參龜固本酒對(duì)大鼠酒精性肝損傷的作用

王紅英，劉 敏，劉 美，趙麗麗，趙正杭

（1.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥理學(xué)系，陜西西安 710061；2.西安德天藥業(yè)股份有限公司，陜西西安 710119）

參龜固本酒對(duì)大鼠酒精性肝損傷的作用

王紅英1，劉 敏2*，劉 美1，趙麗麗1，趙正杭1

（1.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥理學(xué)系，陜西西安 710061；2.西安德天藥業(yè)股份有限公司，陜西西安 710119）

目的 觀察參龜固本酒對(duì)大鼠酒精性肝損傷的作用。方法 SD大鼠按體質(zhì)量隨即分為3組：鹽水對(duì)照組、白酒對(duì)照組及參龜固本酒組。各組分別灌胃給予生理鹽水、相同酒精量的白酒、參龜固本酒液，每日2次，連續(xù)12周。末次給藥后12 h處死大鼠，采血，取肝組織，測(cè)定肝、脾指數(shù)；檢測(cè)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）活性及總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）含量；檢測(cè)血清及肝組織超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量；觀察肝組織病理學(xué)改變。結(jié)果 連續(xù)灌胃12周后，鹽水對(duì)照組大鼠毛發(fā)、食量、糞便及活動(dòng)等一般情況均無(wú)異常，體質(zhì)量正常增長(zhǎng)，各項(xiàng)生化指標(biāo)均在正常生理值范圍內(nèi)。白酒對(duì)照組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢，與鹽水對(duì)照組比較，雄性大鼠體質(zhì)量明顯減輕（P＜0.05），肝指數(shù)明顯增高（P＜0.01），脾指數(shù)無(wú)明顯變化，血清ALT、AST、ALP活性較對(duì)照組均顯著增加（P＜0.01或P＜0.05），血清SOD、MDA、TP、ALB無(wú)顯著差異，而肝組織中SOD活性顯著降低（P＜0.05），MDA含量明顯升高（P＜0.05）；同時(shí)，肝組織呈現(xiàn)大量大小不等的圓形脂滴空泡，可見點(diǎn)灶壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。參龜固本酒組大鼠體質(zhì)量、肝、脾指數(shù)的變化明顯輕于白酒對(duì)照組，與鹽水對(duì)照組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05）；與白酒對(duì)照組比較，參龜固本酒組大鼠血清ALT、AST、ALP及肝勻漿MDA顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），而肝勻漿SOD顯著增高（P＜0.05）；同時(shí)參龜固本酒組大鼠肝組織可見少量散在的脂滴空泡和炎細(xì)胞。結(jié)論 參龜固本酒對(duì)大鼠肝損傷明顯輕于同酒精量的白酒，其機(jī)制可能與藥酒所含中藥的抗氧化作用有關(guān)。

參龜固本酒；酒精性肝損傷；抗氧化

隨著社會(huì)的發(fā)展，生活節(jié)奏和壓力不斷增大，酗酒者的人數(shù)迅猛增加，已出現(xiàn)低齡化的特點(diǎn)，女性的比例也不斷上升，而長(zhǎng)期大量飲酒可引起機(jī)體多器官、多系統(tǒng)功能障礙以及嚴(yán)重的精神和社會(huì)問(wèn)題。在我國(guó)，每年死于酒精中毒者占總死亡率的1.3%，致殘人數(shù)占總致殘率的3.0%。研究發(fā)現(xiàn)，酒中乙醇對(duì)機(jī)體組織器官有直接毒害作用，而肝臟對(duì)乙醇最敏感，長(zhǎng)期大量飲酒能損傷肝細(xì)胞，干擾肝臟的正常代謝，進(jìn)而可致脂肪肝、酒精性肝炎，是導(dǎo)致肝硬化的最主要原因［1-2］。因此，降低酒精成癮及減輕長(zhǎng)期飲酒對(duì)機(jī)體的危害具有重要的社會(huì)意義。目前，在市面上出現(xiàn)許多藥酒，含有多種中藥成分，有些已作為準(zhǔn)字號(hào)藥品，但大多數(shù)為保健品，它們對(duì)降低酒精成癮或減輕長(zhǎng)期飲酒對(duì)機(jī)體的危害可能有一定的作用，但其作用效果并無(wú)定論。參龜固本酒是由當(dāng)歸、黃芪、黨參、茯苓、五味子、陳皮、防風(fēng)等18種中藥制成的酒劑，具有益氣養(yǎng)血，健脾滋腎，祛濕活絡(luò)作用，主要用于氣血虧虛、肝腎不足所致的精神疲倦，頭昏眼花，失眠健忘，食欲不振，夜尿頻多，腰膝酸軟，關(guān)節(jié)酸痛等病癥。本研究通過(guò)大鼠長(zhǎng)期經(jīng)口服用等劑量的酒精誘發(fā)肝損傷，以觀察參龜固本酒對(duì)大鼠肝臟損傷的作用及其對(duì)肝臟抗氧化功能的影響，為其臨床人群服用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物、試劑及儀器受試品：參龜固本酒（32%），西安德天藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)（批號(hào)：20130901）；對(duì)照品長(zhǎng)安老窖（52%），西安德天藥業(yè)股份有限司提供（批號(hào)：201302021）；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT，批號(hào)：130824）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST，批號(hào)：130205）、堿性磷酸酶（ALP，批號(hào)：130261）、總蛋白（TP，批號(hào)：130161）和白蛋白（ALB，批號(hào)：130181）試劑盒，均由中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)；超氧化物歧化酶（SOD，批號(hào)：20131128）、丙二醛（MDA，批號(hào)：20131128）及考馬斯亮藍(lán)試劑盒（批號(hào)：20131123）均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。Bio-Rad/伯樂(lè)酶標(biāo)儀；CX9全自動(dòng)生化分析儀（BECKMAN公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD品系大白鼠，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)資格證號(hào)：SCXK（陜）2007-001，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（陜）2007-003。體質(zhì)量170～200 g，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)室室溫20～25℃，相對(duì)濕度50%～85%。

