干擾素介導的跨膜蛋白1在卵巢上皮性癌中的表達

楊 蓉，孫 萍，宋芳霞，李 佩，王 建

(1.陜西省第二人民醫(yī)院婦產科，陜西 西安710004；2.陜西省腫瘤醫(yī)院婦瘤科，陜西 西安710061；3.第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院婦產科，陜西 西安710033)

干擾素介導的跨膜蛋白1在卵巢上皮性癌中的表達

楊 蓉1，孫 萍2，宋芳霞1，李 佩1，王 建3

(1.陜西省第二人民醫(yī)院婦產科，陜西 西安710004；
2.陜西省腫瘤醫(yī)院婦瘤科，陜西 西安710061；3.第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院婦產科，陜西 西安710033)

目的 探討卵巢上皮性癌中干擾素介導的跨膜蛋白1(IFITM1)基因的表達及其臨床意義。方法 應用免疫組織化學檢測42例正常卵巢、51例卵巢良性腫瘤、48例卵巢交界性腫瘤和85例卵巢上皮性癌組織中IFITM1的陽性表達，同時分析IFITM1蛋白表達狀況與上皮性卵巢癌各臨床病理因素之間的關系。結果 免疫組化顯示IFITM1蛋白表達強度在正常卵巢、良性卵巢腫瘤、交界性卵巢腫瘤、上皮性卵巢癌間有統(tǒng)計學意義(χ2=8.407，P=0.004)。正常卵巢組織中IFITM1陽性表達率為40.5%(17/42)，卵巢良性腫瘤組織中70.5%(36/51)，卵巢交界性腫瘤組織中為70.8%(34/48)，卵巢上皮性癌中為77.6%(66/85)，IFITM1的陽性表達率在4種卵巢組織中比較有統(tǒng)計學意義(χ2=18.491，P<0.001)。IFITM1在上皮性卵巢癌中的表達與FIGO分期、細胞分化程度和組織學類型性有關(χ2值分別為4.307、6.959、8.539，均P<0.05)，早期卵巢癌(Ⅰ+Ⅱ)中IFITM1蛋白表達低于晚期卵巢癌(Ⅲ+Ⅳ)，χ2=4.307，P=0.038)，隨著腫瘤細胞分化程度的降低，IFITM1表達率逐漸增高。IFITM1蛋白表達與淋巴轉移、腹水無統(tǒng)計學相關性(χ2值分別為0.111、0.024，均P>0.05)。耐藥性卵巢癌中IFITM1陽性表達顯著高于敏感組(χ2=34.843，P<0.001)。結論 IFITM1表達在卵巢上皮性癌組織中明顯高于正常卵巢、卵巢良性腫瘤和卵巢交界性腫瘤，提示IFITM1參與了卵巢癌的發(fā)生和進展，并對以鉑類為基礎的化療耐藥性產生有臨床預測價值。

卵巢腫瘤；干擾素介導的跨膜蛋白1基因；免疫組織化學；耐藥；DNA損傷

卵巢癌是我國女性生殖系統(tǒng)最致命的惡性腫瘤，因缺乏成熟的早期診斷方法，臨床確診時70%已屬晚期，即使?jié)M意的腫瘤減滅術及正規(guī)的化療治療，絕大多數(shù)患者仍會復發(fā)，因此尋找特異而靈敏的腫瘤標志物對卵巢癌的早期基因診斷及提高生存率具有重要的現(xiàn)實意義。干擾素介導的跨膜蛋白1(interferon-induced transmembrane protein 1，IFITM1)的基因產物是淋巴細胞參與傳遞抗增殖和同型抗粘附信號的復合體之一。近年有關IFITM1高表達的研究報道[1]有直腸癌、結腸癌、胃癌、肺癌及頭頸部鱗癌。國外在卵巢癌基因表達分析中發(fā)現(xiàn)IFITM1是最有潛在前途的分子標志物，而國內尚無報道。本研究應用免疫組織化學技術檢測正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤、交界性卵巢腫瘤及上皮性卵巢癌中IFITM1的表達水平，探討IFITM1與卵巢癌的病理分期、國際婦產科聯(lián)盟(international federation of gynecology and obstetrics, FIGO)分期、腫瘤分化程度、淋巴結有無轉移、腹水、化療耐藥的相關性，初步揭示IFITM1在卵巢癌早期診斷及化學治療方面的意義。

