針刺風(fēng)池穴預(yù)處理對(duì)腦梗死大鼠的缺血耐受現(xiàn)象研究

秦彥強(qiáng)，孫忠人，魏慶雙，姜 凡，劉尚策，張亞娟

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱150040)

隨著社會(huì)的發(fā)展，老齡化的進(jìn)一步加重，腦血管疾病逐漸成為目前我國三大致死性疾病之一［1］。而在腦血管疾病譜中，腦血栓形成發(fā)病率占到1/3。由于中樞神經(jīng)元損傷的不可逆性，無法自然恢復(fù)，往往形成殘疾，重則危機(jī)生命。因此，積極開展腦梗死的預(yù)防工作，對(duì)于降低缺血性腦血管疾病尤其是腦梗死的發(fā)病率、致殘率、致死率等顯得尤為重要。

臨床中發(fā)現(xiàn)，針刺風(fēng)池穴可以改善腦供血不足所引發(fā)的各種癥狀，包括眩暈、一過性黑蒙等，尤其對(duì)椎-基底動(dòng)脈系統(tǒng)TIA 具有良好的改善作用。而有研究表明TIA 可誘發(fā)腦缺血耐受，并且有學(xué)者證實(shí)針刺風(fēng)池穴對(duì)椎-基底動(dòng)脈系統(tǒng)血流速度具有“雙相、良性”調(diào)節(jié)作用［2］。筆者臨床中總結(jié)發(fā)現(xiàn)，曾經(jīng)因后循環(huán)缺血而采用針刺風(fēng)池穴治療的患者，發(fā)生腦血栓形成性腦梗死的病灶面積通常較小，經(jīng)康復(fù)訓(xùn)練后，后遺癥較少。因此，推測(cè)針刺風(fēng)池穴可能存在激活大腦的缺血耐受現(xiàn)象。為進(jìn)一步證實(shí)此推斷，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)研究，探討針刺風(fēng)池穴預(yù)處理對(duì)缺血性腦血管疾病的預(yù)防及治療作用。

1 材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用健康成年的Wistar 雄性大鼠32 只，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)內(nèi)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，所有實(shí)驗(yàn)大鼠體重約為(330 ±10)g。

1.2 分組方法

所有實(shí)驗(yàn)用Wistar 大鼠，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法，分為4 個(gè)小組，各組大鼠分布情況如下:正常組8 只，腦梗死組8 只，缺血預(yù)處理組8 只，針刺預(yù)處理組8 只。

1.3 模型制備

線拴法制備大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞的動(dòng)物模型:采用改良Zea Longa［3］方法制備左側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞腦梗死模型。

1.4 缺血預(yù)處理方法

動(dòng)物麻醉，經(jīng)頸外動(dòng)脈插入自制尼龍線栓，栓塞大腦中動(dòng)脈后，間斷缺血30 min(3 次10 min，每個(gè)10 min后將線栓退至頸內(nèi)動(dòng)脈內(nèi)恢復(fù)血流10 min)，術(shù)后拔出線栓，結(jié)扎頸外動(dòng)脈的殘端。常規(guī)飼養(yǎng)24 h后，采用改良Zea Longa 法制備大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)動(dòng)物模型。

1.5 針刺方法

針刺大鼠雙側(cè)風(fēng)池穴，每日針刺l 次，每次30 min。連續(xù)針刺7 天。針刺結(jié)束后行MCAO 動(dòng)物模型制備。

1.6 指標(biāo)檢測(cè)及方法

指標(biāo)檢測(cè)由不了解實(shí)驗(yàn)分組及治療情況的研究人員負(fù)責(zé)，并進(jìn)行指標(biāo)評(píng)估與記錄。

1.6.1 神經(jīng)功能評(píng)定 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉清醒后，將其放回鼠籠，自由飲食，分別于MCAO 后24 h、72 h 和7 天分別進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。評(píng)分采用Longar5 分制標(biāo)準(zhǔn)。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如表1。

表1 大鼠神經(jīng)功能評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1.6.2 平衡試驗(yàn)(Beam Balanee Test) 各組大鼠分別于實(shí)驗(yàn)周期的第24 h、72 h 和7 天3 個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別進(jìn)行平衡功能評(píng)測(cè)。評(píng)分方法:將一根寬1.5 cm、長150 cm 的木條一端懸空，另一端固定。觀察1 min 內(nèi)大鼠的行為反應(yīng)，按表2 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。在每個(gè)評(píng)測(cè)日進(jìn)行4 次測(cè)試，兩次間歇2 min。4 次測(cè)試結(jié)果取平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