1.3 動(dòng)物分組及處理SD大鼠在適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后分為3組：鹽水對(duì)照組（10只）、白酒對(duì)照組及參龜固本酒組（均14只），雌雄各半，分別灌胃（ig）給予相應(yīng)受試物，每日2次，共12周。鹽水對(duì)照組（10 mL/kg生理鹽水）；白酒對(duì)照組：白酒（40%），8 mL/kg；8周后，白酒（52%），8 m L/kg，共4周［以酒精量計(jì)：6.4 m L/（kg·d）×8周+8.32 m L/（kg·d）×4周］。參龜固本酒組：32%原藥酒用32%白酒對(duì)半稀釋，10 m L/kg；8周后，32%原藥酒用52%白酒對(duì)半稀釋，10 m L/kg［以酒精量計(jì)：6.4 m L/（kg·d）×8周+8.4 m L/（kg·d）×4周］。

1.4 觀察指標(biāo)及方法

1.4.1 一般情況及體質(zhì)量 觀察大鼠的一般情況，包括毛發(fā)、活動(dòng)、食便等，每周稱體質(zhì)量，調(diào)整給藥容量及觀察體質(zhì)量增長(zhǎng)情況。

1.4.2 肝、脾指數(shù)的檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束末次給藥禁食12 h后，200 g/L烏拉坦5 m L/kg iv麻醉，取肝、脾，用濾紙吸取殘余血液稱重，計(jì)算各組大鼠的肝、脾指數(shù)（組織濕重×100%/體質(zhì)量）。

1.4.3 血清肝功生化的檢測(cè) 股動(dòng)脈取血分離血清，血清ALT、AST檢測(cè)采用改良賴氏法；ALP采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法，TP采用雙縮脲法檢測(cè)；ALB采用溴甲酚綠法檢測(cè)；SOD采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定；MDA采用TBA法檢測(cè)。

1.4.4 肝組織SOD、MDA的檢測(cè) 動(dòng)物取血后，即刻取出整個(gè)肝臟，稱重，取肝左葉組織約0.2 g，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗后制備成10%的肝勻漿，SOD采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定，MDA采用TBA法檢測(cè)。

1.4.5 病理學(xué)觀察 取肝右葉距肝臟邊緣0.5 cm處組織一小塊，放入100 m L/L甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)處理使用SPSS 18.0軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠的一般情況實(shí)驗(yàn)開始后，白酒對(duì)照組及參龜固本酒組大鼠活動(dòng)減少，有的嗜睡，約1～2 h恢復(fù)正常。鹽水對(duì)照組及各藥酒組大鼠毛發(fā)有光澤、活潑好動(dòng)、食便均未見異常，體質(zhì)量持續(xù)增長(zhǎng)；白酒對(duì)照組大鼠毛發(fā)光澤度較差，行動(dòng)遲緩、食欲減退，易激怒，對(duì)抗白酒刺激強(qiáng)烈；與鹽水對(duì)照組比較，雄性大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，表1）。實(shí)驗(yàn)期間，對(duì)照組大鼠全部存活，白酒組大鼠死亡2只，給藥酒組各死亡1只，尸體解剖發(fā)現(xiàn)均因酒精灌入氣管立即死亡。

