重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究＊

陳志雄， 黃 瓊， 陶 琳， 馬紅梅

武漢大學(xué)人民醫(yī)院1老年病科2眼科，武漢 430060

重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究＊

陳志雄1， 黃 瓊2， 陶 琳1， 馬紅梅1

武漢大學(xué)人民醫(yī)院1老年病科2眼科，武漢 430060

目的 探討Ad－PTEN－EGFP對(duì)裸鼠肺癌種植瘤的體內(nèi)殺傷作用及機(jī)制。方法 構(gòu)建裸鼠肺癌種植瘤模型，將Ad－PTEN－EGFP注射裸鼠體內(nèi)，觀察腫瘤體積變化，進(jìn)行腫瘤組織的常規(guī)病理檢查、原位凋亡染色及免疫組化染色，檢查治療后各組裸鼠腫瘤組織中有關(guān)基因的表達(dá)情況。結(jié)果 與對(duì)照組相比，治療組腫瘤組織生長(zhǎng)速度明顯減慢，腫瘤組織體積較對(duì)照組明顯縮?。≒＜0.05），且隨腺病毒治療劑量的升高而更為明顯；原位凋亡染色法檢測(cè)腫瘤組織，發(fā)現(xiàn)治療組凋亡細(xì)胞明顯增多（P＜0.05），且隨腺病毒治療劑量的升高而更為明顯（P＜0.05）。此外還發(fā)現(xiàn)，治療后腫瘤組織或血清中的Survivin、NF－κB和PI3K表達(dá)水平明顯下降（均P＜0.05），呈負(fù)相關(guān)性，且隨腺病毒治療劑量的升高而更為明顯（P＜0.05）。結(jié)論 Ad－PTEN－EGFP能明顯抑制腫瘤組織的生長(zhǎng)，其作用機(jī)制與促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)相關(guān)基因表達(dá)水平有一定聯(lián)系。

肺癌； 基因治療； PTEN基因； 腺病毒

PTEN基因是一種重要的腫瘤抑制基因，以前又被研究人員稱為MMAC1／TEP1，經(jīng)過(guò)多年研究發(fā)現(xiàn)，該基因位于染色體10q23處。在這個(gè)基因組區(qū)域中，雜合性缺失現(xiàn)象常常出現(xiàn)在許多腫瘤中［1］。在患有常染色體顯性相關(guān)疾病的患者中，如Castleman病（CD）、Lhermitte－Duclos?。↙DD）等，目前已經(jīng)在80%以上這類疾病患者基因組中檢測(cè)到了PTEN基因突變的現(xiàn)象［2］。研究人員發(fā)現(xiàn)，在PTEN基因已經(jīng)突變的雜合型小鼠中，高度不典型增生這種特殊的現(xiàn)象常常出現(xiàn)，而出現(xiàn)這種特殊現(xiàn)象的小鼠中，不同組織起源腫瘤的發(fā)生頻率也比較高。上述研究結(jié)果證實(shí):在腫瘤抑制過(guò)程中，PTEN基因起著重要的作用［35］。通過(guò)前期實(shí)驗(yàn)，我們成功構(gòu)建了含PTEN抑癌基因的重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP，并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，將重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP轉(zhuǎn)染肺癌A549細(xì)胞。因此，本實(shí)驗(yàn)擬構(gòu)建動(dòng)物模型，從體內(nèi)方面探討重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP治療肺癌的機(jī)制，為進(jìn)一步將PTEN基因應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 細(xì)胞株 人肺腺癌細(xì)胞株A549，購(gòu)自武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院腫瘤研究所。

1.1.2 重組腺病毒 本課題組前期制備及保存的Ad－PTEN－EGFP［6］；Ad－EGFP由本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.2 試劑

RPMI1640和小牛血清為Gibco公司產(chǎn)品；TUNEL試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)公司；抗Survivin、NF－κB、PI3 K和PTEN抗體購(gòu)自深圳中杉生物公司，Caspase－3、Caspase－9、TGF－β1和PTEN ELISA檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自深圳晶美公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Balb／c裸鼠20只，雄性，4周齡，體重15～20 g，購(gòu)自眾磊（北京）生物科技發(fā)展有限公司，飼養(yǎng)于同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部（SPF級(jí)），飼養(yǎng)6～7 d后開始實(shí)驗(yàn)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng) 人肺腺癌A549細(xì)胞為武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院腫瘤研究所保存細(xì)胞。在5%CO2，37℃條件下的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)液為含10%小牛血清的RPMI1640。

