蒙藥沙棘果油微囊的制備及其質(zhì)量評(píng)價(jià)

云花爾 高 娃

(1.內(nèi)蒙古呼和浩特市中蒙醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020;2.內(nèi)蒙古呼和浩特市精神康復(fù)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010030)

蒙藥沙棘果肉油系從胡頹子科植物沙棘的果肉和果汁中提取的油狀物，現(xiàn)有文獻(xiàn)研究認(rèn)為，沙棘果油在治療皮膚黏膜損傷、凍傷、燒燙傷及胃潰瘍、提高免疫、抗突變等方面有較強(qiáng)的藥理活性［1-3］。有關(guān)沙棘果油藥理作用的研究報(bào)道較多，可是關(guān)于沙棘果油制劑及制備工藝的研究的報(bào)道較少。沙棘果油中脂肪酸(主要為由棕櫚酸、棕櫚一烯酸、油酸等組成)在體內(nèi)的吸收較慢，患者易發(fā)生噯氣、胃灼熱、惡心等不良反應(yīng)，使得患者的順應(yīng)性低;其次，沙棘果油的高不飽和有效成分不穩(wěn)定;運(yùn)輸儲(chǔ)藏不當(dāng)極易發(fā)生氧化、酸敗的現(xiàn)象，使其作用降低。因此，有必要尋找適宜的制劑以提高其患者順應(yīng)性和有效成分穩(wěn)定性。

微囊作為近年來快速發(fā)展成熟起來的新型制劑，具有提高藥物穩(wěn)定性、防止藥物在胃內(nèi)失活和減少其對(duì)胃的刺激等特點(diǎn)，尤其適合油脂類藥物。本試驗(yàn)選用明膠、阿拉伯膠為主要囊材，通過相分離法中的復(fù)凝聚法［4-5］制備沙棘果油微囊，對(duì)微囊的制備、性質(zhì)、穩(wěn)定性等方面進(jìn)行系統(tǒng)性研究，報(bào)道如下。

1 儀器、材料

1.1 儀器：SHZ -D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(上海振捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE -52AA(上海亞榮生化儀器廠);電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器廠);78 -1 型磁力加熱攪拌器(杭州儀表電機(jī)廠);顯微鏡(XSZ-G，COIC，重慶光學(xué)儀器廠);MoticB Series 照相顯微鏡(Motic);YP-150SD 藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)箱(上海邁捷試驗(yàn)設(shè)備有限公司);FA2004 分析天平(上海良平儀器儀表有限公司);PHS3C 數(shù)字酸度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 材料：沙棘果油(內(nèi)蒙古宇航人高技術(shù)產(chǎn)業(yè)有限公司);明膠(天津凱通化學(xué)試劑有限公司);阿拉伯膠粉(天津醫(yī)藥公司);氫氧化鈉(AR，上海蘇懿化學(xué)試劑有限公司);甲醛(AR，南京南試化學(xué)試劑有限公司);石油醚(AR，汕頭市光華化學(xué)廠);其余均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 明膠等電點(diǎn)的測(cè)定：準(zhǔn)確稱取1.0g 明膠于錐形瓶中，加入50mL 蒸餾水，40℃恒溫水浴溶解。用移液管精密量取5.0mL 明膠溶液，移至10 個(gè)試管中，分別調(diào)pH 至4.0、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3 分別于波長(zhǎng)360、380nm 處測(cè)定其透光率。結(jié)果當(dāng)pH 為5.0 時(shí)，明膠溶液的透光率最低，因此，確定明膠的等電點(diǎn)為5.0。

2.2 復(fù)凝聚現(xiàn)象觀察：取適量明膠與阿拉伯膠分別配制成質(zhì)量濃度為0.5%的溶液，按體積比3：9、4：8、5：7、6：6、7：5、8：4、9：3 混合后，用移液管精密量取5.0mL 于25mL 量瓶中，稀釋至刻度，調(diào)其pH5.0 以下，靜置30min 后于360nm處測(cè)其透光率。結(jié)果當(dāng)明膠和阿拉伯膠的體積比為6：6時(shí)，透光率最低，即此時(shí)復(fù)凝聚現(xiàn)象最明顯，因此本實(shí)驗(yàn)選擇明膠溶液與阿拉伯膠溶液的體積比為1：1。

