靈芝孢子粉抑制人卵巢癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的體外研究

王衛(wèi)霄 姚苗苗 呂艷茹 杜曉欣 張曉靜 趙素芬

·論著·

靈芝孢子粉抑制人卵巢癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的體外研究

王衛(wèi)霄 姚苗苗 呂艷茹 杜曉欣 張曉靜 趙素芬

目的研究靈芝孢子粉對(duì)人卵巢癌OV2008細(xì)胞增殖及凋亡的影響，并探討其作用機(jī)制。方法采用WST-1比色法及顯微鏡觀察法研究靈芝孢子粉對(duì)OV2008細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用及細(xì)胞形態(tài)的改變;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布情況;Hoechst-33258染色方法評(píng)估細(xì)胞凋亡并采用western blot方法測(cè)定凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果WST結(jié)果表明靈芝孢子粉可以抑制OV2008細(xì)胞的生長(zhǎng)，并呈劑量和時(shí)間依賴性;流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果提示靈芝孢子粉可使卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)阻滯于G1期。Hoechst-33258染色結(jié)果顯示靈芝孢子處理細(xì)胞后可以檢測(cè)出凋亡細(xì)胞。Western blot方法檢測(cè)到凋亡抑制蛋白bcl-2、bcl-xl隨靈芝孢子濃度增加而下降，而促凋亡蛋白bax及P27、casep具有抑制卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡的作用，其機(jī)制是作用于細(xì)胞周期的ase-3逐漸升高。結(jié)論靈芝孢子粉可以抑制卵巢細(xì)胞生長(zhǎng)，使細(xì)胞生長(zhǎng)阻滯于G1期，并可以通過(guò)上調(diào)bax、P27，下調(diào)bcl-2并活化casepase-3而發(fā)揮其作用。

靈芝孢子粉;卵巢腫瘤;增殖;凋亡;細(xì)胞周期

卵巢癌是婦科常見(jiàn)惡性腫瘤之一，其治療以手術(shù)和化療為主。隨著治療手段的提高，患者的生存率和生活質(zhì)量也得到了一定程度的提高，但由于治療效果仍不十分理想，其病死率仍居?jì)D科惡性腫瘤之首。因此尋求有效的治療方法仍然是卵巢癌的研究焦點(diǎn)。目前中藥作為卵巢癌輔助治療手段之一越來(lái)越受到重視。靈芝孢子在我國(guó)及其他亞洲國(guó)家已被公認(rèn)為治療

多種疾病的中藥，并且已有大量應(yīng)用靈芝孢子治療各種腫瘤的研究報(bào)道［1-3］。本研究觀察了在不同藥物濃度下靈芝孢子對(duì)體外培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞增殖與凋亡的影響，探討其對(duì)人卵巢癌OV2008細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的機(jī)制，為其在卵巢癌的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器:NU2600E型CO2培養(yǎng)箱(ESBE Scientific MC017A1C);超凈工作臺(tái)(Microzone coinporation F40BX/SPZ41);EL340酶標(biāo)儀(Bio.TEK INSTRUMENTSINS);倒置相差電子顯微鏡(ZEISS AXIOVERT25);熒光顯微鏡(NIKON TE2000-U);水浴箱(Fisher Scientific ISOTEMP 210);離心機(jī)(SheltonScientific CENTRA CL2);流式細(xì)胞儀(BD FACS caliber:BD BIOsciences E97600092)。

