• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    水稻二半乳糖甘油酯合成酶DGD 響應(yīng)熱脅迫的 生物信息學(xué)和基因表達(dá)分析

    2015-07-15 03:36:28彭澎劉蘭蘭汪啟明饒力群
    關(guān)鍵詞:甘油酯進(jìn)化樹半乳糖

    彭澎,劉蘭蘭,汪啟明,饒力群

    (湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖南 長沙 410128)

    隨著全球氣溫的上升,熱逆境對植物的影響日趨顯著[1–2]。水稻在孕穗期和抽穗期對溫度極為敏感[3]。水稻劍葉的膜透性與溫度相關(guān),它影響細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,從而影響水稻生長[4]。植物類囊體膜的通透性與植物耐熱存在密切聯(lián)系,類囊體二半乳糖甘油酯合成酶(DGD)基因?qū)δねㄍ感云鹫{(diào)控作用。在擬南芥和其他一些高等植物中,DGD 基因通過調(diào)控類囊體單半乳糖甘油酯和雙半乳糖甘油酯的比例調(diào)控擬南芥耐熱能力,從生理水平提高植物的耐熱性[5]。關(guān)于DGD 基因功能研究的研究對象多集中于擬南芥[6–8],而對于其在水稻中表達(dá)的研究較少。利用基因芯片分析植物逆境脅迫下的表達(dá)情況,可以發(fā)掘與脅迫響應(yīng)相關(guān)的基因,探究逆境脅迫下的分子機制,為植物抗逆提供理論基礎(chǔ)[9]。筆者通過多種水稻生物信息學(xué)網(wǎng)站,分析水稻DGD基因的基因序列及其響應(yīng)熱和干旱脅迫的表達(dá)特征;利用實時定量PCR 技術(shù),分析OsDGD 在不同時間熱脅迫日本晴、9311 和N22 中的表達(dá)水平,旨在進(jìn)一步明確OsDGD 參與水稻耐熱信號傳導(dǎo)的機理。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    供試材料為日本晴(Oryza sativa L. spp. japonica cv. Nipponbare)、9311(Oryza sativa L. spp. indica cv. 9311)、N22(Oryza sativa L. spp. Aus cv. Nagina 22)水稻品種。

    1.2 方法

    1.2.1 水稻DGD 基因的生物信息學(xué)分析

    水稻DGD 基因的結(jié)構(gòu)特征和上游調(diào)控元件分別由Rice–map(http://www.ricemap.org/ index.jsp)和PlantCARE(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtool s/plantcare/html/)進(jìn)行分析;分別進(jìn)行蛋白同源性及相互作用分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建。利用STRING(http://www.string–db.org/)分析蛋白同源性及其相互作用;運用MEGA 5.0 軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹;利用ROAD(http://ricearray.org/index.shtml)進(jìn)行水稻DGD 基因的生物芯片分析,其中干旱脅迫處理水稻分蘗期葉片的相對含水量為65% ~75%,熱脅迫處理材料為生長14 d 的水稻幼苗,于42℃培養(yǎng)3 h。

    1.2.2 水稻DGD 基因表達(dá)的實時熒光定量分析

    取幼穗分化至6 ~7 期的水稻材料,置于光照16 h、相對濕度80%、42℃的恒溫培養(yǎng)室,分別取處理0、3、6、12 h 的水稻劍葉進(jìn)行液氮速凍,于-80℃保存,以處理0 h 的植株為對照。利用Trizol法分別提取以上材料的總RNA,反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,均一化濃度后作為反應(yīng)模板。根據(jù)OsDGD 的cDNA序列設(shè)計特異引物,以水稻ACTIN 作為內(nèi)參基因(表1),進(jìn)行實時熒光定量PCR 擴(kuò)增,反應(yīng)步驟參照熒光定量PCR 試劑盒(康為世紀(jì)公司)。試驗進(jìn)行3次重復(fù)。相對表達(dá)水平用2–ΔΔCt法[10]計算。

