CT聯(lián)合尿液中Her2和uPA對輸尿管癌的診斷研究

四川省成都市第三人民醫(yī)院泌尿外科 (四川 成都 600031)

潘玉龍 符 磊 熊黎強 袁仁斌 卓 暉

CT聯(lián)合尿液中Her2和uPA對輸尿管癌的診斷研究

四川省成都市第三人民醫(yī)院泌尿外科 (四川 成都 600031)

潘玉龍 符 磊 熊黎強 袁仁斌 卓 暉

目的 觀察輸尿管癌患者（upper tract urothelial carcinoma, UTUC）的CT表現(xiàn)以及檢測患者尿液中腫瘤標志物Her2和uPA的表達情況，提高對輸尿管癌發(fā)病機理的了解和認識以及確診的準確率和特異度，為輸尿管癌早期診斷和治療提供一定的指導意義。方法 收集自2011年1月至今我院泌尿科經(jīng)手術術后病理確診的UTUC患者22例，良性輸尿管疾病(狹窄、炎癥等)20例，回顧性分析所有患者的CT診斷結(jié)果；應用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測相應22例UTUC患者、20例良性輸尿管疾病患者尿液中腫瘤標志物Her2和uPA的含量。結(jié)果 Her2和uPA在輸尿管癌患者尿液中的含量較良性輸尿管疾病患者有明顯升高。CT診斷UTUC的準確率為80%，特異度為70.8%；Her2和uPA的準確率分別為70%，特異度分別為69.7%。三者聯(lián)合診斷的準確率可以達到100%，特異度為95.3%。結(jié)論 CT結(jié)合Her2和uPA聯(lián)合檢測，可明顯增強對輸尿管癌患者的術前診斷準確率和特異度，對于病例的早期準確診斷，患者術前制定恰當?shù)氖中g方式等都有重要指導意義。

UTUCCT；Her2；uPA

人類表皮生長因子受體2(Her2)基因，定位于染色17q12-21.32上，編碼185KD的跨膜受體樣蛋白，具有酪氨酸激酶活性，屬于酪氨酸激酶Ⅰ型受體家族，參與細胞的分裂、生長、繁殖的調(diào)控，與細胞運動、細胞生存能力的增強及癌細胞轉(zhuǎn)移有關，目前在如結(jié)直腸癌、膀胱癌、卵巢癌中均有發(fā)現(xiàn)該基因的活躍表達[1,2]。uPA是一種相對分子質(zhì)量為55KD的多功能絲氨酸蛋白酶，其高表達與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移密切相關。目前在乳腺癌、肺癌、膀胱癌、腎癌、結(jié)腸癌、胃癌、腦腫瘤、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌及黑色素瘤中都有uPA的過度表達，是較為常見的癌基因[3,4]。

輸尿管癌在臨床上少見且缺乏特異性，早期診斷困難，容易被忽視，其臨床特征多表現(xiàn)為肉眼血尿、腰部疼痛和腎積水。目前常用的診斷方法有B超、CT、IVU、膀胱鏡與逆行插管造影以及輸尿管鏡檢查等，單獨某種手段的診斷的準確率較低，一般在85%左右，臨床上常采用2～3種手段聯(lián)合使用，能使準確率達到90%。本文采用傳統(tǒng)的CT監(jiān)測和腫瘤分子標志物聯(lián)合診斷，能夠使準確率達到100%，為輸尿管癌患者提供一種更為準確有效的診斷方式[5,6]。

1 材料和方法

1.1 檢測對象

1.1.1 收集自2011年1月至2015年6月間，本院泌尿科科收治并經(jīng)手術確診的UTUC患者22例，良性輸尿管疾病患者20例。其中UTUC患者中，男性患者12例，女性患者10例，患者年,29～74歲，平均年齡(49.6±13.2)歲。良性輸尿管疾病患者20例，其中男性13例，女性7例，年齡27～70歲，平均年齡(46.8±11.7)歲。

1.1.2 22例輸尿管癌患者和20例良性輸尿管疾病患者收集中段尿液，-80℃保存。

1.2 檢測方法

1.2.1 CT檢測：全部病例均采用東芝Asteion4作全輸尿管CT平掃加增強掃描，掃描前口服陰性對比劑，掃描參數(shù)為：管電壓120kv，管電流200mA，層厚及層距均為5mm，螺距為1，使用非離子型造影劑碘海醇100ml，通過相配套的高壓注射器經(jīng)肘靜脈以3.0～3.5ml/s注入。動脈期于注入對比劑后25s開始掃描，門脈期65s，延遲期5～8min，根據(jù)實際需要，部分病例進一步延遲，延遲時間不超過10min。對所得圖像進行細致的對比觀察，分析其強化方式及強化程度。

