硬頭鱒卵黃囊仔魚發(fā)育的觀察研究

王振富等

硬頭鱒（steelhead，salmon gairdneri）拉丁名為Oncorhynchus mykiss，屬鮭形目（Salmoniformes）、鮭科（Salmonidae）、太平洋鮭屬（Oncorhynchus），原產(chǎn)于美國阿拉斯加的kuskokwin河和加拿大不列顛哥倫比亞省的和平河等水域，屬于冷水性魚類。硬頭蹲和虹鱒同為一種，虹鱒為路封型，硬頭鱒為洄游型（廣鹽性），經(jīng)過選育、馴化，改變了洄游習性，可終生生活于淡水中。國內(nèi)最早是北京康鑫水產(chǎn)公司于1998年從美國引進全雌發(fā)眼卵，開始養(yǎng)殖硬頭鱒。硬頭鱒的肉色和肉質(zhì)優(yōu)于虹鱒，在飼料利用率、抗病力等生產(chǎn)性能方面也明顯強于虹鱒，生長速度比虹鱒快10%～20%，尤其體重大于250 g以后，生長優(yōu)勢更為明顯。硬頭鱒最佳生長水溫為10～18 ℃，低于8 ℃或高于22 ℃都會影響其攝食及生長，與虹鱒相同。硬頭鱒引進、養(yǎng)殖時間不長，種質(zhì)還未發(fā)現(xiàn)明顯退化，養(yǎng)殖效果較好，受到養(yǎng)殖戶的青睞，是冷水魚主要養(yǎng)殖品種——虹鱒的替代品種，為處于困境的虹鱒魚養(yǎng)殖業(yè)帶來了希望，推廣前景廣闊。

由于硬頭鱒眾多優(yōu)勢，許多科研單位對其進行科學研究，特別是對于胚后從初孵仔魚到上浮仔魚并未見報道，該階段被稱為仔魚早期，其形態(tài)建成與分化較快。早期仔魚對環(huán)境的適應能力還很弱，對環(huán)境的變化非常敏感，該養(yǎng)殖階段對硬頭鱒的成活率有著至關(guān)重要的作用。因此，我們對仔魚早期發(fā)育進行了觀察，以了解其早期發(fā)育過程中形態(tài)發(fā)育特點，明確各器官形成的關(guān)鍵期，分析其器官形成與早期環(huán)境相適應的特點，用于指導生產(chǎn)。

1材料與方法

1.1材料

硬頭鱒受精卵為豐寧天河龍養(yǎng)殖有限公司2013年12月25日人工受精卵，放在塑料桶內(nèi)，水溫5～6 ℃，經(jīng)過370 ℃·d，74 d孵化，2014年3月9日開始破膜。

1.2飼養(yǎng)條件。

出膜后的仔魚飼養(yǎng)在直徑為2 m的圓形孵化缸內(nèi)，水源為地下水，水溫6.2 ℃，采用微流水，水量為每min 8～10 L，每天用電子比色檢測儀檢測水質(zhì)，溶氧大于6 mg/L，pH 7.2。魚卵開始出現(xiàn)破膜仔魚時，應加強檢查，及時清除卵皮和死魚，注意飼育環(huán)境的清潔衛(wèi)生，經(jīng)常刷洗槽孔，保持水流暢通。

1.3方法

仔魚出膜當天記為 0日齡，從 0日齡開始每天隨機抽取 30尾魚作為觀察材料，用電子數(shù)顯卡尺測量卵黃囊仔魚全長及卵黃囊大小，用SZ760連續(xù)變倍體視顯微鏡觀察、進行拍照記錄，見表1。

2結(jié)果

2.1形態(tài)觀察

硬頭鱒早期仔魚為剛破膜到上浮仔魚期間，此階段仔魚靠卵黃囊生長，為內(nèi)源性營養(yǎng)期；從破膜到上浮經(jīng)過38 d，開口攝食，進入晚期仔魚階段。