1 材料和方法

1.1 材料

選擇第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院、陜西省腫瘤醫(yī)院和陜西省第二人民醫(yī)院2005年1月至2013年1月經手術確診的初治卵巢上皮癌患者85例，年齡20～81(中位48)歲，其中漿液性囊腺癌39例，粘液性囊腺癌24例，子宮內膜樣癌5例，未分化腺癌17例。按FIGO手術病理分期為標準，其中Ⅰ期16例，Ⅱ期7例，Ⅲ期51例，Ⅳ期11例。組織學分級中高分化13例，中分化48例，低分化24例。術前均未經放化療治療，術后均給予鉑類為基礎的聯(lián)合化療，隨訪68例，失訪17例。選擇同期住院手術的良性卵巢腫瘤患者51例，年齡23～68(中位43.6)歲，交界性卵巢腫瘤48例，年齡20～65(中位41.5)歲，正常卵巢42例，年齡36～67(中位46.3)歲作為對照。臨床收集的所有標本福爾馬林固定并石蠟包埋，試劑采用兔抗人IFITM1單克隆抗體，兔抗人β-actin單克隆抗體購自美國Abcam公司，化學發(fā)光試劑，Braford工作液，SP免疫組化試劑盒和DAB顯色劑均購自北京中杉金橋生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學染色

福爾馬林固定，石蠟包埋組織標本，5μm切片后，37℃過夜，HE染色復核并行SP免疫組化。陰性對照采用生理鹽水磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer solution，PBS)替代一抗，以前期試驗中已知的陽性病例為陽性對照。二甲苯脫蠟3次，酒精脫水，3%H2O2-甲醇滅活內源性過氧化物酶，室溫10分鐘，PBS沖洗，煮沸15 分鐘抗原修復，5%BSA牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)封閉20分鐘，滴加IFITM1一抗，4℃過夜，PBS沖洗，滴加二抗A液(DAKO REALTMEnVision復合物)，室溫孵育45分鐘，滴加新鮮配置的DAB顯色液，蘇木素復染。顯微鏡為Nikon Eclipse Ti-SR。

免疫陽性信號為棕黃色細小顆粒，根據(jù)文獻[2]中半定量積分法記錄切片中陽性細胞的染色強度和染色細胞的百分數(shù)并分級計分。染色強度分為4級：深棕色為3分，棕黃色為2分，淺黃色為1分，不顯色為0分。每張切片隨機選取10個高倍視野記錄染色細胞百分數(shù)，>75%為4分, 50%～75%為3分，25%～50%為2分，5%～25%為1分，<5%為0分。兩項相加之和>5分為強陽性(+++)，3～5分為陽性(++)，1～3分為弱陽性(+)，<1分為陰性(-)。

1.2.2 卵巢癌鉑類化療敏感性評價

卵巢癌患者根據(jù)2012年美國國立綜合癌癥網絡(National Comprehensive Cancer Network, NCCN)《卵巢癌臨床實踐指南》建議的分型，對于鉑類初次化療后達到臨床完全緩解，停藥超過6個月復發(fā)為鉑類敏感性卵巢癌，6個月內復發(fā)為鉑類耐藥性卵巢癌[3]。隨訪的68例卵巢上皮癌初治患者，均進行了至少6個療程的鉑類為基礎的規(guī)范輔助化療(PT方案：多西他賽+奧沙利鉑)，隨訪項目包括：婦科檢查、影像學檢查(盆腔B超、CT、MRI、必要時PET檢查)、CA125等進行客觀評價。

1.3 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 17.0進行統(tǒng)計學處理，對等級資料比較用秩和檢驗，對計數(shù)資料用χ2檢驗， 以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 干擾素介導的跨膜蛋白1在各組的表達結果

IFITM1陽性表達為棕黃色細顆粒，定位于細胞胞膜上。染色強度在正常卵巢、良性卵巢腫瘤組織、交界性卵巢腫瘤組織和卵巢癌組織中強弱不等，呈逐漸增強趨勢，組間比較有統(tǒng)計學意義(χ2=8.407，P=0.004)，見附圖。在卵巢上皮性癌組織中IFITM1的陽性表達率為77.6%(66/85)顯著高于其他3組，組間差異有統(tǒng)計學意義(χ2=18.491，P<0.001)，見表1。