1.2.2 Her2和uPA檢測：22例輸尿管癌患者和20例良性輸尿管疾病患者收集中段尿液，-80℃保存，檢測時37℃溶解。采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)進行檢測：每組添加樣品100μL，并且設置8個標準品做相應的標準曲線，37℃孵育2小時；5次清洗后每組加100μL的酶標抗體37℃孵育1小時；5次清洗后添加底物顯色液37℃孵育30min；終止反應，在490nm波長下用酶標儀測吸光值；參考標準曲線計算得出Her2和uPA的絕對濃度。

患者做病理檢測時，全部標本經(jīng)Bouin's固定液固定24h以上，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片。HE染色，具體操作按標準HE染色步驟進行。

1.3 統(tǒng)計學處理實驗所有數(shù)據(jù)均采用SSPS17.0和Graphpad prism 5軟件進行統(tǒng)計學處理。以均數(shù)±標準差表示的計量數(shù)據(jù)，采用t檢驗分析，變量間的相關性分析采用直線回歸相關分析，以P＜0.05的差異為具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 CT掃描結(jié)果和病例結(jié)果

2.1.1 22例輸尿管癌患者CT 尿路造影結(jié)果，癌位處于輸尿管上段者4 例、中段者8 例、下段者14 例。輸尿管癌患者CT結(jié)果(見圖1-2)，病理結(jié)果(見圖3-4)。

2.1.2 依據(jù)CT掃描結(jié)果對進行初級病情診斷，并以術后病理檢測結(jié)果為標準，對比數(shù)值見表1。其中陽性是指診斷為惡性腫瘤，陰性是指針對為未發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤，見表1。

2.2 Her2和uPA在尿液中ELISA測定結(jié)果

2.2.1 標準曲線繪制：應用Graphpad prism 5軟件，以標準品濃度為橫坐標，OD490值為縱坐標繪制標準曲線(見圖5、6)。根據(jù)待測樣品的OD490值計算出相應的濃度，即為血清標本中Her2和uPA的實際濃度(ng/mL)，見表2。

2.2.2 Her2和uPA在輸尿管癌和良性輸尿管疾病患者尿液中的含量(見表3)，統(tǒng)計學分析結(jié)果(見圖7)。

3 討 論

輸尿管癌在臨床上少見且缺乏特異性，早期診斷困難，容易被忽視，肉眼血尿、腰部疼痛和腎積水是原發(fā)性輸尿管癌的三大臨床表現(xiàn)，但也不是患者的特有癥狀，且往往不同時發(fā)生[5]。目前診斷的手段主要有B超、CT、IVU、膀胱鏡與逆行插管造影以及輸尿管鏡檢查等方法，診斷率職能達到80%左右。B超檢查經(jīng)濟快捷，是一種比較理想的篩選檢查手段，能夠明確患者是否存在尿路積水；CT增強以其快速的容積掃描及三維重建技術，能夠多方位、直觀的、立體的顯示輸尿管癌，提高了診斷的準確性[7,8]，尤其在IVU和逆行造影后，進行針對性的掃描，可以很好的顯示軟組織內(nèi)腫塊以及腫瘤向鄰近組織器官的浸潤程度并可觀測其與周圍組織臟器的關系，對腫瘤進行準確的術前分期以及手術方式的選擇具有重要的臨床意義，通過CT檢查進行腫瘤分期準確率達一般在84%左右[9]。當前最常用的診斷手段為通過B超、CT和尿路造影聯(lián)合使用，可以有效的提高梗阻的定位率和腫瘤的檢出率，但仍然難以做到百分之百的準確[6]。

表1 CT和病理UTUC的診斷結(jié)果分析（例）

表2 標準曲線參數(shù)

隨著分子生物學技術的發(fā)展，腫瘤治療也進入了分子與基因水平，越來越多與腫瘤相關的分子表達的改變被相繼發(fā)現(xiàn)，特別是近幾年來腫瘤生物分子標志物在腫瘤的診斷和聯(lián)合診斷方面的作用越來越顯著，其中多個分子的聯(lián)合診斷或者分子標志物和其他診斷手段的的聯(lián)合使用的潛在價值已經(jīng)越來明顯，這些分子標志物的檢測和應用將會為腫瘤的個性化治療提供更為廣闊的前景。

Her2和uPA均為典型的腫瘤生物分子標志物，Her2主要參與細胞的分裂、生長、繁殖的調(diào)控，與細胞運動、細胞生存能力的增強及癌細胞轉(zhuǎn)移等[1,10]；uPA主要與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關[3]。目前在乳腺癌、肺癌、膀胱癌、腎癌、結(jié)腸癌、胃癌、腦腫瘤、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌及黑色素瘤等多種腫瘤中均發(fā)現(xiàn)Her2和uPA的國度表達[10]，是較為常見的的腫瘤分子標志物。