2.2 各組大鼠肝、脾指數(shù)的變化與鹽水對(duì)照組比較，白酒對(duì)照組能明顯增大肝指數(shù)（P＜0.01），但對(duì)脾指數(shù)無(wú)明顯影響（P＞0.05）；參龜固本藥酒組對(duì)大鼠肝、脾指數(shù)均無(wú)明顯影響（P＞0.05），與白酒組比較，參龜固本酒組肝指數(shù)明顯降低（P＜0.05），而同鹽水對(duì)照組比較無(wú)明顯差異（P＞0.05，表1）。

表1 參龜固本酒對(duì)大鼠體質(zhì)量及肝、脾指數(shù)的影響Tab.1 Effects of Shen Gui Gu Ben Wine on body weight，liver，spleen indexes of rats（±s）

表1 參龜固本酒對(duì)大鼠體質(zhì)量及肝、脾指數(shù)的影響Tab.1 Effects of Shen Gui Gu Ben Wine on body weight，liver，spleen indexes of rats（±s）

與鹽水對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與白酒組比較，#P＜0.05。

組別動(dòng)物數(shù)體質(zhì)量（g）雌性雄性肝指數(shù)（g/g，%）脾指數(shù)（g/g，%）鹽水對(duì)照組10 270.7±26.6 444.6±25.0 2.56±0.15 0.14±0.03白酒對(duì)照組12 251.6±21.1 395.8±41.3*2.97±0.32**0.15±0.04參龜固本酒組13 272.7±16.5 416.8±36.7 2.73±0.22#0.14±0.03

2.3 各組大鼠血清ALT、AST、ALP、TP、ALB的比較與鹽水對(duì)照組比較，白酒組及參龜固本酒組大鼠TP、ALB含量均無(wú)明顯變化（P＞0.05），但血清ALT、AST均明顯升高（P均＜0.01）；與白酒組比較，參龜固本酒組血清ALT、AST、ALP均降低（P＜0.05，表2）。

表2 參龜固本酒對(duì)大鼠血清TP、ALB、ALT、AST、ALB的影響Tab.2 Effects of Shen Gui Gu Ben Wine on TP，ALB，ALT，AST and ALB in rat serum

2.4 各組大鼠血清及肝組織SOD、MDA的比較與鹽水對(duì)照組比較，白酒對(duì)照組及參龜固本酒組對(duì)大鼠血清SOD、MDA含量均無(wú)明顯影響（P＞0.05，表3）。

參龜固本藥酒組對(duì)大鼠肝組織中SOD及MDA活性均無(wú)明顯影響，與鹽水對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而白酒對(duì)照組大鼠肝組織中SOD活性較鹽水對(duì)照組顯著降低（P＜0.05），MDA活性明顯升高（P＜0.05），參龜固本酒組較白酒對(duì)照組SOD明顯升高（P＜0.05），MDA明顯降低（P＜0.05），同鹽水對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，表3）。

表3 參龜固本酒對(duì)大鼠血清及肝組織SOD、MDA的影響Tab.3 Effects of Shen Gui Gu Ben Wine on SOD and MDA in rat serum and liver （±s）

表3 參龜固本酒對(duì)大鼠血清及肝組織SOD、MDA的影響Tab.3 Effects of Shen Gui Gu Ben Wine on SOD and MDA in rat serum and liver （±s）

與鹽水對(duì)照組比較，*P＜0.05；與白酒組比較，#P＜0.05。

組別動(dòng)物數(shù)SOD（u/L）MDA（u/L）血清肝組織鹽水對(duì)照組10 93.43±16.22 70.92±14.48 4.62±1.13血清肝組織0.89±0.15白酒對(duì)照組12 90.27±12.36 53.78±13.08*4.97±1.36 1.40±0.35*參龜固本酒組13 102.96±14.21 63.74±7.21#3.93±0.97 1.09±0.30#

2.5 各組肝組織病理學(xué)的變化對(duì)照組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)如常，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，形成肝細(xì)胞索。肝血竇間隙豐富，肝細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，核呈圓形，可見雙核，胞質(zhì)豐滿，無(wú)異常改變，門管區(qū)未見異常改變，未見肝細(xì)胞變性壞死，未見結(jié)締組織增生，炎細(xì)胞浸潤(rùn)不明顯。白酒組肝組織小葉中，肝細(xì)胞索排列紊亂，胞質(zhì)內(nèi)有大小不等的圓形脂滴空泡，部分組織呈出血壞死，可見點(diǎn)灶壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)；參龜固本酒組肝細(xì)胞可見輕度脂變及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肝內(nèi)結(jié)締組織增生不明顯（圖1）。