    表1 實時熒光定量PCR引物 Table 1 Primers for RT–qPCR

    2 結(jié)果與分析

    2.1 水稻DGD 基因的生物信息學(xué)分析結(jié)果

    2.1.1 水稻DGD 基因的序列分析結(jié)果

    比對擬南芥DGD 序列,發(fā)現(xiàn)水稻DGD2 基因(LOC_Os11g05990)位于11 號染色體,長度為4 773 bp,其蛋白質(zhì)含737個氨基酸殘基。進(jìn)一步在水稻基因組中比對水稻DGD2 基因,發(fā)現(xiàn)水稻中還存在另外4個與OsDGD2(LOC_Os11g05990)同源性較高的基因 OsDGD1(LOC_Os03g11560.1)、OsDGD3 (LOC_Os02g33580.1)、OsDGD4(LOC_Os 03g16140.1)和OsDGD5(LOC_Os04g34000.1),它們都具有二半乳糖甘油脂合成酶功能。分析OsDGD 啟動子順式作用元件,發(fā)現(xiàn)5個基因均具有光應(yīng)答順式作用元件G–box,且OsDGD3 和OsDGD4 具有熱脅迫應(yīng)答順式作用元件HSE,OsDGD2、OsDGD3、OsDGD4和OsDGD5都具有脫落酸應(yīng)答順式作用元件ABRE。

    2.1.2 水稻DGD 的同源比對與進(jìn)化分析

    通過STRING 對5個OsDGD 的蛋白序列進(jìn)行同源比對,并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(圖1)。由圖1 可知,DGD 存在于多個物種中,在高粱、短柄草、擬南芥、葡萄和毛果楊的相似度較高,表明DGD 基因在多種物種中保守存在。

    圖1 OsDGD同源蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹 Fig.1 Phylogenetic tree of OsDGDgenes and their homologous proteins

    2.1.3 水稻DGD 基因的生物芯片分析

    水稻對干旱的響應(yīng)能力分析結(jié)果表明,在葉、根、穗等部位,OsDGD2、OsDGD3、OsDGD4 和OsDGD5 基因在干旱脅迫處理后的表達(dá)水平比正常生長的均高,而OsDGD1 的表達(dá)水平比正常生長的低(圖2–A)。通過對水稻熱脅迫響應(yīng)能力進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)5個OsDGD 基因的表達(dá)水平均比正常生長的低(圖2–B)。通過對OsDGD 在不同水稻品種中的表達(dá)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)在日本晴和9311 中,OsDGD1、OsDGD2 和OsDGD5 基因的表達(dá)量均不高,而OsDGD3 和OsDGD4 的表達(dá)量較高(圖3–A)。在N22中,OsDGD2、OsDGD3 和OsDGD4 的表達(dá)量較高,而OsDGD1 和OsDGD5 的表達(dá)量較低(圖3–B)。

    圖2 OsDGD基因在干旱和熱脅迫下的芯片表達(dá)分析結(jié)果 Fig.2 Chip expression analysis of OsDGDgenes in drought and thermal stresses

    圖3 OsDGD基因在不同材料中的芯片表達(dá)分析結(jié)果 Fig.3 Chip expression analysis for OsDGDgenes at different materials

