木犀草素和蘆丁組合物對帕金森病模型小鼠的防治作用*

何國榮，成銀霞，穆鑫，王月華，孫嵐，方蓮花，杜冠華

(中國醫(yī)學科學院、北京協(xié)和醫(yī)學院藥物研究所“藥物靶點研究與新藥篩選”北京市重點實驗室，北京 100050)

·中藥與天然藥物專欄·

木犀草素和蘆丁組合物對帕金森病模型小鼠的防治作用*

何國榮，成銀霞，穆鑫，王月華，孫嵐，方蓮花，杜冠華

(中國醫(yī)學科學院、北京協(xié)和醫(yī)學院藥物研究所“藥物靶點研究與新藥篩選”北京市重點實驗室，北京 100050)

目的 探討木犀草素和蘆丁組合物(MLR)對帕金森病(PD)模型小鼠的治療作用及其機制。方法 C57BL/6 小鼠72只，隨機分為 6組(n=12)，分別為正常對照組，模型對照組，美多巴組(50 mg·kg-1)和MLR小、中、大劑量組(140，280，560 mg·kg-1)。小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)30 mg·kg-1，建立亞急性 PD模型。采用爬桿實驗和懸掛實驗評價小鼠肢體運動協(xié)調能力和體力；免疫組織化學法檢測小鼠 MPTP 損傷通路中酪氨酸羥化酶(TH)陽性神經元數(shù)、多巴胺轉運體(DAT)、膠質源性纖維蛋白(GFAP)；高效液相色譜法檢測中腦神經遞質及其代謝產物含量。結果 MLR 可顯著改善PD模型小鼠運動協(xié)調能力(P<0.01或P<0.05)。MLR (280和560 mg·kg-1)可增加 TH 陽性神經元數(shù)目(可分別達到正常對照組的69.00%和77.95%，P<0.01)和 DAT 陽性神經元數(shù)目(可分別達到正常對照組的68.53%和70.40%，P<0.05)，顯著抑制星形膠質細胞反應性(P<0.01)。MLR 各劑量組腦內單胺遞質紊亂均顯著改善。結論 MLR 可顯著改善 MPTP 致小鼠運動協(xié)調能力損傷，并可能通過調節(jié)腦內遞質水平、抑制炎性反應、減輕神經元損傷發(fā)揮治療 PD 的作用。

木犀草素；蘆丁；帕金森?。簧窠涍f質

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)已成為世界上第二大常見的神經退行性疾病，尚無根治方法，部分患者迅速發(fā)展致殘，嚴重影響生活質量。目前PD 的發(fā)病原因及機制尚不清楚，但與遺傳因素、環(huán)境毒素、氧化應激、興奮性毒性、細胞凋亡、線粒體功能異常等多種因素有關[1]，自由基氧化應激學說雖然不能完全解釋PD 發(fā)病的原因，但與PD 有著密切關系。

20世紀60年代以來，PD 的治療以糾正中樞多巴胺(dopamine，DA)和乙酰膽堿水平的失衡為主[2]。這些治療措施可以有效控制疾病癥狀，提高患者生活質量，但不能從根本上逆轉相關神經系統(tǒng)的變性，而且長期應用會出現(xiàn)明顯的不良反應或不同程度的藥效減退。因此，療效確切、不良反應小的藥物將會有廣闊的市場前景。

筆者[3]早期研究發(fā)現(xiàn)，天然黃酮類化合物木犀草素和蘆丁組合物(mixture of luteolin and rutin，MLR)，能夠劑量依賴性地減輕6-羥基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)誘導的細胞損傷，抑制PD模型大鼠的震顫行為，減輕DA 能神經元損傷和炎性因子的生成、釋放等。

用于PD 研究的各種小鼠模型中，1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridin，MPTP )所致的PD 小鼠模型在神經化學、行為學表現(xiàn)和組織病理學變化與PD 患者的病理表現(xiàn)類似，是應用較廣泛的模型[4]。筆者使用MPTP 制備PD 小鼠模型，觀察MLR 改善動物肢體協(xié)調能力、調節(jié)腦內神經遞質失衡、恢復DA 能神經元功能等方面的抗PD 作用。

1 材料與方法

1.1 動物 C57BL/6 小鼠72只，♂，7～8 周齡，體質量18～ 22 g，購自中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所，合格證號：SCXK(京)2004-0001。動物使用許可證號：SYXK(京)2004-0001。動物飼養(yǎng)在溫度(22±1) ℃、相對濕度55%～ 65%、12 h光照周期的通風干燥環(huán)境中，采用大小鼠維持料1022 飼養(yǎng)。

