn)化合成2-PE的影響，在優(yōu)化的條件下，即葡萄糖120 g/L，酵母5 g/L，添加不同濃度底物進(jìn)行了試驗(yàn)，結(jié)果見表5。

表5　不同碳源對轉(zhuǎn)化合成2-苯乙醇的影響Table 5　Effectsof L-pheny lalan ine concentrateon 2-PE production by bioconversion

結(jié)果表明，隨著底物濃度提高，2-PE產(chǎn)量略有增加，但轉(zhuǎn)化率急劇下降，當(dāng)2-PE產(chǎn)量達(dá)4.4 g/L時(shí)，已達(dá)到細(xì)胞轉(zhuǎn)化合成產(chǎn)物的極限值，再提高底物濃度也不會增加產(chǎn)量，綜合考慮產(chǎn)量和底物轉(zhuǎn)化率，我們認(rèn)為底物濃度添加量在8 g/L比較適宜。

2.9溫度對轉(zhuǎn)化合成2-苯乙醇的影響

在上述優(yōu)化的培養(yǎng)基培養(yǎng)基組成條件下，分別進(jìn)行了在20、25、28、30、32、35、38℃轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，不同的轉(zhuǎn)化溫度下對生物轉(zhuǎn)化2-苯乙醇有顯著的影響，細(xì)胞在28℃～32℃轉(zhuǎn)化產(chǎn)物濃度較高，而低于26℃和高于32℃產(chǎn)物濃度明顯下降，這可能是在低溫條件下菌體生長較緩慢，酶活在低溫條件下活性降低，而過高的溫度也可導(dǎo)致一些酶失活和菌體快速衰老而影響產(chǎn)物合成，因此最適的轉(zhuǎn)化溫度為28℃～30℃。

2.10溶氧對轉(zhuǎn)化合成2-苯乙醇的影響

在搖瓶轉(zhuǎn)速為200 r/min的條件下，考察了250mL三角瓶中培養(yǎng)基裝量分別為25、50、75、100、125mL時(shí)對合成轉(zhuǎn)化2-苯乙醇產(chǎn)量的影響，酵母菌在生長和轉(zhuǎn)化過程中需要大量的氧進(jìn)行菌體繁殖和產(chǎn)物代謝，當(dāng)搖瓶中培養(yǎng)液裝量較多時(shí)，氧的供應(yīng)量不足而導(dǎo)致2-苯乙醇的產(chǎn)量有下降趨勢。精確的溶氧調(diào)控參數(shù)需在小型發(fā)酵罐中獲得。

3　小結(jié)

本試驗(yàn)通過釀酒酵母SH003菌株種子液生長曲線及種齡對轉(zhuǎn)化合成2-苯乙醇的影響，確定了最適種齡為20 h～24 h。通過單因素試驗(yàn)對轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，確定了對合成轉(zhuǎn)化2-苯乙醇影響較大的因素和轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基組成，合適的轉(zhuǎn)化碳源為葡萄糖和蔗糖，氮源為酵母粉，組成培養(yǎng)基合適的磷酸鉀緩沖液pH為6.8，在培養(yǎng)基中添加MgSO4和CaCO3有利于細(xì)胞合成2-苯乙醇。在單因素的基礎(chǔ)上，通過正交試驗(yàn)進(jìn)一步對葡萄糖、酵母粉和L-苯丙氨酸濃度進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化后的培養(yǎng)基配方為：葡萄糖120 g/L，酵母粉5 g/L，L-苯丙氨酸8 g/L，MgSO40.2 g/L，KH2PO46.8 g/L，K2HPO48.7 g/L。優(yōu)化后生物合成2-苯乙醇產(chǎn)量最高達(dá)4.37 g/L，比優(yōu)化前產(chǎn)量提高了30.1%。最適轉(zhuǎn)化溫度為28℃～30℃，在轉(zhuǎn)速200 r/min時(shí)，裝液量為50mL/250mL三角瓶。

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DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.22.040

收稿日期：2014-11-05

基金項(xiàng)目：江西省科技支撐項(xiàng)目（20133BBE50018）

作者簡介：黃筱萍（1965—），女（漢），研究員，碩士，主要從事生物發(fā)酵、活性物質(zhì)提取精制的研究。

The Optim ization of Bioconversion Conditions for the Production of 2-phenylethanolw ith Saccharomyces cerevisiae SH003

HUANGXiao-ping，HUANGGuo-chang，LIULan，XIONGDa-wei，ZHANGTing
（Institution ofMicrobiology，JiangxiAcademyof Sciences，Nanchang 330029，Jiangxi，China）

Abstract：The bioconversion conditions for the production of 2-phenylethanolwith Saccharomyces cerevisiae SH003werestudied.Culture timeofseed liquid wasdetermined.The experimentsofsingle factorand orthogonal design were carried out to optimize the compositions of bioconversion and cultivation conditions for 2-phenylethanol production.The optimized medium contains 120 g/L glucose，5 g/L yeast extract，8 g/L L-phenylalanine，0.2 g/LMgSO4，0.05mol/L KH2PO4and 0.05mol/LK2HPO4.Incubated at28℃and 200 r/min for24 h，the yield of2-phenylethanol reached up to 4.37 g/L，increased by 30.1%compared with the original condition.

Keywords：2-phenylethanol；Saccharomycescerevisiae；optimization；bioconversion