    2.2 水稻DGD 基因響應(yīng)熱脅迫的表達(dá)分析

    利用實時定量PCR 方法研究OsDGD 在熱脅迫時的表達(dá)水平,結(jié)果表明,不同水稻品種中,OsDGD響應(yīng)熱脅迫的表達(dá)呈現(xiàn)較大的差異。在熱脅迫時,OsDGD1 在日本晴及9311 中的表達(dá)量下降,在N22中的表達(dá)量升高。OsDGD1 在9311 中的表達(dá)量隨著熱處理時間的增加而逐漸降低;在日本晴及N22中,隨著熱處理時間的增加,其表達(dá)量也逐漸增加(圖4)。OsDGD2 在日本晴中的表達(dá)為先下降后升高,隨著熱處理時間的增加,其表達(dá)量逐漸升高;在9311 中,OsDGD2 的表達(dá)量下降,且3 h 處理后的表達(dá)量基本不變;在N22 中,OsDGD2 在高溫脅迫下被顯著誘導(dǎo),其表達(dá)量明顯提高(圖 5)。OsDGD3 基因在日本晴及9311 中,其表達(dá)是先下降后升高,而在N22 中表達(dá)明顯提高,且隨著高溫脅迫時間的增加,其表達(dá)量均逐漸增加(圖6)。OsDGD4 與OsDGD3 呈現(xiàn)出類似的表達(dá)情況,但其總體表達(dá)量均比OsDGD3 的高(圖7)。隨著高溫脅迫時間的增加,OsDGD5 在日本晴中的表達(dá)量逐漸增加;隨著熱處理時間增加,OsDGD5 在9311 及N22 中的表達(dá)量有所下降(圖8)。上述研究結(jié)果表明,隨高溫處理時間的增加,在耐熱水稻中,OsDGD1、OsDGD2、OsDGD3 和OsDGD4 的表達(dá)量增加,而在不耐熱水稻中的表達(dá)量減少,表明OsDGD1、OsDGD2、OsDGD3 和OsDGD4 參與了水稻的熱脅迫反應(yīng)。

    圖4 OsDGD1 在不同熱脅迫處理水稻中的相對表達(dá)量 Fig.4 Expression analysis for OsDGD1 at different thermal stresses and different rice varieties

    圖5 OsDGD2 在不同熱脅迫處理水稻中的相對表達(dá)量 Fig.5 Expression analysis for OsDGD2 at different thermal stresses and different rice varieties

    圖6 OsDGD3 在不同熱脅迫處理水稻中的相對表達(dá)量 Fig.6 Expression analysis for OsDGD3 at different thermal stresses and different rice varieties

    圖7 OsDGD4 在不同熱脅迫處理水稻中的相對表達(dá)量 Fig.7 Expression analysis for OsDGD4 at different thermal stresses and different rice varieties

    圖8 OsDGD5 在不同熱脅迫處理水稻中的相對表達(dá)量 Fig.8 Expression analysis for OsDGD5 at different thermal stresses and different rice varieties

    3 結(jié)論與討論

    擬南芥DGD1 突變體的DGDG 含量較野生型的低,導(dǎo)致該突變體的光合系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能以及對熱脅迫的響應(yīng)等方面均發(fā)生了一定變化[11–12]。本研究中通過生物信息學(xué)網(wǎng)站STRING,分析了可能與OsDGD 蛋白相互作用的蛋白,發(fā)現(xiàn)粳稻中參與合成光合膜主要結(jié)構(gòu)成分的單半乳糖甘油酯合成酶與OsDGD 的相互作用最強,表明DGD 與葉綠體中類囊體膜的透性相關(guān)。對OsDGD 啟動子順式作用元件的分析結(jié)果表明,5個基因分別具有與光應(yīng)答和非生物脅迫相關(guān)的作用元件。熱脅迫應(yīng)答順式作用元件HSE,OsDGD2、OsDGD3、OsDGD4 和OsDGD5 具有脫落酸應(yīng)答順式作用元件ABRE。由此推測,OsDGD 可能參與調(diào)控光合系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和響應(yīng)耐熱等非生物脅迫的信號傳導(dǎo)。