1.2 試劑與樣品 MLR(美國SYNORx，Inc.生產，批號：s062107，含木犀草素和蘆丁各50%)。美多巴片(上海羅氏制藥有限公司生產，批號：SH 0502)。MPTP、DA、二羥基苯乙酸(dioxyphenylacetic acid，DOPAC)、高香草酸(homovanilic acid，HVA)、5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT ) 和 5-羥吲哚乙酸(5-hydroxyindoleacetic acid，5-HIAA)均購自Sigma-aldrich 公司；酪氨酸羥化酶(trysine hydroxylase，TH)抗體購自Chemicon 公司；多巴胺轉運體(dopamine transporter，DAT)、膠質源性纖維蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)抗體購自Santa Cruz 公司；卵白素-生物素過氧化物酶復合物(avidin biotin-peroxidase complex，ABC)試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine，DAB)顯色劑購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 儀器 小鼠爬桿實驗裝置(XPS-2，中國醫(yī)學科學院藥物研究所)，小鼠懸掛實驗裝置(自制)，冰凍切片機(SM900，美國 Leica 公司)，高速低溫離心機(5810R，美國 Eppendorf 公司)，熒光顯微鏡(X71，日本OLYPUS 公司)，高效液相色譜庫侖電化學分析系統(tǒng)(HPLC-ECD Coulchem Ⅲ，ESA，美國)。

1.4 小鼠分組及模型制備 C57BL/6 小鼠隨機分為 6 組，每組 12 只，分別為正常對照組、模型對照組、美多巴組(50 mg·kg-1)和MLR 小劑量(140 mg·kg-1)組、MLR中劑量(280 mg·kg-1)組、MLR大劑量(560 mg·kg-1)組。適應環(huán)境1周后，連續(xù)灌胃給藥 7 d，正常對照組與模型對照組小鼠灌胃給予純化水；第 8 天開始，于每天灌胃給藥 45 min 后除正常對照組給予等體積0.9% 氯化鈉溶液外，其余各組均腹腔注射MPTP(30 mg·kg-1)，連續(xù) 5 d。在每次注射MPTP 后立即觀察小鼠的各種急性表現(xiàn)，進行行為學檢測。

1.5 爬桿實驗 采用XPS-2小鼠爬桿實驗裝置，引導小鼠從桿頂爬到桿底，每只訓練4次，記錄小鼠爬到桿底所需要的時間，超過60 s 的以60 s 計。在末次腹腔注射MPTP 后1 h ，再次測定其爬桿時間，每只小鼠測3次取平均值。衡量小鼠因MPTP 引起肢體協(xié)調能力下降程度。

1.6 懸掛實驗 將受試小鼠兩前爪懸掛于一根水平金屬線上(直徑1 mm，距地面30 cm)停留10 s，每天2次。于小鼠末次腹腔注射MPTP 后 1.5 h 進行測試。小鼠懸掛能力評分標準：在前10 s內，小鼠用2個后爪抓住金屬線記3分，用1個后爪抓住金屬線記2分，2個后爪均抓不住金屬線記1分，最后計算得分情況并記錄小鼠從金屬線上掉下的時間，超過60 s 以60 s 計。

1.7 免疫組織化學檢測 每組取 5 只小鼠，10% 水合氯醛(300 mg·kg-1)腹腔注射麻醉，開胸主動脈插管，灌注0.9% 氯化鈉溶液200 mL 至流出液澄清，換用4% 多聚甲醛溶液(0.1 mol·L-1磷酸鹽緩沖液配制，pH7.2～7.4)繼續(xù)灌注約200 mL，至大鼠全身僵硬，肝臟發(fā)白為止。灌注結束后室溫放置30 min，取腦置上述固定液中繼續(xù)固定24 h，換用含30% 蔗糖的4%多聚甲醛溶液，組織下沉后再次更換蔗糖多聚甲醛溶液，4 ℃ 保存。

取大鼠腦作連續(xù)冠狀切片，片厚20 μm。切片與一抗稀釋液(TH，1：500；DAT，1：200；GFAP，1：400)4 ℃ 孵育過夜；然后分別與生物素標記的二抗(1：300)反應1 h以及ABC反應2 h，最后用含有DAB的緩沖液呈色。神經元計數(shù)方法：隨機選取每只小鼠腦切片3 張，分別在左側和右側黑質陽性細胞密集區(qū)中央部分取4 個互不重疊的高倍視野，累計左側和右側黑質的免疫反應陽性神經元數(shù)目并計算其均數(shù)。