普通CT診斷UTUC的準確率為一般在80%左右，特異度大約為70.8%，腫瘤分子標志物Her2和uPA的準確率一般在70%左右，特異度大約為69.7%。單獨的CT診斷或者腫瘤生物分子標志物診斷均有明顯的局限性，存在著較大的誤診率，本研究采用傳統(tǒng)的CT診斷和新型的腫瘤分子標志物聯(lián)合診斷的方法，能夠使輸尿管癌的診斷準確率達到100%，特異度提升為95.3%。事實證明通過經(jīng)典的腫瘤生物分子標志物Her2和uPA聯(lián)合CT檢測為輸尿管癌的早期診斷提供了一種準確性好、特異性高的診斷手段。

表3 血清中Her2和uPA的含量

[1]陳娟,李東石,余英豪,et al. Her-2蛋白在胃癌中的表達及其臨床意義[J].世界華人消化雜志,2010;(18):1375-9.

[2]Dong IP, Yun JW, Park JH, et al. HER-2/neu amplification is an independent prognostic factor in gastric cancer[J]. Dig Dis Sci,2006;(51):1371-9.

[3]王麗石,朱運松.uPA基因表達調(diào)控研究進展[J].醫(yī)學分子生物學雜志,2004;(1):235-8.

[4]Sliva D, English D, Lyons D, et al. Protein Kinase C Induces Motility of Breast Cancers by Upregulating Secretion of Urokinase-Type Plasminogen Activator through Activation of AP-1 and NF-κB[J]. Biochem Biophys Res Commun,2002;(290):552-7.

[5]貢冰峰,YAN, Chunyin, et al.原發(fā)性輸尿管癌的診斷與治療(附36例報告)[J].臨床泌尿外科雜志,2008;(23):173-4.

[6]肖煒,羅志剛.原發(fā)性輸尿管癌診斷治療方法的研究進展[J].臨床泌尿外科雜志,2011;(26):715-7.

[7]張斌,王東林.雙源CTA及尿路成像對于輸尿管癌診斷的臨床應用價值[J]中國CT和MRI雜志,2012;10(6): 82-84.

[8]王建良,朱玉春,高遷等.64層螺旋CT尿路成像技術在泌尿系統(tǒng)疾病中的臨床應用[J]中國CT和MRI雜志2012; 10(2) : 93-95.

[9]Strohmeyer G, Chearanai O, Goebell H. Die Bedeutung der Xanthinoxydase für den Eisenstoffwechsel[J]. Z e i t s c h r i f t F ü r D i e G e s a m t e E x p e r i m e n t e l l e M e d i z i n n s c h l i e 0 8 l i c h E x p e r i m e n t e l l e Chirurgie,1971;(155):74-86.

[10]Tanner M, Hollmen MJunttila TT, Kapanen AI, et al. Amplification of HER-2 in gastric carcinoma: association with Topoisomerase IIalpha gene amplification, intestinal type, poor prognosis and sensitivity to trastuzumab[J]. Ann Oncol,2005;(16):273-8.

(本文編輯: 張嘉瑜)

CT Combined with Her2 and uPA in Urine to Diagnose Upper Tract Urothelial Carcinoma

PAN Yu-long, FU Lei, XIONG Li-qiang et al. Department of Urinary Surgery, the Third People's Hospital of Chongqing Medical University Second Clinical Medical College of Chengdu, Chengdu 600031, China

Objective To detect the tumor markers expression of Her2 and uPA of urine in patients of Ureteral carcinoma (upper tract urothelial carcinoma, UTUC) and study the CT images of UTUC, to improve the understanding of ureteral carcinoma pathogenesis and cognition as well as the diagnosis accuracy and specific degrees, providing certain guiding significance with early diagnosis and treatment for ureteral carcinoma.Methods From January 2011 to now, 22 patients with UTUC (diagnosed by pathological examination)and 20 patients with Benign ureteral diseases were studied, retrospective analysis was applied for all the data including the resultsof CT and Her2 and uPA. Comprehensive assessments were used to study the diagnose effect of united use of CT and Her2 and uPA. Using enzyme-linked immunosorbent experiment (ELISA) test, to test 22 cases of UTUC and 20 cases of Benign ureteral diseases of Her2 and uPA content in the urine.Results Her2 and uPA content in the urine of patients with ureteral carcinoma patients with benign ureteral diseases have increased significantly. The diagnosis accuracy of CT for UTUC is 84.6%, which specificity is 70.8%; The diagnosis accuracy of Her2 and uPA is 70%, which specificity is 69.7%; The combined diagnosis accuracy is 100%, specificity is 95.3%.Conclusion CT combined with Her2 and uPA to diagnosis, can improve the diagnosis accuracy and specificity of UTUC, for early and accurate diagnosis, preoperative formulation of proper operation method, has important guiding significance.

UTUCCT; Her2; uPA

R445.3；R737.13

A

10.3969/j.issn.1672-5131.2015.12.025

卓 暉

2015-11-10