    水稻耐熱品種N22 受熱脅迫時表現(xiàn)出相對較好的花藥開裂水平和較高的結(jié)實率,體現(xiàn)了其本質(zhì)的耐熱性[13]。Li 等[14]和Deepti 等[15]發(fā)現(xiàn)水稻N22品種響應(yīng)干旱脅迫與熱脅迫的信號途徑中存在多個調(diào)控元件。本研究中通過干旱脅迫和熱脅迫的水稻芯片分析,發(fā)現(xiàn)OsDGD 表達(dá)受耐熱和干旱脅迫調(diào)控,且在N22 中多個OsDGD 對干旱脅迫更敏感。通過實時定量PCR 分析,發(fā)現(xiàn)在分化至6 ~7 期的水稻幼穗劍葉中,5個OsDGD 同源基因在日本晴、9311 和耐熱品種N22 中的表達(dá)有差異,OsDGD3和OsDGD4 的表達(dá)量均高,OsDGD1 和OsDGD5的表達(dá)量均低,而OsDGD2 在日本晴及9311 中的表達(dá)量較低,在N22 中的表達(dá)量高。隨高溫處理時間的增加,在日本晴中,5個OsDGD 基因的表達(dá)量無明顯變化;在9311 中,5個OsDGD 基因的表達(dá)量均下降,而在耐熱水稻品種N22中,除OsDGD5外,其余4個基因的表達(dá)量較其他2 種水稻材料的高, OsDGD1、OsDGD2 和OsDGD3 在N22 中的表達(dá)明顯受到熱脅迫的誘導(dǎo)。試驗結(jié)果與生物芯片分析結(jié)果基本相吻合,進(jìn)一步表明OsDGD 參與了對水稻耐熱性的調(diào)控。

    綜合分析,認(rèn)為OsDGD 與水稻耐熱具有相關(guān)性,是一個潛在的水稻耐熱調(diào)控元件。水稻的耐熱表型與多種環(huán)境因子密切相關(guān),植物響應(yīng)光、溫信號基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的分子遺傳機制至今仍不清楚,因此,挖掘新的水稻耐熱分子傳導(dǎo)途徑對全面認(rèn)識植物耐熱分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)具有重要意義。

    [1] Peng S,Huang J,Sheehy J E,et al.Rice yields decline with higher night temperature fromglobal warming[J]. Proc Natl Acad Sci,2004,101:9971–9975.

    [2] Grover A,Chandramouli A,Agarwal S,et al.Transgenic Rice for Tolerance Against Abiotic Stresses[M].Rice Improvement in the Genomic Era.New York:Datta S K,2009:237–267.

    [3] Satake T,Yoshida S.High temperature induced sterility in indica rices at flowering[J].Jpn J Crop Sci,1978,47:6–17.

    [4] 鄧化冰,史建成,肖應(yīng)輝,等.開花期低溫脅迫對水稻劍葉保護(hù)酶活性和膜透性的影響[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2011,37(5):581–585.

    [5] Chen J,Burke J J,Xin Z,et al.Characterization of the Arabidopsis thermosensitive mutant atts02 reveals an important role forgalactolipids in thermotolerance[J]. Plant Cell Environ,2006,29(7):1437–1448.

    [6] D?rmann P,Hoffmann-Benning S,BalboⅠ,et al. Isolation and characterization of an Arabidopsis mutant deficient in the thylakoid lipid digalactosyl diacylglycerol [J].The Plant cell,1995,7(11):1801–1810.

    [7] Kelly A A,F(xiàn)roehlich J E,D?rmann P.Disruption of the two digalactosyldiacylglycerol synthasegenes DGD1 and DGD2 in Arabidopsis reveals the existence of an additional enzyme ofgalactolipidsynthesis[J].Plant Cell,2003,15(11):2694–2706.

    [8] Jagadish S V K,Craufurd P Q,Wheeler T R. Phenotyping parents of mapping populations of rice for heat tolerance during anthesis[J].Crop Sci,2008,48:1140–1146.

    [9] 雷東陽,曠浩源,陳立云.利用基因芯片研究植物非生物逆境響應(yīng)基因表達(dá)的進(jìn)展[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2012,38(2):156–161.

    [10] Livak K J,Schmittgen T D.Analysis of relativegene expres sion data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCTmethod[J].Methods,2001,25(4):402–408.

    [11] Klau Essemine J,Govindachary S,Ammar S,et al. Functional aspects of the photosynthetic light reactions in heat stressed Arabidopsis deficient in digalactosyldia- cylglycerol[J].Plant Physiol,2011,168(13):1526–1533.

    [12] Sashka Boychova Krumova,Sergey Petrovich Laptenok,Laszlo Kovacs Tunde Toth,et al.Digalactosyl– diacylglycerol-dificiency lowers the thermal stability of thylakoid membranes[J].Photosynthesis Res,2010,105(3):229–242.