1.8 紋狀體神經遞質測定 末次行為學實驗結束后，每組取 5 只小鼠斷頭取腦，冰上快速分離出紋狀體，迅速置于液氮中冷凍固化，稱質量。紋狀體組織加入勻漿液200 μL，經超聲破碎(200 W，50 s)，12 000 r·min-1、4 ℃離心30 min，取上清液，使用孔徑0.22 μm 微孔濾膜濾過后直接注入HPLC-ECD 系統(tǒng)檢測分析。

單胺類神經遞質應用反相HPLC-ECD 測定，色譜柱：CAPCELL PAK C18MG (3 mm×75 mm，3 μm)。流動相(pH 3.25)由0.1 mol·L-1磷酸二氫鈉(NaH2-PO4)溶液、0.85 mmol·L-1辛基硫酸鈉(octyl-sulfate sodium salt，OSA)、0.5 mmol·L-1乙二胺四乙酸二鈉(EDTA·Na2)和 11%甲醇組成，流速1.0 mL·min-1。電化學檢測工作電壓150 mV，檢測溫度為35 ℃。

2 結果

2.2 MLR對PD模型小鼠懸掛行為的影響 與正常對照組比較，模型對照組小鼠的懸掛能力明顯降低，表現(xiàn)為懸掛評分顯著下降(P<0.01)，懸掛時間明顯縮短(P<0.05)。與模型對照組比較，MLR中、大劑量組懸掛評分顯著提高(P<0.05)，MLR中、大劑量組懸掛時間顯著延長(P<0.05或P<0.01)(圖2)。

2.3 免疫組織化學分析

2.3.1 MLR對PD模型小鼠黑質TH表達的影響 正常對照組小鼠黑質TH免疫陽性神經元大量表達，細胞質染色較深，呈棕黃色，可見免疫陽性突起。模型對照組TH免疫陽性神經元表達明顯減少(P<0.01)，是正常對照組小鼠黑質TH陽性神經元數(shù)目的32.64%。 MLR 中、大劑量組TH陽性神經元數(shù)目明顯增加(P<0.01)，分別為正常對照組小鼠黑質TH陽性神經元數(shù)目的69.00% 和77.95%(圖3)。

A.正常對照組；B.模型對照組；C.美多巴組；D.MLR 小劑量組；E.MLR中劑量組；F.MLR大劑量組；與正常對照組比較，t=2.899 ，*1P<0.01；與模型對照組比較，t=2.933，*2P<0.01，t=2.826，*3P<0.05，t=2.892，*4P<0.01，t=3.668，*5P<0.01

圖1 6組小鼠爬竿時間比較

A.normal control group；B.model control group; C.madopa group; D.low-dose MLR group；E.middle-dose MLR group；F. high -dose MLR group；Compared with normal control group，t=2.899，*1P<0.01; compared with model control group，t=2.933，*2P<0.01，t=2.826，*3P<0.05，t=2.892，*4P<0.01，t=3.668，*5P<0.01

Fig.1 Comparison of climbing pole time among six groups of mice

2.3.2 MLR對PD模型小鼠黑質DAT表達的影響 DAT主要位于神經元軸突和末梢的質膜上，能夠反映黑質-紋狀體通路DA 能神經元的數(shù)量及功能。與正常對照組比較，模型對照組DAT免疫陽性神經元的數(shù)目顯著減少(P<0.01)，是正常對照組小鼠黑質DAT陽性神經元數(shù)目的47.45%。采用美多巴和MLR 中、大劑量治療后，DAT 陽性神經元數(shù)目均明顯增加(均P<0.05)，分別是正常對照組小鼠黑質DAT 陽性神經元數(shù)目的66.50%，68.53%和70.40%(圖4)。

2.3.3 MLR對PD模型小鼠黑質GFAP表達的影響 腹腔注射MPTP連續(xù)5 d后，模型對照組小鼠黑質可見大量散在分布的GFAP 免疫陽性星形膠質細胞，是正常對照組小鼠黑質GFAP免疫陽性星形膠質細胞數(shù)目的265.34%(P<0.01)。采用美多巴和MLR預處理可顯著降低GFAP免疫陽性星形膠質細胞的數(shù)目(P<0.01)，黑質GFAP免疫陽性星形膠質細胞數(shù)分別是模型對照組的82.42%，82.06%，69.64%，73.17%(圖5)。