1.4.2 肺癌皮下種植瘤裸鼠動(dòng)物模型的制作 將A549細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，用0.25%胰酶、EDTA消化貼壁的細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，用1%的PBS洗滌3次，用PBS將細(xì)胞密度調(diào)整為2×107細(xì)胞／m L。在裸鼠右側(cè)近腋下腹部皮下注射100μL的細(xì)胞溶液（2×106個(gè)細(xì)胞）。觀察和檢測(cè)種植瘤的生長(zhǎng)速度，如果有腫塊出現(xiàn)，則癌細(xì)胞種植成功。

1.4.3 動(dòng)物分組及治療方法 根據(jù)腫瘤體積及瘤重各組匹配的原則，將20只裸鼠分為4組，使各組之間無(wú)明顯差異性（P＞0.05）。重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP高劑量治療組（5只）:瘤體內(nèi)注射重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP病毒純化液，隔日1次，連續(xù)皮下注射5次，注射量為1×109pfu／50μL。重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP低劑量治療組（5只）:瘤體內(nèi)注射重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP病毒純化液，隔日1次，連續(xù)皮下注射5次，注射量為5×108pfu／50μL。Ad－EGFP組（5只）:瘤體內(nèi)注射腺病毒Ad－LacZ病毒純化液，隔日1次，連續(xù)皮下注射5次，注射量為5×108pfu／50μL。PBS組（5只）:瘤體內(nèi)注射PBS，隔日1次，連續(xù)皮下注射5次，注射量為50μL。

1.4.4 療效觀察 分別在治療第0，2，4，7，9，11，13天，測(cè)量各組動(dòng)物腫瘤組織的最大徑和最小徑，計(jì)算腫瘤體積:腫瘤體積（mm3）＝πab2／6（a:最大徑，b:最小徑）。重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP注射治療結(jié)束后，比較治療組與對(duì)照組腫瘤的體積及重量，并行病理學(xué)檢查。

1.4.5 組織標(biāo)本取材 在重組腺病毒治療結(jié)束后的第3天處死裸鼠，取血留血清，—70℃冰箱貯存，無(wú)菌條件下取出腫瘤，用濃度為4%的多聚甲醛溶液將腫瘤組織固定，并進(jìn)行石蠟切片及蘇木精－伊紅（HE）染色和免疫組化染色，觀察免疫組化結(jié)果和檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。

1.5 病理檢查

1.5.1 原位凋亡染色（TUNEL） 實(shí)驗(yàn)方法按試劑盒說(shuō)明書操作，在顯微鏡下觀察切片染色情況，隨機(jī)選取每張切片中5個(gè)高倍視野觀察并計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞及陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比。

1.5.2 免疫組化染色檢測(cè)Survivin、NF－κB、PI3K的表達(dá) 主要步驟如下:①組織切片按乙醇濃度梯度常規(guī)脫蠟至水。②用新鮮蒸餾水與雙氧水配制成3%H2O2，室溫條件下放置10 min，用來(lái)滅活組織中的內(nèi)源性酶，然后用蒸餾水清洗3次。③熱修復(fù)抗原，將組織切片浸泡到0.02 mol／L濃度的PBS中（p H 7.2），電爐加熱至沸騰后斷電，間隔時(shí)間為10 min，冷卻后用0.1 mol／L濃度的PBS洗滌2次。④用正常山羊血清封閉液封閉組織切片，室溫條件下放置30 min，去除殘留的多余液體。⑤將適當(dāng)稀釋的一抗（1∶150）滴加在切片上，要覆蓋住整個(gè)切片，4℃條件下過(guò)夜孵育，0.1 mol／L濃度的PBS清洗3次，2 min／次。⑥將生物素化二抗滴加在切片上，覆蓋住整個(gè)切片，37℃條件下孵育30 min，0.1 mol／L濃度的PBS清洗3次，3 min／次。⑦滴加幾滴SABC試劑，37℃條件下孵育30 min，0.1 mol／L濃度的PBS清洗4次，5 min／次。⑧DAB顯色，在室溫條件下和顯微鏡觀察的條件下控制DAB顯色的時(shí)間，出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)可用蒸餾水洗滌以終止DAB顯色反應(yīng)。⑨用蘇木精復(fù)染。⑩封片。

每次實(shí)驗(yàn)中均設(shè)空白對(duì)照（磷酸鹽緩沖液）和陰性對(duì)照（正常兔血清取代一抗）。定量分析采用HPIAS－1000型高清晰度彩色病理圖文報(bào)告分析系統(tǒng)，在普通顯微鏡下，計(jì)算整個(gè)腫瘤組織中，陽(yáng)性面積占總面積的百分比（%），每張切片均隨機(jī)選取5個(gè)視野，求平均值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料組間比較采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 構(gòu)建人肺腺癌動(dòng)物模型

