表皮生長(zhǎng)因子及其受體在尿道型陰莖彎曲畸形陰莖皮膚及纖維短縮尿道中的表達(dá)特征分析

安 宇，唐耘熳，譚樹(shù)林，黃建林，熊?chē)?guó)兵，李 俊

(1.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院 a.泌尿外科，b.小兒外科，四川 成都 610072；2.四川省德昌縣中醫(yī)院泌尿外科，四川 德昌 615500)

表皮生長(zhǎng)因子及其受體在尿道型陰莖彎曲畸形陰莖皮膚及纖維短縮尿道中的表達(dá)特征分析

安 宇1a，唐耘熳1b，譚樹(shù)林2，黃建林1a，熊?chē)?guó)兵1a，李 俊1a

(1.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院 a.泌尿外科，b.小兒外科，四川 成都 610072；2.四川省德昌縣中醫(yī)院泌尿外科，四川 德昌 615500)

目的 探討尿道型陰莖彎曲畸形陰莖皮膚及纖維短縮尿道組織中表皮生長(zhǎng)因子(EGF)及其受體(EGFR)的表達(dá)特征。方法 收集25例接受手術(shù)治療的尿道型陰莖彎曲患者陰莖背側(cè)、腹側(cè)皮膚和纖維短縮尿道組織(尿道型陰莖彎曲組)，以包皮過(guò)長(zhǎng)患者18例作為正常對(duì)照組，收集包皮環(huán)切術(shù)中正常陰莖背側(cè)、腹側(cè)包皮組織。組織標(biāo)本經(jīng)免疫組化LSAB法染色后檢測(cè)EGF、EGFR表達(dá)特征。結(jié)果 正常陰莖包皮及尿道型陰莖彎曲組織EGF、EGFR均存在陽(yáng)性表達(dá)。尿道型陰莖彎曲背側(cè)、腹側(cè)包皮EGF及EGFR表達(dá)與正常對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。尿道型陰莖彎曲自身背側(cè)、腹側(cè)包皮EGF及EGFR表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)；重度彎曲纖維短縮尿道與輕中度彎曲比較，EGFR表達(dá)顯著減低(P< 0.05)，EGF表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。結(jié)論 尿道型陰莖彎曲畸形陰莖皮膚及纖維短縮尿道組織中EGF和EGFR表達(dá)無(wú)顯著減少，重度彎曲纖維短縮尿道EGFR表達(dá)存在缺陷。

陰莖彎曲；表皮生長(zhǎng)因子；表皮生長(zhǎng)因子受體

先天性單純性陰莖彎曲畸形分為Ⅰ型皮膚型、Ⅱ型筋膜型、Ⅲ型海綿體型和Ⅳ型尿道型，尿道型陰莖彎曲屬于其中少見(jiàn)類(lèi)型，約占7%，病因至今尚不明確，其臨床表現(xiàn)為尿道外口正位開(kāi)口于陰莖頭，遠(yuǎn)段尿道發(fā)育缺陷，呈特征性的纖維短縮尿道，并牽引陰莖向腹側(cè)彎曲[1，2]。人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factand，EGF)、表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factand receptand，EGFR)在上皮組織表面細(xì)胞均豐富表達(dá)，在泌尿生殖道上皮細(xì)胞的增殖分化和再生愈合過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。本研究以正常陰莖包皮組織為對(duì)照，觀察尿道型陰莖彎曲陰莖背、腹側(cè)皮膚EGF/ EGFR的表達(dá)規(guī)律；以自身為對(duì)照，觀察彎曲畸形發(fā)育不平衡的背、腹側(cè)皮膚EGF/ EGFR的表達(dá)是否存在差異；并觀察纖維短縮尿道EGF/ EGFR的表達(dá)特征，為手術(shù)治療尿道型陰莖彎曲提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 四川省人民醫(yī)院2005年8月至2014年10月診治的尿道型陰莖彎曲患者 25例，年齡2.4～18歲，平均年齡6.6歲。經(jīng)人工勃起試驗(yàn)致陰莖勃起后測(cè)量陰莖長(zhǎng)度及彎曲角度[1]，陰莖長(zhǎng)度2.2～7.1 cm，平均 4.1 cm。其中，彎曲30～45°11例，彎曲≥45° 14例。術(shù)中收集陰莖背側(cè)、腹側(cè)皮膚和纖維短縮尿道組織。同期陰莖正常包皮過(guò)長(zhǎng)患者18例為對(duì)照，年齡3.9～12.4歲，平均年齡6.3歲，行包皮環(huán)切術(shù)，收集正常陰莖背、腹側(cè)包皮，未收集正常尿道組織。

1.2 方法 ①主要試劑及材料：一抗為兔抗EGF多體，兔抗EGFR單體，二抗為生物素標(biāo)記羊抗兔IgG，三抗為辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素。OLYMPUS雙目光學(xué)顯微鏡、Nikon顯微圖像采集系統(tǒng)。圖象分析軟件Image-Pro Plus 5.0。②免疫組織化學(xué)染色：組織標(biāo)本采用免疫組化LSAB法染色(AEC顯色)并觀察EGF/ EGFR的表達(dá)特征[3]。陰性對(duì)照為PBS代替一抗染色的標(biāo)本，陽(yáng)性對(duì)照為中分化胃癌(EGF)和中分化結(jié)腸癌(EGFR)。EGF/ EGFR陽(yáng)性染色判定標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞漿中出現(xiàn)紅染顆粒，陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果以積分光密度(integrated optical density，IOD)表示。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