1.1.2 試劑與藥品:靈芝孢子粉由加拿大energene天然藥品有限公司提供，批號(hào)為083668。WST-1/ECS溶液為Roche公司產(chǎn)品;RPMI 1640培養(yǎng)基為Fisher Scientific公司產(chǎn)品、新生小牛血清、Hoechst 33258為Invitrogen公司產(chǎn)品;青鏈霉素(含10 000 U青霉素及10 000微克鏈霉素)為Invitrogen公司產(chǎn)品，批號(hào)為15140-148。臺(tái)盼蘭(Trypan blue)EMD公司產(chǎn)品，批號(hào)EM8721-0;Trypsin、碘化丙啶(PI)、核糖核酸酶A (RnaseA)多聚甲醛溶液(Paraformaldehyde)、為Sigma公司產(chǎn)品;Bax、bcl-2、cleaved-casepase3抗體為cell signaling Technology公司產(chǎn)品;p27Kip1抗體為BD Bioscience產(chǎn)品?？故蠹翱雇枚官?gòu)于Fisher Scientific公司。ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒及感光膠片為GE公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞來(lái)源及培養(yǎng):人卵巢癌細(xì)胞系OV2008為完成該實(shí)驗(yàn)的加拿大york大學(xué)生命科學(xué)系chun peng實(shí)驗(yàn)室保存。用含10%胎牛血清(Sigma公司產(chǎn)品)、1%青霉素鏈霉素(Invitrogen公司產(chǎn)品)的RPMI 1640培養(yǎng)基(Thermo公司產(chǎn)品)，在37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.2 靈芝孢子粉工作液配制:靈芝孢子粉由加拿大energene天然藥品有限公司提供。將靈芝孢子粉500 mg溶于10 ml DD-H2O中配制成50 mg/ml的靈芝孢子液，高溫滅菌、促溶，靜置或離心后取上清，用0.20 μm微孔濾膜過(guò)濾器過(guò)濾除菌，即刻用于實(shí)驗(yàn)或作為儲(chǔ)存液密封置于4℃冰箱，保存2周，再次使用前70℃孵育10 min。

1.2.3 WST-1法檢測(cè)靈芝孢子粉對(duì)人卵巢癌細(xì)胞增殖的抑制作用:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的OV2008細(xì)胞，0.2% Trypsin消化后，以每孔4 000個(gè)細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)過(guò)夜后試驗(yàn)組分別加入濃度為0.1、0.5、1、2、2.5 mg/ml的靈芝孢子液，每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，對(duì)照組5個(gè)孔同時(shí)更換培養(yǎng)液，分別于24、48 h進(jìn)行比色檢測(cè)細(xì)胞活力。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)于每一時(shí)間點(diǎn)每孔中加入10 μl WST-1/ECS溶液，培養(yǎng)箱培養(yǎng)30 min，充分振蕩1 min，酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)為450 nmOD值，計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率，細(xì)胞抑制率=1-試驗(yàn)組平均OD值/對(duì)照組平均OD值×100%。IC50用Logit法計(jì)算。

1.2.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)靈芝孢子對(duì)人卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用:OV20008細(xì)胞消化后以每孔10×104個(gè)細(xì)胞接種于12孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)過(guò)夜后試驗(yàn)組分別加入濃度為0.1、0.5、1、2 mg/ml的靈芝孢子液，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，對(duì)照組3個(gè)孔加入不含藥物的培養(yǎng)液。48 h顯微鏡下拍照各組細(xì)胞形態(tài)，之后收獲細(xì)胞，消化細(xì)胞后以1∶1比例與臺(tái)盼蘭混合，光學(xué)顯微鏡下死亡細(xì)胞被染成藍(lán)色，而存活細(xì)胞因有完整細(xì)胞膜存在不被染色，鏡下用細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)未染色的活細(xì)胞數(shù)目。

1.2.5 流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定卵巢癌細(xì)胞細(xì)胞周期分布:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的卵巢癌細(xì)胞系OV2008，消化后接種100×104個(gè)細(xì)胞于6 cm細(xì)胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)過(guò)夜后實(shí)驗(yàn)組吸去原培養(yǎng)液，分別置入終濃度為0.5、1、2 mg/ml的靈芝孢子粉溶液，對(duì)照組加入不含藥物的培養(yǎng)液，培養(yǎng)24、48和72 h，收集細(xì)胞。0.2%Trypsin消化后離心，棄去上清液，1×PBS 5 ml洗滌后以70%冷乙醇固定，冰上放置30 min后直接上機(jī)測(cè)定或保存于-20℃冰箱待測(cè)。上機(jī)前離心棄去冰乙醇，PBS洗2次后以預(yù)染溶液(0.2%Triton-100、1 mmol/L EDTA)洗滌一次，加50 μg/ml核糖核酸酶A(RnaseA)及50 μg/ml碘化丙啶(PI)，避光染色60 min，經(jīng)200目尼龍網(wǎng)過(guò)濾后，用流式細(xì)胞儀測(cè)定，計(jì)算出細(xì)胞周期分布情況。

