復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑對異丙腎上腺素致大鼠心肌缺血損傷的影響

丁云錄，李馳坤，歐喜燕，李曉兵，張琦，陳聲武*

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春130117）

復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑對異丙腎上腺素致大鼠心肌缺血損傷的影響

丁云錄，李馳坤，歐喜燕，李曉兵，張琦，陳聲武*

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春130117）

目的觀察復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑對異丙腎上腺素（ISO）誘導(dǎo)的急性心肌缺血損傷大鼠心電圖和血清心肌酶的影響。方法72只Wistar大鼠隨機(jī)分為6組，即正常對照組、模型對照組、陽性對照組、復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑3個劑量組，每組12只。采用腹腔注射ISO方法復(fù)制大鼠急性心肌缺血模型，觀測心電圖，檢測心肌組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量以及血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸磷酸激酶（CK）活性。結(jié)果復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑能明顯提高心肌組織中SOD活性，降低心肌組織中MDA含量，降低血清AST、LDH和CK活性，并改善心電圖的異常，與心肌缺血模型組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)論復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑可有效抑制急性心肌缺血損傷大鼠ST段的抬高和調(diào)節(jié)心肌酶活性，保護(hù)心肌細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)完整性，從而保護(hù)缺血損傷心肌。

心肌缺血；異丙腎上腺素；復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑

復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑由人參超臨界提取物、桂枝超臨界提取物、川芎超臨界提取物、丹參超臨界提取物、甘松超臨界提取物組方而成。其中人參大補元氣，桂枝溫通經(jīng)脈，丹參通絡(luò)止痛，甘松理氣止痛，川芎活血行氣，5味藥配伍合理，益氣養(yǎng)心通絡(luò)止痛的功效確切。5種藥物可從不同角度治療冠心病，本研究所述藥物劑型為氣霧劑，可以直接作用于疾病部位或通過吸入達(dá)到有效血藥濃度，減少了藥物用量及對胃腸道的刺激性，避免了首過效應(yīng)，并且可以迅速緩解心絞痛癥狀，較常用口服劑型具有起效迅速，服用方便的優(yōu)點，更適合應(yīng)用于冠心病急癥治療。本研究旨在證實其對異丙腎上腺素誘導(dǎo)的急性心肌缺血損傷大鼠心電圖和血清心肌酶的影響，為復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑對冠心病心絞痛臨床治療提供科學(xué)研究依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 動物Wistar大白鼠，清潔級，雄性，體質(zhì)量（200±20）g。動物合格證號：SCXK-（吉）2011-0004，購于長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2 藥品及試劑復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑由長春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心提供。陽性對照藥：硝酸甘油氣霧劑，規(guī)格：0.5 mg／撳，200撳／瓶，批號20120321，山東京衛(wèi)制藥有限公司產(chǎn)品。鹽酸異丙腎上腺素注射液，批號：120701，上海禾豐制藥有限公司產(chǎn)品。天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）試劑盒，批號：120521，中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品。肌酸激酶（CK）試劑盒，批號：120511，中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品。乳酸脫氫酶（LDH）測試盒，批號：20120911，南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。丙二醛（MDA）測試盒，批號：20120911，南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。超氧化物歧化酶（SOD）測試盒，批號：20120911，南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。

1.3 儀器Powerlab／8s型八導(dǎo)數(shù)據(jù)分析記錄儀及相關(guān)附件，澳大利亞埃德公司產(chǎn)品。酶標(biāo)儀，型號：BIO680，日本BIORAD公司產(chǎn)品。可調(diào)高速勻漿器，型號：FSH-2，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司生產(chǎn)。電熱恒溫水浴鍋，型號：HH·SY21-Ni，北京長源試驗設(shè)備廠產(chǎn)品。臺式高速冷凍離心機(jī)，型號：Biofuge Stratos，德國賀利氏公司產(chǎn)品。