圖1 參龜固本酒對(duì)大鼠肝組織病理學(xué)的影響Eig.1 Effects of Shen Gui Gu Ben Wine on rat liver histopathology（HE，×400）

3 討 論

酒精性肝病的機(jī)制十分復(fù)雜，目前還沒有完全闡明，但普遍認(rèn)為乙醇肝內(nèi)毒性代謝物及其代謝過(guò)程產(chǎn)生的大量自由基或活性氧是酒精性肝損傷的主要機(jī)制之一［3］。當(dāng)肝組織內(nèi)乙醇濃度較低時(shí)，大部分乙醇由乙醇脫氫酶（ADH）氧化代謝。研究認(rèn)為，長(zhǎng)期大量酗酒，機(jī)體肝內(nèi)乙醇濃度超過(guò)10 mmol/L時(shí)，主要依靠微粒體乙醇氧化系統(tǒng)的關(guān)鍵酶CYP2E1（細(xì)胞色素P450）代謝，在此代謝過(guò)程中，乙醇可氧化成乙醛，在醛氧化酶的作用下，乙醛可進(jìn)一步被氧化，該過(guò)程伴隨大量氧自由基的產(chǎn)生，包括羥自由基（-OH·）、氧自由基（O2·）及H2O2，氧自由基除可引起肝細(xì)胞膜的脂質(zhì)過(guò)氧化外，還可與細(xì)胞膜上的CYP2E1結(jié)合誘導(dǎo)細(xì)胞毒反應(yīng)，使肝細(xì)胞損傷。同時(shí)，乙醇代謝障礙導(dǎo)致肝細(xì)胞線粒體損傷后，可引起肝細(xì)胞內(nèi)脂肪酸氧化障礙，脂肪合成基質(zhì)增加，脂肪合成酶活性亢進(jìn)，脂肪分解低下，使肝細(xì)胞脂肪變性，即出現(xiàn)酒精性脂肪肝。

本研究結(jié)果顯示，白酒對(duì)照組大鼠灌胃12周后，血清ALT、AST顯著升高，而同酒精量的參龜固本酒組血清ALT、AST明顯低于白酒對(duì)照組；病理結(jié)果也顯示，參龜固本酒組大鼠脂肪變性和炎癥程度明顯輕于白酒組，說(shuō)明參龜固本酒中所含中藥對(duì)酒精引起肝損傷有明顯的抑制作用。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，參龜固本酒組肝組織MDA水平顯著低于白酒組，而SOD水平明顯高于白酒對(duì)照組，提示參龜固本酒所含中藥可能通過(guò)抑制酒精致肝細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力而發(fā)揮其保護(hù)肝損傷的作用。