    [13] 穰中文,周清明.耐熱水稻品種Nagina 22高溫脅迫下的生理響應(yīng)[J].植物遺傳資源學(xué)報,2012,13(6):1045–1049.

    [14] Li Xia,Lovely M F Lawas,Richard Malo,et al.Metabolic and transcriptomicsignatures of rice floral organs reveal sugar starvation as a factor in reproductive failure under heat and drought stress[J].Plant Cell Environ,2015,doi:10.1111/ pce.12545.

    [15] Deepti Nigam,Sanjeev Kumar,Mishra D C.Synergistic regulatory networks mediated by microRNAs and transcription factors under drought,heat and salt stresses in Oryza sativa spp.[J].Gene,2015,555(2):127–139.

    猜你喜歡
    甘油酯進(jìn)化樹半乳糖
    基于心理旋轉(zhuǎn)的小學(xué)生物進(jìn)化樹教學(xué)實驗報告
    常見的進(jìn)化樹錯誤概念及其辨析*
    澤蘭多糖對D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用
    中成藥(2018年8期)2018-08-29 01:28:24
    黃芩-黃連藥對防治D-半乳糖癡呆小鼠的作用機制
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:11
    艾草白粉病的病原菌鑒定
    乙烯-丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸縮水甘油酯三元共聚物增韌PBT的研究
    中國塑料(2016年2期)2016-06-15 20:30:00
    半乳糖凝集素-3與心力衰竭相關(guān)性
    半乳糖凝集素-3在心力衰竭中的研究進(jìn)展
    層次聚類在進(jìn)化樹構(gòu)建中的應(yīng)用
    液相色譜-質(zhì)譜法測定食用植物油中縮水甘油酯的含量
    一个人免费在线观看的高清视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产成人精品久久二区二区免费| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 看免费av毛片| 一本综合久久免费| 999久久久精品免费观看国产| 婷婷六月久久综合丁香| 中亚洲国语对白在线视频| av片东京热男人的天堂| 国产亚洲精品一区二区www| ponron亚洲| 香蕉av资源在线| 香蕉丝袜av| 日本 欧美在线| 日韩av在线大香蕉| 午夜福利免费观看在线| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲精品粉嫩美女一区| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲国产欧美网| 午夜视频精品福利| 亚洲精品美女久久av网站| 国产亚洲av嫩草精品影院| 色尼玛亚洲综合影院| 无限看片的www在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲五月婷婷丁香| 成人18禁在线播放| 一级黄色大片毛片| 丰满人妻一区二区三区视频av | 床上黄色一级片| 亚洲五月婷婷丁香| 国产精品九九99| 免费观看的影片在线观看| svipshipincom国产片| 免费看光身美女| av中文乱码字幕在线| 午夜福利免费观看在线| 国产69精品久久久久777片 | 久久中文字幕人妻熟女| 成年免费大片在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 日本a在线网址| 久久草成人影院| 黑人操中国人逼视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久中文字幕一级| 老司机福利观看| 成人永久免费在线观看视频| 免费看光身美女| 午夜亚洲福利在线播放| 俄罗斯特黄特色一大片| 我要搜黄色片| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| av天堂在线播放| 一区福利在线观看| 日韩欧美三级三区| 成在线人永久免费视频| a级毛片在线看网站| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 伊人久久大香线蕉亚洲五| 岛国视频午夜一区免费看| 高清毛片免费观看视频网站| 成人欧美大片| 国产男靠女视频免费网站| 精品久久久久久久毛片微露脸| 美女 人体艺术 gogo| 一级毛片高清免费大全| 国产三级在线视频| 日韩av在线大香蕉| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 三级国产精品欧美在线观看 | 中文字幕高清在线视频| 久久人人精品亚洲av| 国产精品女同一区二区软件 | 亚洲国产看品久久| 俺也久久电影网| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 日韩有码中文字幕| 中文字幕高清在线视频| 午夜影院日韩av| 黄频高清免费视频| 欧美极品一区二区三区四区| 精品福利观看| 国产精品一区二区三区四区久久| 后天国语完整版免费观看| 免费观看精品视频网站| 亚洲美女黄片视频| 夜夜爽天天搞| 亚洲人成网站高清观看| 男人舔奶头视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产高清videossex| av福利片在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久精品国产清高在天天线| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲在线观看片| 成人av一区二区三区在线看| 我要搜黄色片| 最新美女视频免费是黄的| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲,欧美精品.