1.2.6 Hoechst-33258染色方法評(píng)估細(xì)胞凋亡:采用Hoechst-33258染色方法評(píng)估細(xì)胞凋亡，接種50×104個(gè)細(xì)胞于6 cm細(xì)胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)過(guò)夜后，以不同濃度靈芝孢子處理細(xì)胞，48 h后對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞分別吸掉培養(yǎng)液，以4%的多聚甲醛溶液(用1×PBS配制)固定細(xì)胞20 min，1×PBS洗滌后以1 μg/ml的Hoechst-33258染色15 min，1×PBS洗滌2次，熒光顯微鏡(NIKON ECLIPSE TE 2000-U)下通過(guò)紫外光觀察細(xì)胞核的改變。

1.2.7 Western blot方法測(cè)定bcl-2和Bax，cleavedcaspase3，P27蛋白表達(dá):人卵巢癌細(xì)胞OV2008以每孔25×104個(gè)細(xì)胞數(shù)接種于6孔板，次日加入相應(yīng)劑量的靈芝孢子粉溶液，對(duì)照組同時(shí)更換培養(yǎng)液，48 h提取總蛋白。細(xì)胞用冷PBS洗滌2次，用50 μl Rapa裂解液(radioimmune precipitation assay buffer)裂解細(xì)胞，冰上30 min后刮取細(xì)胞，以12 000 r/min 4℃離心15 min，收集上清移入新的1.5 ml離心管中，測(cè)定蛋白濃度。取20 μg(cleaved casepase-3取50 μg)蛋白樣品經(jīng)12%SDS-聚丙烯酰胺凝膠(檢測(cè)cleaved casepase-3用15%SDS-聚丙烯酰胺凝膠)90V電壓進(jìn)行電泳分離，之后電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素濾膜(Millipore公司產(chǎn)品)上，用含有50g/L去脂奶粉的TBST (10 mmol/L Tris-Cl(pH值8.0)，150 mmol/L NaCl，0.05%Tween 20)封閉1 h，分別加入抗bcl-2(1∶1 000)，bax(1∶4 000)，cleaved-caspase-3(1∶500)，P27 (1∶1 000)的抗體(cell signaling Technology公司產(chǎn)品) 4℃反應(yīng)過(guò)夜，T-BST漂洗3次，每次10 min。HRP標(biāo)記的抗兔IgG二抗孵育1 h;T-BST漂洗3次，應(yīng)用ECL-plus Western Blot化學(xué)發(fā)光試劑盒顯色檢測(cè)信號(hào)。以β-actin為內(nèi)參照。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用Sigmastat 3.5統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以ˉx±表示，采用t檢驗(yàn)，兩組以上均數(shù)比較應(yīng)用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 靈芝孢子抑制卵巢癌細(xì)胞增殖WST-1比色法顯示，靈芝孢子對(duì)卵巢癌OV2008細(xì)胞具有明顯的生長(zhǎng)抑制作用，柱狀圖顯示活性細(xì)胞較對(duì)照組明顯減少，靈芝孢子作用48 h的IC50為(1.30±0.56)mg/ml。采用不同濃度的靈芝孢子處理接種于12孔培養(yǎng)板的OV2008細(xì)胞48 h，倒置顯微鏡下觀察到細(xì)胞數(shù)目隨濃度增加而減少，高濃度靈芝孢子組可見(jiàn)細(xì)胞脫離培養(yǎng)皿壁成懸浮狀態(tài)，致貼壁存活細(xì)胞數(shù)目極少(圖2A)。圖2B為細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果，提示隨靈芝孢子濃度增加存活細(xì)胞數(shù)目逐漸減少。見(jiàn)圖1、2。