參龜固本酒中含有當(dāng)歸、黃芪、黨參、茯苓、山茱萸、五味子、川芎、白術(shù)、陳皮、防風(fēng)、地黃、羌活、茯神、麥冬等18種中藥成分。研究認(rèn)為，五味子能促進(jìn)膽汁分泌，加速肝內(nèi)酒精等有毒物質(zhì)的排泄；五味子亦能有效地降低升高的肝轉(zhuǎn)氨酶，其活性成分木脂素可以增強(qiáng)GSH-PX和SOD等酶的生物活性，具有保護(hù)肝細(xì)胞膜、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、促進(jìn)蛋白質(zhì)生物合成和肝糖原生成等作用，能促進(jìn)損傷的肝細(xì)胞修復(fù)、增長(zhǎng)，抑制肝細(xì)胞病變［4］。茯苓對(duì)四氯化碳所引起的小鼠肝損傷有明顯的保護(hù)作用，能使ALP活性明顯降低，防止肝細(xì)胞壞死［5］。體內(nèi)外研究結(jié)果表明，黃芪多糖具有顯著的抗氧化活性，對(duì)OH·有一定的清除作用，其抗氧化效能較Vit.C強(qiáng)，且性質(zhì)穩(wěn)定，也能提高抗氧化相關(guān)酶的活性，降低相關(guān)組織的過(guò)氧化脂質(zhì)水平［6］。汪建紅等［7］用不同濃度黨參總黃酮給小鼠灌胃25 d，發(fā)現(xiàn)野生黨參總黃酮能增強(qiáng)小鼠血清和肝臟SOD活性，降低MDA含量，延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，提高肝糖原、肌糖原的儲(chǔ)備量，表明黨參黃酮類化合物具明顯的抗氧化抗疲勞生理功效。陳皮富含黃酮類化合物，黃酮類化合物是強(qiáng)自由基清除劑，具有很強(qiáng)的抗氧化活性。研究表明，陳皮黃酮化合物在體內(nèi)外均有明顯的抗氧化作用，小鼠灌胃30 d能降低小鼠肝臟、腎組織中MDA的含量，升高全血、肝臟組織中SOD、過(guò)氧化氫酶活性（CAT）［8］。白術(shù)具有明顯的抗氧化作用，白術(shù)發(fā)揮其抗氧化作用是通過(guò)金屬螯合和自由基清除實(shí)現(xiàn)的；自由基的清除來(lái)源于其內(nèi)含的酚酸（特別是咖啡酸，阿魏酸，原兒茶酸），而金屬螯合能力主要來(lái)自于黃酮類化合物［9］。目前認(rèn)為，枸杞抗氧化作用主要與枸杞多糖、β胡蘿卜素等單體有關(guān)，但楊薛康等［10］認(rèn)為含有多種有效成分的枸杞醇提物抗氧化能力更強(qiáng)于水提物。而眾多研究表明，川芎醇提物對(duì)超氧陰離子、脂質(zhì)體過(guò)氧化均具有較強(qiáng)的清除作用［11］；山茱萸多糖有體外清除自由基和抗氧化作用［12］；羌活醇提物能增強(qiáng)肝缺血再灌注損傷大鼠肝組織抗氧化酶的活性［13］；生地黃乙酸乙酯提取物具有較強(qiáng)的抗氧化活性，可作為一種新的自由基清除劑和天然抗氧化劑［14］；防風(fēng)多糖也有明顯的抗氧化活性［15］。因此，這些藥物的抗氧化或降酶保肝作用可能是參龜固本酒較白酒對(duì)大鼠肝損傷輕的主要原因。

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（編輯 卓選鵬）

The protective effect of Shen Gui Gu Ben Wine on alcoholic liver injury in rats

WANG Hong-ying1，LIU Min2*，LIU Mei1，ZHAO Li-li1，ZHAO Zheng-hang1
（1.Department of Pharmacology，Xi'an Jiaotong University Health Science Center，Xi'an 710061；2.Xi'an Detian Pharmaceutical Co.，Ltd.，Xi'an 710119，China）

Objective To observe the effect of Shen Gui Gu Ben Wine on alcoholic liver injury in rats. Methods SD rats were randomly divided into control group，white wine group and Shen Gui Gu Ben Wine group. Administration of different wine or normal saline twice a day began in rats by gastric gavage at the same time for 12 weeks.Samples were taken at the end of 12th week.The followings were detected：liver and spleen index；activities of serum alanine aminotransferase（ALT），aspartate aminotransferase（AST）and alkaline phosphatase（ALP），the contents of total protein（TP）and albumin（ALB），superoxide dismutase（SOD）activity and malondialdehyde（MDA）content in serum and liver tissue；and the liver tissue pathology.Results After 12 weeks of continuous administration，rats'hair，appetite，faeces and physical activities in control group were unchanged.Compared with control group，rats in white wine group had significantly reduced weight（P＜0.05）；significantly increased liver index（P＜0.01），increased serum ALT，AST，ALP and MDA contents in liver；and decreased SOD activity in liver；but there were no obvious changes in spleen index，the levels of serum TP，ALB，SOD or MDA（P＞0.05）. Pathological changes of liver tissue showed there were many fat drops，inflammatory cells infiltration and focal necrosis in white wine-treated rats.However，compared with white wine，Shen Gui Gu Ben Wine significantly increased rat body weight；decreased liver and spleen indexes，the levels of serum ALT，AST and ALP；enhanced liver SOD activities and decreased liver MDA contents（P＜0.01 or P＜0.05）.Shen Gui Gu Ben Wine obviouslyalleviated hepatic steatosis and inflammation shown in white wine group.Conclusion Shen Gui Gu Ben Wine can improve alcoholic-induced liver injury in rats，the mechanism of which may be associated with the antioxidant compositions in Shen Gui Gu Ben Wine.

Shen Gui Gu Ben Wine；alcoholic liver injury；antioxidant

R575

A

10.7652/jdyxb201505026

2014-09-05

2015-01-07

陜西省自然科學(xué)基金（No.SJ08C223）Supported by the Natural Science Foundation of Shaanxi Province（No.SJ08C223）

趙正杭.E-mail：zzh@mail.xjtu.edu.cn；*共同第一作者.

優(yōu)先出版：http：//www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20150721.1700.010.html（2015-07-21）