注射肺癌細(xì)胞1周左右可見裸鼠皮下注射部位出現(xiàn)結(jié)節(jié)狀組織，隨時(shí)間延長(zhǎng)，該組織可繼續(xù)生長(zhǎng)，有時(shí)還可見有增大的腫瘤瘤體破潰和出血。

2.2 重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP腫瘤內(nèi)注射對(duì)肺癌裸鼠皮下種植瘤的抑瘤效果

皮下接種Balb／c裸鼠肺腺癌A549細(xì)胞，大概7 d后，肉眼可發(fā)現(xiàn)有明顯的皮下腫瘤形成。經(jīng)重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP注射后，裸鼠的腫瘤組織體積增長(zhǎng)速度明顯減慢，而其他兩個(gè)對(duì)照組裸鼠腫瘤組織生長(zhǎng)仍然較快。1周后我們可以發(fā)現(xiàn)Ad－PTEN－EGFP治療組的腫瘤組織較其他對(duì)照組均明顯縮?。≒＜0.01），且第11天時(shí)高劑量治療組與低劑量治療組比較，腫瘤體積也明顯縮小（P＜0.05），Ad－EGFP組腫瘤體積增長(zhǎng)較PBS組稍緩，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組腫瘤體積變化情況及比較（ˉx±s，mm3）Table 1 Comparison of tumor volume in different groups and different time points（ˉx±s，mm3）

重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP治療結(jié)束后，將各組裸鼠種植瘤稱重，Ad－PTEN－EGFP高劑量治療組為（0.38±0.10）g；Ad－PTEN－EGFP低劑量治療組為（0.63±0.16）g；Ad－EGFP組為（1.48± 0.32）g；PBS組為（1.54±0.37）g。高劑量和低劑量Ad－PTEN－EGFP治療組腫瘤重量明顯較其余兩組?。ň鵓＜0.01），且高劑量治療組與低劑量治療組比較，腫瘤重量也明顯減少（P＜0.05）。

2.3 各組腫瘤組織蘇木精－伊紅染色

在Ad－EGFP組和PBS組中，蘇木精－伊紅染色可見裸鼠腫瘤細(xì)胞核大，核仁清楚，不規(guī)則的分裂象，纖維間隔可在腫瘤組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)；而高劑量和低劑量治療組中，大量的腫瘤組織壞死可在腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)，纖維組織代替壞死的腫瘤細(xì)胞。見圖1。

圖1 各組腫瘤組織病理切片圖（蘇木精－伊紅染色，×400）Fig.1 Pathological section of tumor tissues（HE Staining，×400）

2.4 重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP治療對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影響

經(jīng)TUNEL染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP高劑量治療組凋亡率為（31.4± 4.5）%，Ad－PTEN－EGFP低劑量治療組凋亡率為（20.8±4.2）%，兩個(gè)治療組均明顯高于PBS組（4.4±1.7）%、Ad－EGFP組（5.8±1.8）%（P＜0.01），且高劑量治療組與低劑量組比較，凋亡率也明顯增高（P＜0.05）。見圖2。

圖2 各組裸鼠腫瘤TUNEL法檢測(cè)凋亡（×400）Fig.2 Detection of apoptosis of tumor cells in nude mice by TUNEL method（×400）

2.5 PTEN對(duì)裸鼠腫瘤組織中Survivin、NF－κB、PI3K表達(dá)的影響

檢測(cè)PTEN基因表達(dá)是否影響Survivin、NF－κB、PI3K在腫瘤組織中的表達(dá)，以及對(duì)上述指標(biāo)的表達(dá)是否具有相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高劑量和低劑量治療組PTEN基因表達(dá)明顯升高（均P＜0.01），腫瘤組織中Survivin、NF－κB、PI3 K表達(dá)明顯下降（均P＜0.01），且高劑量治療組各指標(biāo)均明顯低于低劑量治療組（均P＜0.05）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PTEN與Survivin、NF－κB、PI3K表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性（均P＜0.05），見表2，圖3～6。

表2 重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP對(duì)裸鼠腫瘤組織Survivin、NF－κB、PI3K表達(dá)的影響（%，ˉx±s）Table 2 The influence of recombinant adenovirus Ad－PTEN－EGFP on expression of Survivin，NF－κB and PI3K in tumor tissues of nude mice（%，ˉx±s）