2.3 微囊的制備工藝［6］

2.3.1 沙棘果油微囊的制備：采用復(fù)凝聚法制備沙棘果油微囊。稱取等量明膠和阿拉伯采用復(fù)凝聚法制備沙棘果油微囊。稱取等量明膠和阿拉伯膠膠，分別加入適量蒸餾水，將其置于55℃恒溫水浴中溶脹溶解，配成質(zhì)量濃度5.0%的溶液，并保持在這一溫度下使明膠維持液狀，備用。準(zhǔn)確稱取一定量的沙棘果油加入明膠溶液中，待其充分混合后置于研缽中研勻制成初乳，加入阿拉伯膠溶液，攪拌使其充分混合。用10%醋酸溶液調(diào)節(jié)pH 3.5 ～4.0，恒溫55℃的條件下，攪拌30min 使成囊。加入相當(dāng)于體系1.5倍量的45℃的蒸餾水稀釋，用玻璃棒沾取少量乳液在顯微鏡下檢查其凝聚囊形成狀況。體系在磁力攪拌的同時(shí)用冰水浴降溫到10℃以下，加入一定量37%甲醛1.5mL，固化1h，用20%NaOH 調(diào)pH 至8.0 左右，攪拌30min，靜置后抽濾，濾渣50℃烘箱干燥成粉末。將粉末用一定體積的石油醚在輕微攪拌下浸提5min，用布氏漏斗抽濾，再用一定體積石油醚洗滌濾渣，抽濾，重復(fù)3 次，將濾渣轉(zhuǎn)移真空干燥箱50℃下烘干至恒重備用。

2.3.2 沙棘果油微囊包封率和載藥量的測(cè)定：取制得的全部微囊，避免損耗，精密稱定后，將其用濾紙包裹，置于索氏提取器中，將100mL 的氯仿注入燒瓶中，安裝提取裝置于水浴鍋上，加熱回流2h，使微囊完全破壞，(鏡檢已無微囊存在)，回收氯仿，將燒瓶中剩余油狀液倒于燒杯中，置于真空干燥箱中50℃揮至無氯仿味，稱重，既得沙棘果油的質(zhì)量。根據(jù)下列計(jì)算藥物的包封率和載藥量：

2.3.3 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)：為了優(yōu)化制備工藝，根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)及前期預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，以包封率為考察指標(biāo)，同時(shí)確定明膠質(zhì)量濃度為5%，阿拉伯膠質(zhì)量濃度為5%(質(zhì)量比，阿拉伯膠：明膠=1：1)。選定以直接影響成囊的反應(yīng)溫度(A)、囊心囊材比(B)及攪拌速度(C)為試驗(yàn)因素，每個(gè)因素分為3個(gè)水平見表1，采用L9(34)正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)安排及其結(jié)果見表1、表2，方差分析見表3。

根據(jù)表3 可知，影響沙棘果油微囊包封率的各因素主次順序依次為：B ＞A ＞C 即囊芯囊材比＞溫度＞攪拌速度，方差分析結(jié)果表明，B 和A 的水平對(duì)包封率的影響具有顯著性差異(P＜0.05)，C 因素水平間對(duì)包封率無顯著性影響?？芍辉囼?yàn)設(shè)計(jì)得出的最佳制備條件為B3A3C1，即囊芯囊材比為1：4，反應(yīng)溫度為60℃，攪拌速度為200 r.min-1。

水平因素A 反應(yīng)溫度(℃)B 囊芯囊材比(m/m)C 攪拌速度(r.min -1)200 2 50 1：3 300 3 60 1：1 40 1：2 400 4

因素實(shí)驗(yàn)號(hào) 包封率(%)A B C 200 48.1 2 40 1：3 300 51.3 3 40 1：4 400 59.5 4 50 1：2 300 55.7 5 50 1：3 400 58.9 6 50 1：4 200 68.4 7 60 1：2 400 53.3 8 60 1：3 200 64.2 9 60 1：4 300 72.5 K1 52.967 52.367 60.233 -K2 61.000 58.133 59.833 -K3 63.333 66.800 57.233 -1 40 1：2 R 10.366 14.433 3.000 -

因素 偏差平方和 自由度 F 比 F 臨界值 顯著性反應(yīng)溫度 177.447 2 14.102 6.940*囊芯材比 316.687 2 25.167 6.940 *攪拌速度 15.920 2 1.265 6.940誤差25.17 4

2.3.4 包封率與載藥量關(guān)系考察：此正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)僅以包封率為考察指標(biāo)，得到了最大包封率的實(shí)驗(yàn)參數(shù)。為兼顧另一重要考察指標(biāo)——載藥量，需進(jìn)一步考察包封率和載藥量的關(guān)系，方法如下：根據(jù)正交試驗(yàn)得出的最佳制備條件，固定反應(yīng)溫度為60℃，攪拌速度為200 r.min-1，改變囊芯囊材比為：1：3、1：4、1：5、1：6、1：7、1：8，分別制備6 批沙棘果油微囊，測(cè)定并計(jì)算其包封率和載藥量。繪制包封率與載藥量關(guān)系圖，見圖1。