表2 大鼠平衡實(shí)驗(yàn)評(píng)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

1.6. 3 Morris 水迷宮試驗(yàn) 定位航行實(shí)驗(yàn)(Place Navigation Test):定位航行實(shí)驗(yàn)是用來測(cè)量大鼠對(duì)水迷宮學(xué)習(xí)和記憶的獲得能力。將4 組大鼠于實(shí)驗(yàn)周期開始后第4 天開始進(jìn)行學(xué)習(xí)訓(xùn)練。歷時(shí)4 天。每天進(jìn)行4 次訓(xùn)練，每次訓(xùn)練間隔為30 s。

空間探索實(shí)驗(yàn):于定位航行實(shí)驗(yàn)第7 天下午撤除平臺(tái)，大鼠于原平臺(tái)對(duì)側(cè)象限放入水池，觀察實(shí)驗(yàn)大鼠在120 s 內(nèi)在原平臺(tái)所在象限巡游時(shí)間的總和，記錄為空間探索時(shí)間。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 各組大鼠的神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分

正常組神經(jīng)功能評(píng)分為0 分，腦梗死組、缺血預(yù)處理組和針刺預(yù)處理組神經(jīng)功能評(píng)分均有不同程度的缺損，重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)分析顯示，各組間存在差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＜0.05。各組不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能評(píng)分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＜0.05。其中缺血預(yù)處理組和針刺預(yù)處理組神經(jīng)功能評(píng)分改善情況優(yōu)于腦梗死組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＜0.05。而針刺預(yù)處理組和缺血預(yù)處理組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＞0.05。4 組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分結(jié)果見表3。

表3 各組大鼠神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分比較 (±s)

表3 各組大鼠神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分比較 (±s)

注:與腦梗死組比較，▲P ＜0.05;與缺血預(yù)處理組比較，★P ＞0.05。

組 別 n 1 天 3 天 7天正常組8 0.00 ±0.00 0.00 ±0.00 0.00 ±0.00腦梗死組 8 2.63 ±0.74 2.38 ±0.52 1.63 ±0.52缺血預(yù)處理組 8 2.75 ±0.71 1.50 ±0.54 0.75 ±0.71▲針刺預(yù)處理組 8 2.50 ±0.93 1.38 ±0.52 0.88 ±0.99▲★

2.2 各組大鼠平衡試驗(yàn)結(jié)果

各組大鼠分別于實(shí)驗(yàn)周期的第24 h、72 h 和7 天3 個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行平衡功能評(píng)測(cè)。采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)方差分析顯示，各組間總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＜0.05，缺血預(yù)處理組和針刺預(yù)處理組平衡功能改善情況優(yōu)于腦梗死組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＜0.05。而針刺預(yù)處理組和缺血預(yù)處理組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＞0.05。各組平衡實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4 各組大鼠平衡試驗(yàn)結(jié)果比較 (±s)

表4 各組大鼠平衡試驗(yàn)結(jié)果比較 (±s)

注:與腦梗死組比較，▲P ＜0.05;與缺血預(yù)處理組比較，★P ＞0.05。

組 別 1 天 3 天 7天正常組1.28 ±0.21 1.25 ±0.13 1.31 ±0.11腦梗死組 4.38 ±0.74 3.75 ±0.71 3.13 ±0.99缺血預(yù)處理組 4.25 ±0.89 3.13 ±0.84 2.00 ±0.76▲針刺預(yù)處理組 4.13 ±0.84 2.75 ±0.71 2.25 ±1.04▲★

2.3 Morris 水迷宮學(xué)習(xí)記憶能力比較

2.3.1 定位航行試驗(yàn)結(jié)果 4 組大鼠于實(shí)驗(yàn)周期開始后第4 天開始學(xué)習(xí)訓(xùn)練，記錄第7 天4 次訓(xùn)練所用時(shí)間的平均值作為逃避潛伏期指標(biāo)。采用單因素方差分析顯示，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＜0.05。腦梗死組、缺血預(yù)處理組和針刺預(yù)處理組潛伏期時(shí)間明顯延長，與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＜0.05。而缺血預(yù)處理組和針刺預(yù)處理組與腦梗死組比較，潛伏期時(shí)間減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P ＜0.01。針刺預(yù)處理組和缺血預(yù)處理組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＞0.05。各組定位航行逃避潛伏期時(shí)間見表5。

表5 各組大鼠定位航行逃避潛伏期時(shí)間比較 (s，±s)