圖1 靈芝孢子對(duì)人卵巢癌0V2008細(xì)胞的增殖抑制作用

圖2 靈芝孢子對(duì)人卵巢癌OV2008細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。A:不同濃度靈芝孢子處理細(xì)胞48 h的顯微鏡下改變(Hoechst-33258染色×4)。B:藥物處理后細(xì)胞數(shù)目的改變

2.2 靈芝孢子對(duì)卵巢癌細(xì)胞周期分布的影響本研究應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)靈芝孢子作用于卵巢癌細(xì)胞后細(xì)胞周期的分布，靈芝孢子處理OV2008細(xì)胞后多數(shù)細(xì)胞聚集于G1期，并且G1期細(xì)胞數(shù)目隨作用時(shí)間延長(zhǎng)而增加。而S期和G2/M期細(xì)胞數(shù)目較少，且G2/ M細(xì)胞隨作用時(shí)間延長(zhǎng)而減少，S期細(xì)胞數(shù)目隨作用時(shí)間無(wú)明顯改變。見(jiàn)圖3。

圖3 靈芝孢子處理人卵巢癌OV2008細(xì)胞不同時(shí)間后細(xì)胞周期分布情況。A:處理組與對(duì)照組細(xì)胞周期比率變化，橫軸代表處理時(shí)間，縱軸代表周期比率;B:流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物處理不同時(shí)間的細(xì)胞周期分布情況

2.3 靈芝孢子誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡為明確靈芝孢子是否通過(guò)凋亡途徑致卵巢癌細(xì)胞死亡，采用Hoechst-33258染色方法檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果顯示靈芝孢子可致卵巢癌細(xì)胞凋亡，并呈劑量依賴性。熒光顯微鏡觀察到典型凋亡細(xì)胞染色后表現(xiàn)為細(xì)胞核縮小，染色質(zhì)濃縮，藥物濃度越大凋亡細(xì)胞越多。見(jiàn)圖4。

圖4 不同濃度靈芝孢子處理細(xì)胞48 h后細(xì)胞凋亡情況(Hoechst-33258染色×4)

2.4 靈芝孢子對(duì)卵巢癌細(xì)胞相關(guān)蛋白的表達(dá)靈芝孢子對(duì)bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的影響:為明確靈芝孢子引起卵巢癌細(xì)胞凋亡的信號(hào)通道，利用靈芝孢子處理后細(xì)胞的蛋白質(zhì)測(cè)定了bcl-2和Bax的表達(dá)情況。結(jié)果表明隨靈芝孢子濃度增加bcl-2蛋白表達(dá)水平降低，而bax蛋白水平升高靈芝孢子對(duì)P 27蛋白表達(dá)的影響:為了闡明靈芝孢子對(duì)卵巢癌細(xì)胞細(xì)胞周期影響的機(jī)制，采用western blot方法測(cè)定了P27的變化。結(jié)果顯示P27蛋白水平隨靈芝孢子濃度增加而增加。靈芝孢子對(duì)Casbase-3蛋白表達(dá)的影響:為了評(píng)估Casbase-3在靈芝孢子引起卵巢癌細(xì)胞凋亡中的作用，檢測(cè)了Casbase-3蛋白在卵巢癌細(xì)胞的表達(dá)情況。Western blot結(jié)果顯示35KD的Casbase-3被激活成活化的19、20 kD的cleaved-casepase3，并隨靈芝孢子濃度增加表達(dá)呈升高趨勢(shì)。見(jiàn)圖5。