A.正常對照組；B.模型對照組；C.美多巴組；D.MLR 小劑量組；E.MLR中劑量組；F.MLR大劑量組；與正常對照組比較，t=5.014，*1P<0.01，t=3.062，*4P<0.01；與模型對照組比較，t=2.803，*2P<0.05，t=2.803，*3P<0.05，t=2.255，*5P<0.05，t=3.062，*6P<0.01

圖2 6組小鼠懸掛評分和懸掛時間比較

A.normal control group；B.model control group; C.madopa group; D.low-dose MLR group；E.middle-dose MLR group；F.high-dose MLR group；Compared with normal control group，t=5.014，*1P<0.01，t=3.062，*4P<0.01；compared with model control group，t=2.803，*2P<0.05，t=2.803，*3P<0.05，t=2.255，*5P<0.05，t=3.062，*6P<0.01

Fig.2 Comparison of traction score and time among six groups of mice

A.正常對照組；B.模型對照組；C.美多巴組；D.MLR 小劑量組；E.MLR中劑量組；F.MLR大劑量組；與正常對照組比較，t=6.298，*1P<0.01；與模型對照組比較，t=3.264，*2P<0.01，t=3.137，*3P<0.01

圖3 6組小鼠黑質TH免疫陽性神經元數(shù)量比較

A.normal control group；B.model control group; C.Madopa group; D.low-dose MLR group；E.middle-dose MLR group；F.high -dose MLR group；Compared with normal control group，t=6.298，*1P<0.01; compared with model control group，t=3.264，*2P<0.01，t=3.137，*3P<0.01

Fig.3 Comparison of numbers of immunostain-positive TH in substantia nigra among six groups of mice

2.4 MLR對PD模型小鼠紋狀體神經遞質水平的影響

2.4.1 MLR對PD模型小鼠紋狀體DA及其代謝產物水平的影響 腹腔注射MPTP連續(xù)5 d后，與正常對照組比較，模型對照組小鼠紋狀體中的DA 及其代謝產物DOPAC、HVA 含量均顯著下降(P<0.01)。與模型對照組比較，用MLR 治療后，中、小劑量組DA有升高趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，大劑量組DA、 HVA 含量顯著增加(P<0.05或P<0.01)，DOPAC 的含量均無明顯變化(圖6)。

2.4.2 MLR對PD模型小鼠紋狀體5-HT及其代謝產物水平的影響 與正常對照組比較，模型對照組小鼠紋狀體中的5-HT 含量顯著下降(P<0.05)，5-HIAA 的含量則沒有顯著變化。MLR 治療后，紋狀體中5-HT、5-HIAA的含量顯著增加(P<0.05或P<0.01)，但陽性藥美多巴則對MPTP造成的5-HT代謝紊亂沒有明顯影響(圖7)。

A.正常對照組；B.模型對照組；C.美多巴組；D.MLR 小劑量組；E.MLR中劑量組；F.MLR大劑量組；與正常對照組比較，t=4.712，*1P<0.01；與模型對照組比較，t=2.418，*2P<0.05，t=2.718，*3P<0.05，t=2.566，*4P<0.05

圖4 6組小鼠黑質DAT免疫陽性神經元數(shù)量比較

A.normal control group；B.model control group; C.Madopa group; D.low-dose MLR group；E.middle-dose MLR group；F.high -dose MLR group；Compared with normal control group，t=4.712，*1P<0.01; compared with model control group，t=2.418，*2P<0.05，t=2.718，*3P<0.05，t=2.566，*4P<0.05

Fig.4 Comparison of numbers of immunostain-positive DAT in substantia nigra among six groups of mice

A.正常對照組；B.模型對照組；C.美多巴組；D.MLR 小劑量組；E.MLR中劑量組；F.MLR大劑量組；與正常對照組比較，t=10.860，*1P<0.01；與模型對照組比較，t=3.361，*2P<0.01，t=3.309，*3P<0.01，t=4.602，*4P<0.01,t=4.570，*5P<0.01

圖5 6組小鼠黑質GFAP免疫陽性星形膠質細胞數(shù)量比較

A.normal control group；B.model control group; C.madopa group; D.low-dose MLR group；E.middle-dose MLR group；F.high -dose MLR group；Compared with normal control group，t=10.860，*1P<0.01; compared with model conrol group，t=3.361，*2P<0.01，t=3.309，*3P<0.01，t=4.602，*4P<0.01,t=4.570，*5P<0.01