圖3 各組裸鼠腫瘤SP法檢測(cè)PTEN（SP，×400）Fig.3 Detection of PTEN in tumor tissues of nude mice by SP method（SP staining，×400）

圖4 各組裸鼠腫瘤SP法檢測(cè)Survivin（SP，×400）Fig.4 Detection of survivin in tumor tissues of nude mice by SP method（SP staining，×400）

圖5 各組裸鼠腫瘤SP法檢測(cè)NF－κB（SP，×400）Fig.5 Detection of NF－κB in tumor tissues of nude mice by SP method（SP staining，×400）

圖6 各組裸鼠腫瘤SP法檢測(cè)PI3K（SP，×400）Fig.6 Detection of PI3K in tumor tissues of nude mice by SP method（SP staining，×400）

3 討論

肺癌是威脅人類健康的主要惡性腫瘤之一，在世界范圍內(nèi)肺癌死亡率呈上升趨勢(shì)。如何建立可靠而且穩(wěn)定的肺腺癌動(dòng)物模型，這是進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)及開展新療法的基礎(chǔ)。通過(guò)參考以往的國(guó)內(nèi)外研究，本實(shí)驗(yàn)采用A549肺腺癌細(xì)胞注射裸鼠建立肺腺癌動(dòng)物模型。

在過(guò)去十年中，人們已經(jīng)研究了大量的有關(guān)細(xì)胞凋亡作用機(jī)制，及其在腫瘤發(fā)生中的作用。通過(guò)對(duì)細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制，腫瘤細(xì)胞逃避細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，以及腫瘤細(xì)胞抗藥性機(jī)制的大量研究，促進(jìn)了腫瘤靶向治療的深入發(fā)展。通過(guò)TUNEL染色，本研究證實(shí):與其它兩組比較，含PTEN基因的重組腺病毒治療組中，腫瘤組織的凋亡細(xì)胞呈明顯增加（P＜0.01）；且與低劑量組比較，高劑量組腫瘤組織的凋亡細(xì)胞也明顯增加（P＜0.05）。

Survivin是目前科研人員能夠克隆出的分子量最小的IAP家族成員，與凋亡抑制因子Bcl－2蛋白的組織結(jié)構(gòu)不同，它僅僅由1個(gè)阻斷細(xì)胞凋亡的分子組成，但是它抑制細(xì)胞凋亡的生理作用卻大大超過(guò)Bcl－2家族的作用［79］。Survivin抗凋亡作用已被大量的研究結(jié)果所證實(shí)，它不僅通過(guò)阻斷線粒體細(xì)胞色素C在體內(nèi)的釋放，還與下游凋亡效應(yīng)因子Caspase－3和Caspase－7相結(jié)合，進(jìn)而對(duì)其活性產(chǎn)生直接的抑制作用，而且它還能通過(guò)與紡錘體纖維之間的相互結(jié)合，起到間接抑制Caspase對(duì)紡錘體的水解作用，這樣就有利于保護(hù)有絲分裂細(xì)胞器的完整性，從而抑制細(xì)胞發(fā)生凋亡現(xiàn)象［1012］。PTEN則是一種重要的抑癌基因，可通過(guò)PI3K／Akt途徑將Survivin的表達(dá)水平上調(diào)而導(dǎo)致它的失活，使它能夠發(fā)揮抑制腫瘤組織生長(zhǎng)和血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生凋亡的作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞大量增殖，血管快速生長(zhǎng)和保持穩(wěn)定狀態(tài)，這樣更有利于腫瘤組織的生長(zhǎng)和侵襲作用。PTEN基因的失活和Survivin基因的過(guò)表達(dá)都是肺癌發(fā)生發(fā)展和發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵之處，與肺癌的不良生物學(xué)行為和不良預(yù)后有著密切的聯(lián)系。本研究中，Survivin與PTEN表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05），此結(jié)果表明Survivin和PTEN在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中均起著重要的作用。