表1卵黃囊仔魚發(fā)育期外形變化

72.40%2.1.1初孵仔魚剛破膜的仔魚全長16.06 mm，卵黃囊長徑6.77 mm，短徑5.26 mm。全身透明，卵黃囊呈橢圓形；身體為弧形，頭部較小并向腹面彎曲，鰓裂形成，卵黃囊血管清晰，脊柱也呈弧形彎曲，并在尾部稍向背面彎曲；心臟為管狀，在卵黃囊腹面靠前的部位。仔魚眼球黑色，肛門位于魚體后1/3處，直腸管狀，仔魚健壯，匍匐于水底，受刺激游動。鰭膜發(fā)達，背鰭、臀鰭、尾鰭鰭膜連成一片，背鰭膜起始于頭后部，臀鰭膜起始于卵黃囊后。尾部鰭褶寬大，呈扇形，為剛出膜仔魚主要的運動器官（圖1a）。

2.1.21～3日齡全長16.58 mm，卵黃囊長徑6.41 mm、短徑5.05 mm。頭部及背部黑色素密集，色素細胞為點狀、星芒狀，仔魚的身體逐漸伸直，頭部增大并隆起，整個眼睛呈黑色。鰓比較明顯，開始分化，卵黃囊上有一粗血管，周圍密布發(fā)達的毛細血管網(wǎng)，出現(xiàn)口裂。仔魚匍匐于水底，少游動（圖1b）。

2.1.36日齡全長18.23 mm，卵黃囊長徑619 mm、短徑4.66 mm。仔魚視網(wǎng)膜著色，眼球色素增多，出現(xiàn)鼻囊，鰭褶出現(xiàn)，形成鰭條但不明顯，心跳比較明顯，達到74次/min。卵黃囊逐漸被吸收，油球因為被吸收而變小。卵黃囊上色素沉積較多，仔魚尾部也開始沉積色素。尾鰭鰭膜中密布毛細血管網(wǎng)；腹鰭原基開始出現(xiàn)（圖1c）。

2.1.410日齡全長19.36 mm，卵黃囊長徑6.01 mm、短徑4.60 mm。眼晶體明顯，眼部增厚，鰓絲露出鰓蓋，并可見鰓中有淡紅色的血液流動，說明鰓開始具有呼吸能力，卵黃囊腹部凹陷。頭部、第一背鰭、第二背鰭間鰭膜消失，第一背鰭獨立出來；體腔黃色，空腔，體腔上方可見黑色組織器官；仔魚體色變深，頭部色素點密集，色素點背部較密，鰭褶比較明顯，鰭條清晰，開始充血（圖1d）。

2.1.515日齡全長20.27 mm，卵黃囊長徑5.89 mm、短徑4.21 mm。仔魚口開啟，心臟彎曲，心跳次數(shù)達到80次/min，血流清晰可見，心臟和主動脈中充滿淡紅色血液。第一背鰭基部出現(xiàn)雪花狀黑色素點擴散，背鰭與尾鰭之間的鰭褶逐漸退化，兩者之間的界限逐漸明顯；各鰭條上均有黑色素點和黃色素點，仔魚頭部逐漸變寬，頭蓋骨隆起。（圖1e）

2.1.620日齡全長21.58 mm，卵黃囊長徑5.49 mm、短徑3.84 mm。兩個鼻孔比較明顯，下頜可動，吻端比較明顯，體色素加深，黑色素點密布全身，背部、腹部均有；肝臟出現(xiàn)，卵黃囊后方十二指腸部分明顯變小，并可見其內(nèi)金黃色的油滴；魚體斑點由黑色素聚集而成，腹部卵黃囊已經(jīng)接近消失。腹鰭出現(xiàn)鰭條，全身除腹鰭膜未消失外，其余鰭膜都已消失。仔魚從腹部貼于水底，不再側(cè)臥，背鰭、尾鰭、腹鰭分化明顯，游泳能力增強（圖1f）。

2.1.726日齡全長22.15 mm，卵黃囊長徑5.19 mm、短徑3.37 mm，卵黃囊明顯縮小。魚體全身呈黑色，仔魚能平衡游泳，魚鰾已形成。出現(xiàn)支鰭軟骨，胸鰭向后伸展，色素點在尾鰭上、下端邊緣最多，聚集成片 （圖1g） 。