Fig.5 Comparison of astrocyte numbers of immunostain-positive GFAP in substantia nigra among six groups of mice

A.正常對照組；B.模型對照組；C.美多巴組；D.MLR 小劑量組；E.MLR中劑量組；F.MLR大劑量組；與正常對照組比較，t=11.519，*1P<0.01，t=12.198，*4P<0.01，t=5.884，*6P<0.01；與模型對照組比較，t=6.103，*2P<0.01，t=2.582，*3P<0.05，t=10.502，*5P<0.01，t=7.080，*7P<0.01，t=3.201，*8P<0.01，t=3.754，*9P<0.01，t=5.452，*10P<0.01

圖6 6組小鼠紋狀體內DA 、DOPAC 和 HVA含量比較

A.normal control group；B.model control group; C.madopa group; D.low-dose MLR group；E.middle-dose MLR group；F.high -dose MLR group；Compared with normal control group，t=11.519，*1P<0.01，t=12.198，*4P<0.01，t=5.884，*6P<0.01; compared with model control group，t=6.103，*2P<0.01，t=2.582，*3P<0.05，t=10.502，*5P<0.01，t=7.080，*7P<0.01，t=3.201，*8P<0.01，t=3.754，*9P<0.01，t=5.452，*10P<0.01

Fig.6 Comparison of the contents of DA，DOPAC and HVA in striatum of six groups of mice

A.正常對照組；B.模型對照組；C.美多巴組；D.MLR 小劑量組；E.MLR中劑量組；F.MLR大劑量組；與正常對照組比較，t=3.094，*1P<0.05；與模型對照組比較，t=3.729，*2P<0.01，t=4.516，*3P<0.01，t=5.381，*4P<0.01，t=3.291，*5P<0.05，t=4.706，*6P<0.01，t=4.158，*7P<0.01

圖7 6組小鼠紋狀體內5-HT和5-HIAA含量比較

A.normal control group；B.model control group; C.madopa group; D.low-dose MLR group；E.middle-dose MLR group；F.high-dose MLR group；Compared with normal control group，t=3.094，*1P<0.01; compared with model control group，t=3.729，*2P<0.01，t=4.516，*3P<0.01，t=5.381，*4P<0.01，t=3.291，*5P<0.05，t=4.706，*6P<0.01，t=4.158，*7P<0.01

Fig.7 Comparison of the contents of 5-HT and 5-HIAA in striatum of six groups of mice

3 討論

MPTP是制備PD 模型的常用工具藥，不同的給藥方法和劑量導致的動物行為學變化也有不同[5- 6]。本實驗采用亞急性多次給藥方法，模型動物出現(xiàn)明顯的運動協(xié)調能力障礙。對于PD患者，除了靜止性震顫外，肢體運動協(xié)調能力降低以姿勢平衡障礙為主要特征，因此，對協(xié)調能力的改善是考察藥物有效性的重要標準[7]。筆者應用爬桿實驗和懸掛實驗評價動物運動協(xié)調能力，并以爬桿時間、懸掛能力評分和懸掛時間作為衡量指標。結果顯示，MPTP 損傷后，模型對照組爬桿時間顯著延長、懸掛能力評分明顯降低、懸掛時間明顯縮短，表明小鼠肢體運動協(xié)調能力嚴重受損。給予MLR治療后，小鼠爬桿時間和懸掛時間顯著縮短。

星形膠質細胞過度激活和增生與神經元變性死亡密切相關[8-10]。本研究結果表明，模型對照組GFAP 陽性細胞胞體較正常對照組的星形膠質細胞大，突起增多，顏色加深，免疫反應呈中強陽性，這與其他文獻報道的研究結果一致[11]，MLR 各給藥組均顯示出抑制星形膠質細胞活化和增生的作用。

MLR可劑量依賴性抑制TH 神經元的丟失，具有一定的神經元保護作用；MLR 預防給藥可降低MPTP 的神經毒性，調節(jié)GFAP免疫陽性細胞與TH免疫陽性細胞比例，與調節(jié)DA能神經元死亡有一定關系[12]。黑質紋狀體中DAT的mRNA 水平和蛋白水平的降低與病程有密切關系[13-14]。本研究結果顯示，美多巴和MLR預防治療可不同程度增加DAT 陽性神經元數(shù)量。