陰性對(duì)照正常陰莖包皮及尿道型陰莖彎曲陰莖皮膚的各層組織中見(jiàn)細(xì)胞漿藍(lán)染，無(wú)細(xì)胞漿中紅色顆粒表達(dá)。陽(yáng)性對(duì)照中分化胃癌標(biāo)本EGF表達(dá)見(jiàn)細(xì)胞漿紅染，中分化結(jié)腸癌標(biāo)本EGFR表達(dá)見(jiàn)細(xì)胞漿紅染。EGF和EGFR在正常陰莖包皮、尿道型陰莖彎曲全部標(biāo)本的上皮組織全層細(xì)胞中均見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)(圖1、圖2)。EGF和EGFR表達(dá)IOD值見(jiàn)表1。尿道型陰莖彎曲背側(cè)、腹側(cè)包皮EGF及EGFR表達(dá)與正常對(duì)照比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。尿道型陰莖彎曲自身背側(cè)、腹側(cè)包皮EGF及EGFR表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。重度彎曲纖維短縮尿道與輕中度彎曲比較，EGFR表達(dá)顯著減低(P< 0.05)，EGF表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。

表1 正常陰莖包皮、尿道型陰莖彎曲 EGF和EGFR表達(dá)IOD值

組別nhs-CRP(mg/L)治療前治療后2周TC(mmol/L)治療前治療后2周LDL-C(mmol/L)治療前治療后2周A組5015.32±0.953.67±0.54*5.67±1.243.10±0.89*4.07±0.981.50±0.35*B組5015.67±0.781.66±0.60*△#5.51±1.352.28±0.85*△#4.12±0.852.29±0.46*△#C組5014.98±0.567.89±0.88*5.49±1.413.93±0.73*4.11±0.892.68±0.56*D組5015.49±0.628.53±0.59*5.55±1.223.89±0.83*4.74±0.782.43±0.35*

圖1 組織標(biāo)本免疫組化EGF表達(dá)觀察(AEC×400，箭頭示陽(yáng)性細(xì)胞) a：正常包皮皮膚，陰性對(duì)照；b：尿道型陰莖彎曲皮膚，陰性對(duì)照；c：中分化胃癌EGF，陽(yáng)性對(duì)照；d：正常陰莖背側(cè)包皮；e：正常陰莖腹側(cè)包皮；f：陰莖彎曲背側(cè)包皮；g：陰莖彎曲腹側(cè)皮膚；h：陰莖彎曲纖維尿道

圖2 組織標(biāo)本免疫組化EGFR觀察(AEC×400，箭頭示陽(yáng)性細(xì)胞) a：中分化結(jié)腸癌EGFR，陽(yáng)性對(duì)照；b：正常陰莖背側(cè)包皮；c：正常陰莖腹側(cè)包皮；d：陰莖彎曲背側(cè)包皮；e：陰莖彎曲腹側(cè)皮膚；f：陰莖彎曲纖維尿道

3 討論

3.1 尿道型陰莖彎曲陰莖背、腹側(cè)皮膚和纖維短縮尿道EGF/EGFR分布規(guī)律 胚胎研究表明，胚胎期陰莖由彎曲狀態(tài)逐漸伸直，尿道溝卷管融合形成尿道[3，4]。若雄激素生成缺乏和作用不足，均可能導(dǎo)致靶組織和器官雄性化不足，陰莖和尿道發(fā)育停滯，從而出現(xiàn)不同類(lèi)型的尿道下裂和陰莖彎曲等畸形[5，6]。Gupta等[7～9]體外培養(yǎng)和動(dòng)物研究證明，EGF(EGFR)可調(diào)節(jié)性腺類(lèi)固醇(雄激素)生成，反之雄激素可刺激EGF產(chǎn)生和EGFR成熟。EGF(EGFR)與雄激素的相互調(diào)節(jié)作用可誘導(dǎo)和促進(jìn)雄性胎鼠中腎管分化。若胚胎期生殖管道雄激素生成和作用不足，阻斷性腺激素與EGF(EGFR)相互作用，機(jī)體內(nèi)環(huán)境平衡破壞和內(nèi)分泌紊亂均可能導(dǎo)致外生殖器發(fā)育畸形的發(fā)生。我們的研究結(jié)果提示，尿道型陰莖彎曲畸形的發(fā)生可能與皮膚、筋膜組織及尿道層面的EGF(EGFR)因素?zé)o關(guān)。分層分析發(fā)現(xiàn)，與輕中度彎曲相比，重度彎曲纖維短縮尿道EGFR表達(dá)顯著減低，而EGF表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這表明彎曲畸形的程度越嚴(yán)重，EGFR表達(dá)缺陷越顯著，受體功能缺失越明顯。