圖5 不同濃度靈芝孢子處理人卵巢癌OV2008后相關(guān)蛋白表達(dá)情況

3 討論

靈芝孢子是靈芝生長(zhǎng)成熟期從菌蓋彈射出來(lái)的象淡霧狀的極其微小的孢子，其主要成分有靈芝多糖、三萜類(lèi)化合物、生物堿類(lèi)、多肽及微量元素鋅、鍺、硒等，有其發(fā)揮強(qiáng)大生理功能的重要分子學(xué)基礎(chǔ)。體內(nèi)外研究表明靈芝孢子可以抑制多種腫瘤的生長(zhǎng)［4-6］。并有實(shí)驗(yàn)表明靈芝破壁孢子較完整孢子有更高的生物活性［7］。因此本研究采用破壁的靈芝孢子作為處理因素，用不同濃度的破壁靈芝孢子處理卵巢癌細(xì)胞株OV2008不同時(shí)間，觀察到靈芝孢子可以抑制卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)，使細(xì)胞生長(zhǎng)阻滯于G1期;并能通過(guò)上調(diào)Bax，caspase-3及下調(diào)bcl-2蛋白途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

卵巢癌細(xì)胞OV2008加入不同濃度的靈芝孢子作用48 h可以觀察到細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，表現(xiàn)為細(xì)胞變圓，部分細(xì)胞脫離培養(yǎng)皿呈漂浮狀態(tài)，這種抑制作用呈劑量依賴性，靈芝孢子濃度的增加，對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用增強(qiáng)，半數(shù)抑制濃度為1.0977 mg/ml。通過(guò)DNA特異性結(jié)合的熒光染料Hoechst33258染色觀察到靈芝孢子作用于卵巢癌細(xì)胞后出現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞染色質(zhì)聚集改變。提示靈芝孢子可以通過(guò)周期阻滯和誘導(dǎo)凋亡途徑發(fā)揮增殖抑制作用。

靈芝孢子對(duì)腫瘤細(xì)胞周期的影響有不同的報(bào)道，Zhu等［2］的研究表明靈芝孢子的酒精提取物可以使宮頸癌HeLa細(xì)胞停滯于G1/S期，Hu等［8］在乳腺癌MCF-7細(xì)胞的研究得到同樣的結(jié)果。靈芝孢子的水提取物作用于hepatoma細(xì)胞可以引起細(xì)胞G2/M期捕獲［9］。不同的結(jié)果可能由于不同的提取方法造成提取物成分有所差異所致［10］。本研究結(jié)果提示靈芝孢子作用于OV2008細(xì)胞48 h后，可使細(xì)胞周期的分布發(fā)生明顯變化，使停滯于G1期的細(xì)胞比例明顯增多并隨靈芝孢子作用時(shí)間而逐漸增加。表明靈芝孢子對(duì)OV2008細(xì)胞的增殖抑制作用可能與多數(shù)腫瘤細(xì)胞停滯于G1期，減少了DNA合成和有絲分裂有關(guān)。

P27屬于CKIs類(lèi)蛋白，能廣泛抑制cyclinD/CDK復(fù)合物的活性，使細(xì)胞發(fā)生G1～S期阻滯，從而對(duì)細(xì)胞周期發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用［11，12］。本研究結(jié)果顯示靈芝孢子處理OV2008細(xì)胞后P27蛋白表達(dá)水平隨靈芝孢子濃度增加而逐漸升高，與細(xì)胞周期的變化相一致。推測(cè)靈芝孢子通過(guò)P27調(diào)控細(xì)胞周期。

抑制腫瘤的重要途徑之一是誘導(dǎo)凋亡，bcl-2家族中的bcl-2和Bax是調(diào)控凋亡的重要基因，細(xì)胞中bcl-2可以抑制細(xì)胞凋亡，而bax可以促進(jìn)凋亡［13］，它可以與自身或bcl-2形成二聚體，從而抑制bcl-2活性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡發(fā)生［14］。P27可以通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［15］。本研究中卵巢癌細(xì)胞經(jīng)靈芝孢子處理后Bax、P27蛋白表達(dá)水平升高而bcl-2、bcl-xl表達(dá)水平下降，可能是引起細(xì)胞凋亡的機(jī)制之一。