PD最顯著的生物化學特征是腦內DA 含量減少，其含量與黑質致密區(qū)DA 能神經元的喪失密切相關[15]。本研究表明，MPTP 損傷后，模型對照組小鼠紋狀體中的DA 含量明顯降低，這是出現(xiàn)PD 癥狀主要原因。HVA 反映 DA 轉化總量，MPTP 損傷后HVA 的水平明顯下降，但下降的幅度不如DA，因此HVA/DA的比值增加，這與以往報道相一致[15]。MLR 治療后HVA/DA 比值明顯下降，提示MLR 可能會通過降低DA 的轉化率來發(fā)揮作用。黑質-紋狀體通路中5-HT 含量豐富，是與PD密切相關的遞質之一，5-HT 能神經元功能與也與PD密切相關[16]。MLR 治療可顯著增加5-HT 的含量，提示MLR 對PD 非運動功能障礙也具有一定防治效果。

綜上所述，MLR 通過提高DA 和5-HT 水平、抑制MPTP 造成的DA 和5-HT 過度代謝及轉化、抑制星形膠質細胞活化和增生、保護DA 能神經元發(fā)揮對PD 模型小鼠的治療作用，改善動物肢體運動協(xié)調能力，提示MLR 具有臨床治療PD 應用前景。

志謝：感謝Thomas P.Lahey先生和SYNORx，Inc公司提供實驗樣品及在研究過程中給予的幫助。

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DOI 10.3870/yydb.2015.05.004

Therapeutic Effect of the Mixture of Luteolin and Rutin in MPTP Induced Mouse Model of Parkinson's Disease

HE Guorong, CHENG Yinxia, MU Xin, WANG Yuehua, SUN Lan, FANG Lianhua, DU Guanhua

(BeijingKeyLaboratoryofDrugTargetsIdentificationandDrugScreening,InstituteofMateriaMedica,ChineseAcademyofMedicalSciences&PekingUnionMedicalCollege,Beijing100050,China)

Objective To study the therapeutic effect of the complex mixture of luteolin and rutin (MLR) on 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridin (MPTP) induced Parkinson’s disease (PD) mouse model. Methods Seventy-two C57BL/6 mice were divided into six groups randomly (n=12 in each group): the normal control , model control , madopar (50 mg·kg-1) group, MLR at low (140 mg·kg-1), middle (280 mg·kg-1) and high (560 mg·kg-1) dose groups. PD mouse models were established by intraperitoneal injection of MPTP (30 mg·kg-1).Pole test and traction performance were recorded to access the body coordinate capability and strength. The tyrosine hydroxylase (TH), dopamine transport protein (DAT), and glial fibrillary acidic protein (GFAP) positive cells were detected by immunohistochemical method. Dopamine (DA), dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC), homovanilic acid (HVA), 5-hydroxytryptamine (5-HT) and 5-hydroxyindoleacetic acid (5-HIAA) in striatum were quantified by HPLC-ECD. Results MLR significantly ameliorated mouse motor coordination ability (P<0.01 orP<0.05). MLR at 280 and 560 mg·kg-1could increase TH-positive neurons by 69.00% and 77.95% compared with the normal control group (P<0.01) and DAT-positive neurons by 68.53% and 70.40% compared with the normal control group(P<0.05), and decrease GFAP-postive astrocyte reactivity. The treatment with MLR at three doses attenuated the monoamine neurotransmitter disorder. Conclusion MLR markedly improves MPTP caused movement coordinate disability in mice and exerts therapeutic action on PD by regulating neurotransmitters in brain, inhibiting the inflammatory reaction and alleviating the neuron injury.

Luteolin; Rutin; Parkinson’s disease; Neurotransmitters

2015-01-19

2015-03-03

*國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項“十二五”課題(2013ZX09102106，2013ZX09508104，2012ZX09103-101-078)；國家自然科學基金資助項目(81473383)

何國榮(1974-)，女，山西太原人，助理研究員，博士，從事新藥發(fā)現(xiàn)與神經藥理學研究。電話：010-63165184，E-mail：hegr@imm.ac.cn。

杜冠華(1956-)，男，山東滕州人，研究員，博士生導師，博士，從事新藥發(fā)現(xiàn)、高通量藥物篩選、神經藥理學和心腦血管藥理學研究。電話：010-63165184，E-mail：dugh@imm.ac.cn。

R286；R971

A

1004-0781(2015)05-0578-07