| 国产精华一区二区三区| 天堂av国产一区二区熟女人妻| netflix在线观看网站| 美女 人体艺术 gogo| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 少妇人妻一区二区三区视频| 丰满的人妻完整版| 亚洲av电影在线进入| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| av片东京热男人的天堂| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产又色又爽无遮挡免费看| 亚洲五月婷婷丁香| 国产亚洲精品一区二区www| www日本黄色视频网| 亚洲五月天丁香| 国产综合懂色| 免费看a级黄色片| 国产精品精品国产色婷婷| 久久久国产成人精品二区| 白带黄色成豆腐渣| 国产私拍福利视频在线观看| 在线观看日韩欧美| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美午夜高清在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 两人在一起打扑克的视频| 国产精品野战在线观看| 美女午夜性视频免费| 日本 欧美在线| 99热这里只有是精品50| 久久人人精品亚洲av| 欧美在线一区亚洲| 国产精品电影一区二区三区| 99re在线观看精品视频| 亚洲成人久久爱视频| 国产伦一二天堂av在线观看| avwww免费| 又大又爽又粗| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 久久久水蜜桃国产精品网| 在线看三级毛片| 国产亚洲精品一区二区www| 日本五十路高清| 波多野结衣高清作品| 美女 人体艺术 gogo| 在线观看一区二区三区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产成人av激情在线播放| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲七黄色美女视频| 中文在线观看免费www的网站| 999精品在线视频| 成在线人永久免费视频| 国产综合懂色| 久久久久久人人人人人| 床上黄色一级片| 国产亚洲欧美98| 黄色成人免费大全| 老汉色av国产亚洲站长工具| 日韩欧美在线二视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 最近视频中文字幕2019在线8| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲精品在线美女| 99国产综合亚洲精品| 国产视频内射| h日本视频在线播放| 九色成人免费人妻av| 国产精品亚洲av一区麻豆| 99视频精品全部免费 在线 | 久久久久免费精品人妻一区二区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲成av人片免费观看| 韩国av一区二区三区四区| 男女下面进入的视频免费午夜| 久久性视频一级片| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 草草在线视频免费看| 亚洲成av人片免费观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 两个人的视频大全免费| 国产精品女同一区二区软件 | 我的老师免费观看完整版| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久香蕉国产精品| 国产欧美日韩一区二区精品| 最新美女视频免费是黄的| 国产精品1区2区在线观看.| 日韩欧美国产一区二区入口| 99热只有精品国产| 国产精华一区二区三区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 免费看光身美女| 日韩欧美精品v在线| 淫秽高清视频在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 欧美国产日韩亚洲一区| 欧美乱色亚洲激情| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 日韩免费av在线播放| 岛国在线免费视频观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久天堂一区二区三区四区| 精品日产1卡2卡| av在线蜜桃| 性色av乱码一区二区三区2| 最新美女视频免费是黄的| 人人妻人人澡欧美一区二区| 久久久国产成人免费| 不卡av一区二区三区| 亚洲18禁久久av| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产一级毛片七仙女欲春2| 久久中文字幕人妻熟女| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久中文看片网| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲一区二区三区色噜噜| 18禁美女被吸乳视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 少妇人妻一区二区三区视频| 精品无人区乱码1区二区| 99视频精品全部免费 在线 | 在线观看66精品国产| 综合色av麻豆| 高清在线国产一区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲欧美日韩高清专用| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久久久久国产a免费观看| 午夜福利成人在线免费观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产亚洲av嫩草精品影院| 久久久久久久久久黄片| 国产免费av片在线观看野外av| 婷婷六月久久综合丁香| 嫩草影院入口| www.