Casepase家族是凋亡過(guò)程中的效應(yīng)蛋白，活化的casepase-3能通過(guò)蛋白酶的水解進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。其中casepase-3是casepase家族中最重要的凋亡執(zhí)行者，廣泛分布于各種類(lèi)型的細(xì)胞中。Casepase-3在細(xì)胞中是以無(wú)活性的酶原(32 kD)形式存在，活化的Casepase-3(17 kD和19 kD)能促進(jìn)凋亡信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。研究表明，細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵是凋亡下游蛋白casepase-3的激活，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡［16］。靈芝孢子處理OV2008細(xì)胞48 h可產(chǎn)生活化的Casepase-3，并且其表達(dá)水平隨靈芝孢子濃度增大而升高，因而靈芝孢子可能通過(guò)casepase-3的信號(hào)途徑誘導(dǎo)凋亡的發(fā)生，從而發(fā)揮抑瘤效應(yīng)。與Ibrado等［17］研究的抑瘤效應(yīng)機(jī)制相一致。

綜上所述，體外實(shí)驗(yàn)表明靈芝孢子可以抑制卵巢癌OV2008細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡，其誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制可能與Bax、P27的高表達(dá)、bcl-2、bcl-xl的低表達(dá)、激活卵巢癌細(xì)胞中Caspase-3的表達(dá)以及阻滯細(xì)胞周期有關(guān)?？梢詾殪`芝孢子作為卵巢癌的輔助治療提供理論依據(jù)。

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Experimental study on the effect of GLSP on human ovarian cancer cell proliferation and apoptosis in vitro

WANG

Weixiao*，YAO Miaomiao，LV Yanru，et al．*Department of Obstetrics and Gynecology，Gaocheng People’s Hospital，Hebei，Gaocheng 052160，China

ObjectiveTo investigate the effect of Ganoderma lucidum spore powder(GLSP)on cell proliferation and apoptosis of human ovarian cell line-OV 2008，and to explore its action mechanism.MethodsThe effects of GLSP on OV2008 cell growth and cell morphous were detected by WST-1 colorimetric technique and microscopy;cell cycle was analyzed flow cytometry;cell apoptosis was detected by Hoechst-33258 staining method;the expression of apoptosis-related proteins(bcl-2 bax，P27，cleaved Caspase-3)were measured by Western blotting.ResultsThe results of WST-1 assays showed that GLSP could inhibit the growth of OV2008 cells，moreover，which was time and dose dependent.The results by flow cytometry showed that GLSP could block OV2008 cell growth at G1 phase.Hoechst 33258 staining results showed that GLSP could induce cell apoptosis.Western blotting results showed that the expression levels of bcl-2，bcl-xl were decreased with the increase of concentration of GLSP，however bax，P27，Caspase-3 could inhibit the growth of ovarian cancer cells and induce cell apoptosis，and its action mechanism was that the expression levels of Casbase-3 that affected cell cycle were gradually increased. ConclusionGLSP can inhibit the growth of ovarian cancer cells，block cell growth at G1 stage，furthermore，which can develop its effects by up-regulating the expression of bax，P27，down-regulating the expression of bcl-2 and activating Caspase-3.

Ganoderma lucidum spore powder;ovarian neoplasms;proliferation;apoptosis;cell cycle

R 737.31

A

1002-7386(2015)02-0165-05

2014-08-19)

10．3969/j．issn．1002－7386．2015．02．001

項(xiàng)目來(lái)源:河北省專家出國(guó)培訓(xùn)項(xiàng)目資助(編號(hào):200748)

052160河北省藁城市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科(王衛(wèi)霄);河北醫(yī)科大學(xué)(姚苗苗、呂艷茹、杜曉欣、張曉靜);河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院婦產(chǎn)科(趙素芬)

趙素芬，050000河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院婦產(chǎn)科; E-mail:zhaosfchina@hotmail.com