2.2 干擾素介導的跨膜蛋白1表達與卵巢癌臨床病理特征間的關系

匯總臨床資料顯示，IFITM1在上皮性卵巢癌的表達與FIGO分期、細胞分化程度和組織學類型有關(χ2值分別為4.307、6.959、8.539，均P<0.05)，早期卵巢癌(Ⅰ+Ⅱ)中IFITM1蛋白表達低于晚期卵巢癌(Ⅲ+Ⅳ)(χ2=4.307，P=0.038)，隨著腫瘤細胞分化程度的降低，IFITM1表達率逐漸增高。IFITM1蛋白表達與淋巴轉移、腹水無統(tǒng)計學相關性(χ2值分別為0.111、0.024，均P>0.05)，見表2。

注：A為正常卵巢中的表達，B為良性卵巢腫瘤中的表達，C為交界性卵巢腫瘤中的表達，D為上皮性卵巢癌中的表達，N為陰性對照。

附圖 IFITM1在四種卵巢組織中的表達(×200)

Fig. Expressions of IFITM1 in four kinds of ovarian tissues (×200)

表1 IFITM1在4種卵巢組織中的表達[n(%)]

注：▲為與正常卵巢組比較，★為與上皮性卵巢癌比較。

表2 IFITM1蛋白的表達與卵巢癌臨床病理因素的關系[n(%)]

Table 2 Relationship between expression of IFITM1 and the clinical and pathological factors of ovarian carcinoma[n(%)]

注：aP<0.05 VS Ⅰ+Ⅱ期；bP<0.05 VS 高、中分化；cP<0.05 vs其他3種病理類型。

2.3 卵巢癌干擾素介導的跨膜蛋白1表達與鉑類為基礎的化療敏感性的關系

本實驗對所有隨訪對象進行療效評價，其中敏感組51例，耐藥組17例，敏感性卵巢癌中有38例IFITM1表達陽性，耐藥性卵巢癌中有16例IFITM1表達陽性，敏感性卵巢癌中IFITM1陽性表達顯著高于耐藥組(χ2=34.82，P<0.001)，見表3。

表3 卵巢癌IFITM1表達與鉑類化療敏感性的關系[n(%)]

3 討論

3.1 干擾素介導的跨膜蛋白1與卵巢癌等惡性腫瘤的關系

IFITM1是干擾素誘導跨膜蛋白家族的一員，也稱Leu-13或9-27，基因定位于人類11號染色體p15.5區(qū)域，其啟動子區(qū)含有干擾素刺激反應元件，可被誘導組成蛋白復合物參與人類多種腫瘤的增生發(fā)展、侵襲轉移[4]。本實驗率先開展IFITM1與卵巢癌是否相關的研究。采用免疫組化方法發(fā)現(xiàn)，卵巢癌組織中IFITM1表達明顯較正常卵巢和卵巢良性腫瘤明顯上調，提示IFITM1基因表達可能是卵巢癌的一個早期事件。

本研究結果表明，IFITM1表達與病理類型、手術分期和細胞學分化程度有關(P<0.05)。IFITM1表達在晚期和低分化卵巢癌中表達顯著提高，提示IFITM1的表達隨著卵巢癌惡性生物學行為進展而增強，推測IFITM1可能成為卵巢癌病情評估的新基因[5]。IFITM1在其他惡性腫瘤中的作用正日益受到廣泛關注。Hatano等[6]通過實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應研究發(fā)現(xiàn)，IFITM1基因在頭頸部癌的表達明顯上調，并參與腫瘤的增殖、浸潤和淋巴轉移。研究提示IFITM1的表達水平在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中顯著增高，作為免疫細胞因子協(xié)同補體C3、C4參與疾病的的病理發(fā)展和治療[7]。Fumoto等[8]通過質粒轉染技術檢測IFITM1在組織水平和細胞水平的表達，證實IFITM1在食管癌中過度表達，并與順鉑化療敏感性有統(tǒng)計學相關。調控區(qū)27CpG位點的DNA甲基化定量研究顯示，啟動子甲基化參與胃癌IFITM1特異性過表達的調控，對胃癌的侵襲有預測作用[8]。