2 實驗方法［1-5］

Wistar雄性大鼠72只，體質(zhì)量（200±20）g，隨機(jī)分為：正常對照組，模型對照組，陽性對照藥組，復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑高、中、低劑量組，共6組，每組12只。每天噴霧給藥1次，連續(xù)7 d。最后1次噴霧給藥30 min后，將動物腹腔注射10%的水合氯醛（400 mg／kg）體質(zhì)量麻醉，仰位固定于鼠板上，穩(wěn)定30 min，記錄一段正常標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖。待大鼠腹腔注射給藥1 h后，腹腔注射異丙腎上腺素2 mg／kg體質(zhì)量。隨后，記錄1、3、5、10、30 min的標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖。以大鼠在腹腔注射異丙腎上腺素后各檢測時間點心電圖ST段偏移絕對值為觀測指標(biāo)。1 h后，腹主動脈取血，分離血清，按試劑盒要求操作測CK、LDH、AST。取心臟，制作心肌勻漿，離心取上清液，按試劑盒要求操作測MDA、SOD。試驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，統(tǒng)計學(xué)處理方法采用組間t檢驗。

3 實驗結(jié)果

本試驗通過腹腔注射大劑量異丙腎上腺素，造成大鼠亞急性心肌缺血的實驗動物模型。隨后，觀察了3個不同給藥劑量的復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑對該種缺血性實驗動物模型心電圖的影響。結(jié)果表明，復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑對異丙腎上腺素所引起的大鼠心肌缺血有明顯的保護(hù)作用。見表1。

表1 復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑對異丙腎上腺素所致大鼠缺血性心電圖的影響（ˉx±s，n＝12）

當(dāng)心肌梗死后，可導(dǎo)致心肌細(xì)胞及周圍組織溶解及壞死。壞死后的心肌細(xì)胞內(nèi)糖原竭耗，肌紅蛋白外溢，CK、AST及LDH釋放入血。因此，血清心肌酶含量的變化是反映梗死程度的重要指標(biāo)［6-7］。從表2所列數(shù)據(jù)可以看出，模型組動物血清AST、CK和LDH的釋放量均明顯高于對照組（P＜0.01或P＜0.05），表明模型復(fù)制成功。在給予復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑藥物干預(yù)后，復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑高劑量可以明顯降低大鼠血清中異常升高的AST、CK和LDH含量（與模型對照組比較均P＜0.05）；復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑中劑量可以明顯降低大鼠血清中異常升高的CK和LDH含量（與模型對照組比較均P＜0.05）。上述試驗結(jié)果表明，復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑在心肌缺血條件下，通過預(yù)防性給藥，可以明顯減少心肌酶的釋放，減輕心肌損傷程度。詳細(xì)結(jié)果見表2。

表2 復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑對心肌缺血大鼠血清AST、CK、LDH含量的影響（ˉx±s，n＝12）U／L

隨著心肌缺血損傷機(jī)制研究的深入，發(fā)現(xiàn)大量氧自由基生成及脂質(zhì)過氧化物反應(yīng)增強是心肌缺血損傷的主要機(jī)制之一［8-10］，SOD作為氧自由基清除酶能清除超氧陰離子，保護(hù)心肌細(xì)胞，減輕心臟功能的損傷程度。其活力的高低常間接地反映機(jī)體清除自由基的能力，當(dāng)心肌缺血受損時可導(dǎo)致SOD活性降低。MDA則在一定程度上反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映細(xì)胞損傷的輕重。因此，冠心病患者心肌中SOD活性下降及MDA含量升高也是反映心肌缺血、缺氧程度的重要標(biāo)志。本試驗中，模型對照組血清中過氧化脂質(zhì)代謝產(chǎn)物MDA含量顯著升高；相反，超氧陰離子自由基清除酶SOD活性卻明顯下降。表明在心肌缺血缺氧損傷后產(chǎn)生了大量的過氧化脂質(zhì)代謝產(chǎn)物MDA，同時使氧自由基清除酶SOD大量被消耗。從試驗結(jié)果中可以看出，復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑高劑量組及中劑量組均有降低動物心肌勻漿中過氧化脂質(zhì)代謝產(chǎn)物MDA含量及升高超氧陰離子自由基清除酶SOD活性的作用（與模型對照組比較P＜0.01或P＜0.05）。詳細(xì)結(jié)果見表3。