核轉(zhuǎn)錄因子NF－κB是科研人員在漿細(xì)胞和成熟B細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種蛋白，這種蛋白能與免疫球蛋白κ輕鏈內(nèi)含有增強(qiáng)子的特異性序列相結(jié)合，所以被人們命名為κB［13］。它在真核生物中廣泛存在，屬于一個(gè)多肽亞單位組成的蛋白家族，目前相關(guān)研究結(jié)果認(rèn)為，它與機(jī)體免疫過(guò)程，腫瘤組織的發(fā)生發(fā)展，細(xì)胞發(fā)生凋亡現(xiàn)象以及人類的胚胎發(fā)育等大多數(shù)事件有著十分密切的聯(lián)系。本研究采用免疫組織化學(xué)方法，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織細(xì)胞質(zhì)與胞核中NF－κB的蛋白表達(dá)均為陽(yáng)性，此結(jié)果與國(guó)內(nèi)外報(bào)道一致［1416］，其原因可能是細(xì)胞受到各種因素的刺激作用，誘導(dǎo)了NF－κB在細(xì)胞內(nèi)的活化，NF－κB進(jìn)入細(xì)胞核以后，與細(xì)胞核內(nèi)特定的DNA片段相互結(jié)合。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，NF－κB與PTEN之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示二者可能在肺癌的發(fā)生發(fā)展中有一定的作用。

PI3K則是許多人類生命活動(dòng)中關(guān)鍵的信號(hào)分子，PI3K介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)了細(xì)胞的分裂、分化、凋亡等各種生理活動(dòng)。PI3K是一種胞內(nèi)磷脂酰激酶，被刺激活化以后，可產(chǎn)生位于細(xì)胞質(zhì)膜上的第二信使PI3，PI3與Akt相互結(jié)合以后可以促進(jìn)其發(fā)生激活，從而引起腫瘤細(xì)胞的大量增生［1718］。另外，Bertram等［19］研究也證實(shí)，PI3 K還可能通過(guò)抑制Fas的凋亡過(guò)程而抵抗細(xì)胞的凋亡過(guò)程。人體大部分腫瘤組織內(nèi)都缺乏PTEN基因的表達(dá)。而PTEN可以使PI3K的脂類產(chǎn)物PI－3，4－P2、PI－3，4，5－P3的3位脫磷酸下調(diào)，通過(guò)PI3 K－PKB通路而對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)與存活現(xiàn)象進(jìn)行控制［2021］。在本研究中PI3K和PTEN呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，此結(jié)果提示PTEN基因表達(dá)的缺失促進(jìn)了PI3 K的過(guò)表達(dá)，從而引起PI3K活性的釋放，進(jìn)而激活了下游的Akt，最終刺激細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育和生存信號(hào)在體內(nèi)的傳遞過(guò)程。Lee［22］研究認(rèn)為對(duì)PI3K途徑進(jìn)行有效阻礙可以特異性地抑制NSCLC細(xì)胞的大量增殖。

往腫瘤內(nèi)注射重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP，可以使裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)速度（體積、重量）明顯減慢，本研究發(fā)現(xiàn)，PTEN基因表達(dá)上升可以使腫瘤組織或血清的Survivin、NF－κB、PI3K表達(dá)明顯下調(diào)（均P＜0.01），呈負(fù)相關(guān)性（均P＜0.05），提示本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的含PTEN基因的重組腺病毒Ad－PTEN－EGFP對(duì)肺癌具有潛在的治療價(jià)值，為進(jìn)一步的研究和應(yīng)用奠定了良好的基礎(chǔ)。

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（2014－09－23 收稿）

Anti－tumor Effect of Recombinant Adenovirus Ad－PTEN－EGFP

Chen Zhixiong1，Huang Qiong2，Tao Lin1et al
1Department of Geriatrics，2Department of Ophthalmology，Renmin Hospital of Wuhan University，Wuhan 430060，China

Objective To determine the efficacy and mechanism of Ad－PTEN－EGFP as therapeutic protocol for lung cancer in vivo in nude mice.Methods The model of lung implantation tumor in nude mice was established.The tumor volume changes were observed after Ad－PTEN－EGFP was injected to the nude mice，then the routine pathological examination，situ apoptosis staining and immunohistochemical staining of tumor tissue were performed.The levels of genes in tumor tissues of nude mice were determined after treatment.Results As compared with the control group，the growth rate of tumor and tumor size in treatment group was significantly decreased（P＜0.05）in a dose－dependent manner.The apoptotic cells in the treatment group were significantly increased by situ apoptosis staining of tumor tissues（P＜0.05）in a dose－dependent manner.In addition，the levels of Survivin，NF－κB and PI3 K were significantly decreased in tumor tissues and serum after treatment（P＜0.05）in a dosedependent manner.Conclusion Ad－PTEN－EGFP can significantly inhibit the growth of tumor tissues，which is related with promoting apoptosis of tumor cell gene and regulating relevant gene expression.

lung carcinoma； gene therapy； PTEN gene； adenovirus

R734.2

10.3870／j.issn.1672－0741.2015.04.005

＊湖北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.2012FKB04450）

陳志雄，男，1970年生，副主任醫(yī)師，E－mail:191902185＠qq.com