熟女人妻精品国产| av福利片在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲avbb在线观看| 脱女人内裤的视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 成在线人永久免费视频| 国产亚洲欧美98| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 欧美性猛交黑人性爽| 国产 一区 欧美 日韩| 少妇人妻一区二区三区视频| av女优亚洲男人天堂 | 久久精品综合一区二区三区| 国产激情久久老熟女| 神马国产精品三级电影在线观看| 久久久色成人| 黄色日韩在线| 亚洲国产精品成人综合色| 久久精品国产综合久久久| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲天堂国产精品一区在线| 久久这里只有精品中国| 精品久久久久久成人av| 亚洲国产精品999在线| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产一区二区三区视频了| 亚洲精华国产精华精| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产一区二区激情短视频| 制服人妻中文乱码| 1024香蕉在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 国产97色在线日韩免费| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲成av人片免费观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 嫩草影院入口| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲精品美女久久av网站| 91麻豆av在线| 成人三级黄色视频| 亚洲欧美激情综合另类| www.自偷自拍.com| 欧美日韩福利视频一区二区| 精品国产亚洲在线| 两性夫妻黄色片| 国语自产精品视频在线第100页| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产精品电影一区二区三区| 男女床上黄色一级片免费看| 天堂网av新在线| 国产欧美日韩一区二区三| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美3d第一页| 午夜影院日韩av| 美女 人体艺术 gogo| 午夜视频精品福利| 女警被强在线播放| 男人舔奶头视频| 亚洲人成电影免费在线| 欧美一区二区精品小视频在线| 禁无遮挡网站| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲五月天丁香| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久久国产精品麻豆| 国产av麻豆久久久久久久| 亚洲av美国av| 天堂网av新在线| 岛国视频午夜一区免费看| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲激情在线av| svipshipincom国产片| 日本 av在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 成人三级做爰电影| 国产黄片美女视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日韩成人在线观看一区二区三区| 我要搜黄色片| 日韩欧美在线二视频| 男人舔女人的私密视频| 日本免费a在线| 亚洲在线自拍视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 99热这里只有精品一区 | 亚洲自拍偷在线| 午夜福利在线观看吧| 国产1区2区3区精品| 一级a爱片免费观看的视频| 在线观看日韩欧美| 97碰自拍视频| 国产97色在线日韩免费| www日本黄色视频网| 精品日产1卡2卡| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 在线观看一区二区三区| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品av视频在线免费观看| 国产激情久久老熟女| 一区福利在线观看| 中文在线观看免费www的网站| 免费av毛片视频| 伦理电影免费视频| 亚洲18禁久久av| 中文字幕久久专区| 综合色av麻豆| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 搡老妇女老女人老熟妇| 网址你懂的国产日韩在线| 国产精品 国内视频| 国产黄片美女视频| 亚洲五月婷婷丁香| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲 国产 在线| 精品无人区乱码1区二区| 国产av在哪里看| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产精品,欧美在线| 中文字幕最新亚洲高清| 他把我摸到了高潮在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 日韩精品青青久久久久久| x7x7x7水蜜桃| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产精品一及| 一级毛片女人18水好多| 欧美一区二区国产精品久久精品| 欧美乱码精品一区二区三区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 在线观看66精品国产| 亚洲五月婷婷丁香| 男人舔女人的私密视频| 久久久国产成人精品二区| 国产一区二区在线观看日韩 | www.精华液| 五月伊人婷婷丁香| 精品欧美国产一区二区三| 九色国产91popny在线| 一级毛片精品| 最新中文字幕久久久久 | 给我免费播放毛片高清在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产私拍福利视频在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| av在线蜜桃| 99久久无色码亚洲精品果冻| 一级毛片精品| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美日韩一级在线毛片| av福利片在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 草草在线视频免费看| xxxwww97欧美| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 成年免费大片在线观看| 一a级毛片在线观看| 国产av一区在线观看免费| 亚洲精品色激情综合| 国内精品久久久久精免费| 亚洲av免费在线观看| 一级毛片精品| 一夜夜www| 免费av不卡在线播放| 18美女黄网站色大片免费观看| 欧美日韩精品网址| 成年人黄色毛片网站| 国产高清视频在线播放一区| 首页视频小说图片口味搜索| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 成人18禁在线播放| 亚洲精品美女久久av网站| netflix在线观看网站| 