表5 各組大鼠定位航行逃避潛伏期時(shí)間比較 (s，±s)

注:與腦梗死組比較，△P ＜0.01;與缺血預(yù)處理組比較，★P ＞0.05。

組 別 7天正常組22.38 ±3.02腦梗死組 41.63 ±11.08缺血預(yù)處理組 25.00 ±5.61△針刺預(yù)處理組 27.75 ±7.57△★

2.3.2 空間探索試驗(yàn)結(jié)果 4 組大鼠空間探索試驗(yàn)評(píng)定結(jié)果采用單因素方差分析，結(jié)果顯示各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＜0.05。腦梗死組、缺血預(yù)處理組和針刺預(yù)處理組大鼠120 s 內(nèi)在原平臺(tái)所在象限巡游時(shí)間明顯少于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＜0.05。提示記憶功能存在缺損。而缺血預(yù)處理組和針刺預(yù)處理組與腦梗死組比較，空間探索時(shí)間增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＜0.01。針刺預(yù)處理組和缺血預(yù)處理組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＞0.05。各組空間探索時(shí)間見表6。

表6 各組大鼠空間探索時(shí)間比較 (±s)

表6 各組大鼠空間探索時(shí)間比較 (±s)

注:與腦梗死組比較，△P ＜0.01;與缺血預(yù)處理組比較，★P ＞0.05。

組 別 時(shí)間(s)正常組60.25 ±6.84腦梗死組 34.63 ±5.40缺血預(yù)處理組 46.88 ±5.97△針刺預(yù)處理組 45.63 ±4.37△★

3 討論

缺血性腦血管疾病是一組以動(dòng)脈硬化為基礎(chǔ)，以腦組織發(fā)生缺血缺氧性損傷為主要病理改變的疾病。在損傷早期，存在多種機(jī)制包括局部炎癥反應(yīng)［4-5］、血腦屏障破壞［6］、自由基損傷［7］、興奮性氨基酸毒性反應(yīng)［8］、細(xì)胞內(nèi)鈣超載［9］、細(xì)胞凋亡［10］等。因損傷區(qū)域不同，臨床變現(xiàn)通常不一。

Kitagawa 等［11］于1990 年報(bào)導(dǎo)在沙土鼠大腦內(nèi)存在缺血耐受現(xiàn)象。缺血耐受現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)為腦梗死的防治提供了新的思路，開辟了新途徑，最近實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)除缺血之外，包括低氧［12］、高氧［13-14］、低溫［15］、藥物［16］、艾灸［17-18］等其他多種預(yù)處理方式均可以引起大腦對(duì)再次缺血的耐受。并且實(shí)驗(yàn)證實(shí)針刺預(yù)處理也可誘導(dǎo)腦缺血耐受，從而對(duì)腦組織起保護(hù)作用［19-20］。

文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，針刺風(fēng)池穴可以調(diào)節(jié)椎基底動(dòng)脈血流［21］，臨床中也發(fā)現(xiàn)，針刺風(fēng)池穴可以改善腦供血情況，改善腦血流，擅長治療因腦供血不足引起的眩暈?！躲~人腧穴針灸圖經(jīng)》中指出:風(fēng)池主“目眩，苦頭痛，頸項(xiàng)痛不得回顧，目淚出，欠氣多。”風(fēng)池穴位于斜方肌兩側(cè)與胸鎖乳突肌上端匯合處，上項(xiàng)線直下凹陷處發(fā)際內(nèi)。與頸交感神經(jīng)聯(lián)系密切。臨床中筆者發(fā)現(xiàn)，針刺風(fēng)池穴，可以起到降低交感神經(jīng)緊張度、興奮迷走神經(jīng)的作用。所以，筆者采用風(fēng)池穴預(yù)處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，缺血預(yù)處理組、針刺預(yù)處理組與梗死組神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分、平衡實(shí)驗(yàn)評(píng)分比較，均有顯著性差異(P ＜0.05)，針刺預(yù)處理組定位航行試驗(yàn)逃避潛伏期(27.75 ±7.57)s，空間探索時(shí)間(45.63 ±4.37)s，與腦梗死組比較有顯著性差異(P ＜0.05)。提示針刺風(fēng)池穴預(yù)處理，可以改善腦梗死大鼠神經(jīng)功能，恢復(fù)平衡功能，提高學(xué)習(xí)、記憶能力，可以導(dǎo)致缺血性腦卒中的缺血性耐受。由于針刺無毒副作用、簡單易行、安全可靠、患者易于接受，值得在臨床中推廣使用。

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