3.2 尿道型陰莖彎曲EGF/EGFR表達(dá)特征對(duì)手術(shù)修復(fù)重建材料選擇的啟示 胃腸、呼吸、泌尿生殖道及角膜等上皮組織的表面細(xì)胞EGF/EGFR豐富表達(dá)，EGF(EGFR)既作用于組織的正常再生，調(diào)節(jié)表皮細(xì)胞增分化，又促進(jìn)組織的創(chuàng)傷修復(fù)，刺激肉芽組織新生[10]。手術(shù)治療尿道型陰莖彎曲，原則上應(yīng)充分游離并切除纖維性的尿道及其深面的攣縮纖維，解除限制后以充分矯正彎曲畸形，根據(jù)新尿道口位置裁選適宜的自身材料并重建尿道[11，12]。若發(fā)育缺陷的尿道組織保留過(guò)多，不僅彎曲畸形糾正不完全，而且術(shù)后短期內(nèi)因殘存尿道端生長(zhǎng)潛力和愈合能力欠佳而易發(fā)生吻合口尿瘺和尿道狹窄；但是若尿道周?chē)w維組織游離過(guò)多不僅會(huì)造成陰莖腹側(cè)創(chuàng)面加大，循環(huán)損傷加重，而且需要重建的新尿道更長(zhǎng)，自身材料選擇有限，皮瓣缺血壞死概率增加，組織修復(fù)及創(chuàng)傷愈合能力下降，尿瘺、尿道狹窄等并發(fā)癥更加難以避免。因而術(shù)者精細(xì)的手術(shù)操作和豐富的手術(shù)經(jīng)驗(yàn)都十分重要，需權(quán)衡利弊施治[13，14]。我們的體會(huì)是：①對(duì)于輕中度彎曲，皮膚及纖維短縮尿道EGF和EGFR并無(wú)顯著減少，適當(dāng)保留近端部分發(fā)育尚好的纖維短縮尿道可能是合理的，這樣可以縮短重建尿道的長(zhǎng)度，減少并發(fā)癥的發(fā)生。②對(duì)于重度彎曲，纖維短縮尿道EGFR表達(dá)存在缺陷，纖維性和菲薄尿道的保留不能過(guò)于積極，應(yīng)考慮予以充分切除，以免殘留的纖維束引起下彎糾正不全和復(fù)發(fā)，避免尿道殘端吻合口愈合不良。③選擇相對(duì)健康、容易獲取、生長(zhǎng)潛力和創(chuàng)傷修復(fù)能力較好的自身組織替代重建尿道。陰莖背側(cè)包皮較腹側(cè)材料充足，且EGF和EGFR表達(dá)與正常陰莖包皮無(wú)顯著性差異，因而背側(cè)帶蒂包皮瓣成為合適的材料。

尿道型陰莖彎曲病例少見(jiàn)，標(biāo)本取材也相當(dāng)不易，我們的研究樣本例數(shù)相對(duì)有限，大樣本的研究結(jié)果可能更能準(zhǔn)確揭示EGF和EGFR的表達(dá)特征。同時(shí)，研究還不能擴(kuò)展到各型彎曲畸形間相互比較，就目前技術(shù)及倫理限制下，這個(gè)問(wèn)題尚難以解決。

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The expression features of epidermal growth factor and its receptor in genital tissue and fibrotic urethra of patients with urethral type penis bending deformity

AN Yu1a，TANG Yun-man1b，TAN Shu-lin2，HUANG Jian-lin1a，XIONG guo-bin1a，LI jun1a

(1a.Department of Urology Surgery，1b.Department of Pediatric Surgery，Sichuan Academy of Medical Sciences & Sichuan Provincial People’s Hospital，Chengdu 610072，China；2.Department of Urology Surgery，Dechang County Traditional Chinese Medicine Hospital，Dechang 615500，China)

TANGYun-man

Objective To investigate the expression characteristics of epidermal growth factor(EGF)and epidermal growth factor receptor(EGFR)in genital tissue and fibrotic urethra of patients with urethral type penis bending deformity.Methods Dorsal prepuce，ventral perimeatal skin and fibrotic urethra from 25 patients with the disease were harvested in surgery.The prepuce from 18 boys in circumcision was used as control.The expression distribution of EGF and EGFR was assessed with immunohistochemistry.Results The expressions of EGF an EGFR were positive in specimens from the both group.No significant difference in EGF or EGFR expressions was detected between skin specimens between the two groups(P> 0.05)，and between dorsal and ventral specimens from the patients(P> 0.05).However，EGFR expression was significant decreased in fibrotic urethra of serious deformity when compared to mild-to-moderate deformity(P< 0.05)，but no significant difference in EGF expression was detected.Conclusion No difference in EGF and EGFR expressions is detected in dorsal，ventral skin and fibrotic urethra of patients with urethral type penis bending deformity.In patients with serious deformity，the expression of EGFR is flawed.

Phallocampsis，Epidermal growth factor，Epidermal growth factor receptor

唐耘熳

R697+.1

A

1672-6170(2015)05-0087-04

2015-05-26；

2015-06-20)