由圖1 可知，當(dāng)芯材比在1：4 時(shí)，增大囊材的比例至1：5 時(shí)，包封率有所增加，但載藥量急劇下降，為兼顧載藥量和包封率，進(jìn)行綜合考慮，得出最佳工藝條件為：使用明膠，阿拉伯膠溶液濃度為5%，體系pH4.0，囊芯囊材比為1：4，攪拌速度為200 r.min-1，反應(yīng)溫度60℃，凝聚時(shí)間30min，甲醛用量1.5mL，固化溫度10℃，固化時(shí)間為1h。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)：按確定的最佳工藝制備3 批沙棘果油微囊，測(cè)定包封率，載藥量，結(jié)果見表4。

結(jié)果表明，最佳工藝穩(wěn)定、可行，包封率較高。

批號(hào) 載藥量 包封率%16.94 69.01 2 16.22 67.84 3 16.35. 67.95均值 16.50 68.27 1 RSD% 0.38 0.64

3 沙棘果油微囊質(zhì)量評(píng)價(jià)［6］

3.1 沙棘果油微囊形態(tài)學(xué)考察：取少量沙棘果油微囊置于鋪有白紙的培養(yǎng)皿上，光學(xué)顯微鏡下微囊的形態(tài)見圖2。由圖可見藥物清晰的包裹于明膠囊內(nèi)，囊外無游離藥物，空微囊較少，微囊外觀形態(tài)圓整，無粘連。

3.2 微囊粒徑分布：取少量沙棘果油微囊，置于帶標(biāo)尺的顯微鏡(×100 倍)下觀察并統(tǒng)計(jì)約500 個(gè)微球的粒徑。按粒徑的分布范圍分成7 個(gè)區(qū)域并做出粒徑分布直方圖，結(jié)果見表5 及圖3。

結(jié)果表明，沙棘果油微囊粒徑呈正態(tài)分布，大部分粒徑分布在20 -60μm 之間，粒徑分布范圍較窄，平均粒徑為45.44μm。

結(jié)果表明，沙棘果油微囊化后穩(wěn)定性提高。

粒徑范圍(μm) 個(gè)數(shù)(n) 平均粒徑(μm)0 ～20 39 16.75 ±4.56 20 ～30 53 26.53 ±7.30 30 ～40 135 33.92 ±6.02 40 ～50 177 45.93 ±4.27 50 ～60 72 55.01 ±4.83 60 ～70 21 65.21 ±3.98 70 以上 3 74.7 ±3.18合計(jì)500 45.44

3.3 穩(wěn)定性影響因素考察：按中華人民共和國藥典(2010年版二部)藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則項(xiàng)下影響因素考察的要求，分別稱取微囊和沙棘果油適量，各若干份，密封后置于藥物穩(wěn)定試驗(yàn)箱內(nèi)，分別于4500lx 照射，40、60℃(相對(duì)濕度均為75%)及相對(duì)濕度75%、92.5%條件(溫度25℃)放置10d。分別測(cè)定碘價(jià)、過氧化值、酸價(jià)及皂化值，結(jié)果見表6。

試驗(yàn)項(xiàng)目酸價(jià)(/mgKOH·g -1)碘價(jià)(/gI2·100g -1)過氧化值(mmol·kg -1)皂化價(jià)(/mgKOH·g -1沙棘果油 微囊 沙棘果油 微囊 沙棘果油 微囊 沙棘果油 微囊0d 3.91 3.96 170.7 171.5 3.88 3.93 184.5 189.2光照 9.52 4.07 144.2 170.1 6.71 4.02 213.6 191.1 40℃ 5.71 3.99 162.5 171.2 4.59 4.10 193.7 191.8 60℃ 8.86 4.04 151.4 169.8 5.21 4.25 208.5 192.3 RH75% 6.32 4.09 163.0 171.1 4.62 4.17 192.8 191.9 RH95% 12.06 4.11 158.3 170.4 5.33 4.19 223.4 192.7)

4 討 論

本實(shí)驗(yàn)用單凝聚法制備沙棘果油微囊實(shí)驗(yàn)證明，本研究微囊制備工藝比較簡(jiǎn)便，易于操作，重現(xiàn)性好，微囊包封率較高。所得微囊呈球形，表面較光滑，粒徑分布均勻。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)：①轉(zhuǎn)速是一個(gè)較重要的影響。當(dāng)轉(zhuǎn)速過低時(shí)形成膠囊數(shù)量很少，可能由于油相不能良好乳化所致。在低速中速時(shí)可明顯看出膠囊數(shù)量的變化有增加趨勢(shì)，且粒徑明顯減少，但攪拌速度不宜過快，否則不能保持較好囊形。②多次實(shí)驗(yàn)表明，用石油醚效果更好，一般洗滌3 ～5遍至濾出液略帶黃色為止。用石油醚第一次進(jìn)行抽濾時(shí)，應(yīng)充分?jǐn)嚢?，防止發(fā)生結(jié)塊。③所制得微囊載油量較低，可考慮加入增塑劑、表面活性劑或采用成膜性較好的囊材作深入的研究。

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