2.1.832日齡全長23.24 mm，卵黃囊長徑4.75 mm、短徑2.81 mm。整個眼睛的視網(wǎng)膜部分呈金色，卵黃囊吸收完畢，腸內(nèi)仍有黃色油滴，胎糞也開始排出，身體開始變粗，此時仔魚為內(nèi)外混合營養(yǎng)期，仔魚能平衡游泳。身體側(cè)面出現(xiàn)大小不一的斑點，側(cè)線附近斑點較大，靠近背部斑點較小。第一背鰭前端黑色，鰭條上有黑色素（圖1h）。

2.1.938日齡全長24.62 mm，卵黃囊長徑4.55 mm、短徑2.16 mm。身體色素增強，鰓蓋形成，腸管貫通，鰾充氣，運動能力增強，可作長時間游泳，不再停留水底。第一背鰭上黑色素點逐漸變多，紅色素逐漸減少，魚體腹部鱗片覆蓋基本完成。身體變粗，嘴前凸，頭變窄，外形逐漸接近成魚（圖1i）。圖1硬頭鱒卵到仔魚的各期發(fā)育形態(tài)3分析與討論

3.1溫度對卵黃囊仔魚發(fā)育的影響

硬頭鱒早期仔魚是指破膜至上浮這一階段的仔魚，此時仔魚靠卵黃囊提供營養(yǎng)，為內(nèi)源性營養(yǎng)期，因此又稱為卵黃囊仔魚，早期仔魚主要進行感覺、攝食、呼吸和游泳等器官分化。初孵仔魚卵黃囊較大，是仔魚發(fā)育所需能量的主要來源，此時的仔魚沒有攝食能力，不能獲得外源性營養(yǎng)，隨著仔魚的發(fā)育卵黃囊逐漸被吸收變小，卵黃營養(yǎng)對于仔魚的發(fā)育和生存具有非常重要的意義。仔魚上浮后開口攝食，主要器官發(fā)育和形態(tài)變異完成，即進入晚期仔魚階段，此時為混合營養(yǎng)期，卵黃囊吸收完畢后即進入外源性營養(yǎng)期。

本研究證明，水溫6.11 ℃時從破膜到上浮仔魚需經(jīng)過35 d，水溫10～11 ℃時只需12 d。承德試驗基地水溫較低，硬頭鱒早期仔魚發(fā)育時間長，卵黃囊吸收慢，器官發(fā)育慢，兩三天內(nèi)變化不明顯。在苗種培育生產(chǎn)中，應根據(jù)以上規(guī)律，在早期仔魚階段盡量為其創(chuàng)造良好的發(fā)育條件，使其各功能器官均衡發(fā)育，保證其順利開口。

3.2硬頭鱒早期仔魚卵黃囊吸收特點

硬頭鱒早期仔魚發(fā)育時卵黃囊變化具以下特點：

短徑縮減遠遠大于長徑，比長徑快近一倍（圖2）；體積縮減最快，到上浮時只剩初孵仔魚的1233%，面積縮減次之，剩原來的27.60%（圖3圖2硬頭鱒早期仔魚卵黃囊大小的變化

圖3硬頭鱒早期仔魚卵黃囊體積、面積變化硬頭鱒仔魚個體相對較大，生長迅速，到上浮開口時全長已經(jīng)近25 mm，因此適應環(huán)境的能力較強，苗種培育成活率較高。尤其在承德基地環(huán)境溫度較低的情況下，挑選個體相對較大的魚作為親魚，所產(chǎn)卵卵徑也會較大，初孵仔魚生長迅速，適應環(huán)境的能力較強，對降低苗種開口餌料人工馴化難度，提高苗種成活率具有重要意義。

4小結(jié)

通過對硬頭鱒卵黃囊仔魚發(fā)育觀察，仔魚早期形態(tài)建成與分化較快，卵黃囊仔魚的感覺、攝食、呼吸、游泳等器官快速分化，但其對環(huán)境的適應能力還很弱，對環(huán)境變化非常敏感，因此，對仔魚早期發(fā)育進行觀察，了解其發(fā)育過程中形態(tài)發(fā)育特點，明確各器官形成的關(guān)鍵期，對于指導生產(chǎn)，提高苗種早期發(fā)育成活率具有重要意義。