表3 復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑對心肌缺血大鼠心肌勻漿組織中SOD和MDA的影響（ˉx±s，n＝12）

4 討論

異丙腎上腺素（ISO）是人工合成的β受體激動劑，臨床上常用于增強心肌收縮，但腹腔注射大劑量ISO可因增加心肌耗氧而造成大鼠急性心肌缺血，其心電圖、心肌酶學(xué)及組織病理學(xué)變化均類似于人類急性心肌梗死的病變特征［11］。與其他心肌缺血動物模型相比，這種模型方法成本低、操作簡單、可重復(fù)性強，且心肌壞死為非特異性損傷，目前已廣泛應(yīng)用于探索心肌缺血壞死的發(fā)生機(jī)制和評價其防治措施的實驗研究。

ISO通過收縮冠狀動脈、增強心肌收縮力和增加心肌耗氧量等多方面機(jī)制誘發(fā)心肌缺血。在心肌缺血的實驗研究中，多以ST段抬高的毫伏數(shù)表示心肌損傷的程度。心肌缺血缺氧時，細(xì)胞膜通透性增強導(dǎo)致心肌酶外漏，其中尤以AST、LDH和CK為顯著，其含量與缺血缺氧程度呈正比［12］。氧自由基與心肌缺血損傷有密切關(guān)系，心肌缺血后SOD活性下降，而MDA大量蓄積，破壞了細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，引起心肌細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷，故其可判斷心肌損傷程度［13-14］。

本研究采用經(jīng)典腹腔注射異丙腎上腺素誘導(dǎo)急性心肌缺血模型，觀察復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑對模型動物心肌缺血損傷程度的影響。實驗結(jié)果顯示：復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑可改善心電圖ST段偏移，降低心電圖ST段的異常抬高，同時明顯抑制急性心肌缺血時AST、CK、LDH的釋放，有降低動物心肌勻漿中過氧化脂質(zhì)代謝產(chǎn)物MDA含量及升高超氧陰離子自由基清除酶SOD活性的作用，對抗ISO誘發(fā)大鼠所致的心肌缺血損傷，表明復(fù)方人參揮發(fā)油氣霧劑可保護(hù)心肌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整性，對缺血性損傷的心肌細(xì)胞具有良好預(yù)防作用。

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Effects of ffrshfyqwj E1 on electrocardiogram and cardiac enzymes of myocardial injury induced by isoproterenol in rats

DING Yunlu，LI Chikun，OU Xiyan，LI Xiaobing，ZHANG Qi，CHEN Shengwu*
（Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China）

ObjectiveTo observe the effects of ffrshfyqwj on electrocardiogram and cardiacenzymes of myocardial ischemic injury induced by isoproterenoe（ISO）in rats.MethodsSeventy-two Wistar rats were randomly divided into six groups as following（n＝12）.Acute myocardium ischemia rat model was established by ip of ISO.The level of，malondialdehyde（MDA）and superoxide dismutase（SOD）in myocardial homogenate and the content of AST，LDH，CK in serumwere observed after ISO injection.Rat ECGwas also recorded.ResultsFfrshfyqwj could significantly increase SOD activity and decrease content of MDA，AST，LDH，CK and improve the abnormity of ECG（P＜0.05，P＜0.01）.ConclusionFfrshfyqwj can inhibit the elevation of ST-T period ofacute myocardial ischemia rats，and regulate the activity of cardiac enzymes to protect the ischemic myocar-dium.

myocardial ischemia；isoproterenol；ffrshfyqwj

R285.5

A

1003-5699（2015）09-0945-04

：張瑞彬

2015-03-13）

10.13463／j.cnki.jlzyy.2015.09.024

吉林省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科技項目（YJS-0201）；吉林省科技發(fā)展計劃項目（20110932）。

丁云錄（1979-），男，大學(xué)本科，助理研究員，主要從事藥理學(xué)研究。

*通信作者：陳聲武，電話-（0431）86177510；電子信箱-chenshengwu 1958＠yahoo.com.cn