欧美成人性av电影在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久九九热精品免费| ponron亚洲| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲片人在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 久久中文看片网| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产一区二区激情短视频| 国产精品亚洲美女久久久| 母亲3免费完整高清在线观看| 久久国产精品影院| 国产真实乱freesex| 亚洲精品一区av在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 美女黄网站色视频| 中文字幕高清在线视频| 成人午夜高清在线视频| 日本黄色视频三级网站网址| 三级毛片av免费| 搡老岳熟女国产| 级片在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 日韩高清综合在线| 日韩人妻高清精品专区| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲精品色激情综合| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产精品久久久久久久电影 | 女警被强在线播放| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 伦理电影免费视频| 天堂√8在线中文| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产高清有码在线观看视频| 无限看片的www在线观看| av在线天堂中文字幕| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 成人无遮挡网站| h日本视频在线播放| 色播亚洲综合网| 欧美三级亚洲精品| 夜夜夜夜夜久久久久| 黄色女人牲交| 看片在线看免费视频| 日本免费a在线| 小说图片视频综合网站| 操出白浆在线播放| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美一级a爱片免费观看看| 偷拍熟女少妇极品色| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美一区二区精品小视频在线| 欧美中文日本在线观看视频| 宅男免费午夜| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 99热只有精品国产| 在线观看舔阴道视频| 夜夜爽天天搞| 18禁观看日本| 精品久久久久久成人av| 麻豆国产97在线/欧美| 少妇熟女aⅴ在线视频| 香蕉国产在线看| 最好的美女福利视频网| 制服人妻中文乱码| 99国产综合亚洲精品| 女同久久另类99精品国产91| 热99re8久久精品国产| 一a级毛片在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 狠狠狠狠99中文字幕| 999精品在线视频| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产精品免费一区二区三区在线| 欧美日本视频| 俺也久久电影网| 免费看a级黄色片| 一本精品99久久精品77| 99国产综合亚洲精品| 全区人妻精品视频| av片东京热男人的天堂| 97超视频在线观看视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 久久久久九九精品影院| 无遮挡黄片免费观看| 国产 一区 欧美 日韩| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 又爽又黄无遮挡网站| 五月玫瑰六月丁香| 少妇熟女aⅴ在线视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲成人中文字幕在线播放| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 一进一出抽搐gif免费好疼| 欧美成人免费av一区二区三区| 黄片小视频在线播放| 美女cb高潮喷水在线观看 | 成人av在线播放网站| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 99久久成人亚洲精品观看| 国产精品一区二区三区四区久久| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 舔av片在线| 嫩草影院入口| 婷婷亚洲欧美| 色精品久久人妻99蜜桃| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久9热在线精品视频| 嫩草影视91久久| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 村上凉子中文字幕在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲av成人av| 在线观看舔阴道视频| a级毛片在线看网站| 日韩欧美 国产精品| 在线观看66精品国产| 欧美在线一区亚洲| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 桃红色精品国产亚洲av| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久久国产成人免费| av在线蜜桃| 国产真实乱freesex| 精品人妻1区二区| 特大巨黑吊av在线直播| 他把我摸到了高潮在线观看| 国内精品久久久久精免费| 久久精品综合一区二区三区| 搡老熟女国产l中国老女人| 日日干狠狠操夜夜爽| 一级黄色大片毛片| 久久久国产成人免费| 2021天堂中文幕一二区在线观| 麻豆成人午夜福利视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 人妻久久中文字幕网| 天堂√8在线中文| 免费av不卡在线播放| 欧美3d第一页| 国产一区二区在线av高清观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 女人被狂操c到高潮| 国产三级黄色录像| 国产精品久久久久久久电影 | 国产精品永久免费网站| 久久中文字幕人妻熟女| 免费在线观看影片大全网站| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 99国产综合亚洲精品| 成人av一区二区三区在线看| 伦理电影免费视频|