3.2 IFITM1與卵巢上皮性癌耐藥的關系

卵巢上皮性癌是最常見的卵巢惡性腫瘤[9]，大多數(shù)患者就診時已處于晚期，標準的腫瘤細胞減滅術聯(lián)合鉑類為基礎的輔助性化療，即使暫時獲得臨床完全緩解，但85%～90%的患者最終仍會復發(fā)和轉移[10]，5年生存率在所有婦科惡性腫瘤中最低。近年來復發(fā)性卵巢癌的耐藥研究成為熱點領域，眾多研究都致力于通過解決卵巢癌耐藥性問題來提高化療效果。目前已證實，耐藥性卵巢癌內的DNA修復速度加快[1]。本研究發(fā)現(xiàn)，鉑類耐藥組中IFITM1強陽性表達比例(94.1%)明顯高于鉑類敏感租(74.5%)，結果顯示IFITM1表達強度與鉑類為基礎的化療藥物的敏感性相關，對預測療效有提示作用。

綜上所述，本研究初步推測IFITM1參與了卵巢癌發(fā)生發(fā)展和鉑類耐藥產生，檢測IFITM1有望為臨床預測化療敏感性和靶向治療提供新依據(jù)。

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[專業(yè)責任編輯：楊文方]

Expression of IFITM1 in epithelial ovarian carcinoma

YANG Rong1, SUN Ping2, SONG Fang-xia1, LI Pei1, WANG Jian3

(1.DepartmentofGynecologyandObstetrics,SecondPeople’sHospitalofShaanxiProvince,ShaanxiXi’an710004,China;
2.DepartmentofGynecologyOncology,ShaanxiProvincialTumorHospital,ShaanxiXi’an710061,China;
3.DepartmentofGynecologyandObstetrics,XijingHospital,FourthMilitaryUniversity,ShaanxiXi’an710033,China)

Objective To investigate the expression and clinical implication of interferon-induced transmembrane protein 1 (IFITM1) in epithelial ovarian carcinoma. Methods The positive expression of IFITM1 was determined with SP immunohistochemistry in 42 cases of normal ovarian tissue, 51 cases of benign ovarian tumor, 48 cases of borderline ovarian tumor, and 85 cases of epithelial ovarian carcinoma. The correlation between its expression and clinical pathological factors of epithelial ovarian carcinoma was analyzed. Results The immunohistochemical technique showed that the expression levels of IFITM1 were statistically different in four kinds of tissues (χ2=8.407,P=0.004). The positive expression rate of IFITM1 was 40.5%(17/42), 70.5%(36/51), 70.8%(34/48) and 77.6%(66/85), respectively in normal ovarian tissue, benign ovarian tumor, borderline ovarian tumor and epithelial ovarian carcinoma (χ2=18.491,P<0.001). The expression of IFITM1 was correlated with FIGO stage, tumor grade and histological type in epithelial ovarian carcinoma (χ2value was 4.307, 6.959 and 8.539, respectively, allP<0.05). It was lower in early stage of ovarian carcinoma (Ⅰ, Ⅱ) than in late stage (Ⅲ, Ⅳ) (χ2=4.307,P=0.038). With the decreasing of differentiation, the expression rate of IFITM1 increased. IFITM1 was not significantly correlated with lymphatic metastasis and abdominal dropsy (χ2value was 0.111 and 0.024, respectively, bothP>0.05). The positive expression of IFITM1 in drug resistant group was significantly higher than that in sensitive group (χ2=34.843,P<0.001).Conclusion The expression of IFITM1 is significantly higher in epithelial ovarian carcinoma than in normal ovarian tissue, benign ovarian tumor and borderline ovarian tumor, which indicates that IFITM1 may play a vital role in carcinogenesis and progression of ovarian carcinoma and that it has predictive value on resistance of platinum-based chemotherapy.

ovarian tumor, interferon-induced transmembrane protein 1 (IFITM1), immunohistochemistry, drug resistance, DNA damage

2014-09-15

楊 蓉(1981-)，女，主治醫(yī)師，在讀碩士研究生，主要從事婦科腫瘤及高危妊娠研究。

王 建，主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.02.024

R737.3

A

1673-5293(2015)02-0240-04