降壓草的組織培養(yǎng)技術(shù)研究

郭福生，陳淑華，王漫，葉雅玲

（1.白城市到保機(jī)械林場，吉林 白城 137000；2.白城市林業(yè)科學(xué)研究院，吉林 白城 137000）

降壓草為菊科三七草屬多年生宿根常綠草本植物，是從東南亞引進(jìn)的一種稀有天然藥用植物，高25～35cm。該草對高血壓、動脈硬化、腦溢血后遺癥、腦血栓、腦梗死均有特殊療效。降壓草用法簡便，堅持每天當(dāng)茶（沸水浸泡）飲用，可降低血脂、血黏度等。由于其社會需求量大，且要求高品質(zhì)，我們采用了組織培養(yǎng)對其進(jìn)行繁殖。降壓草的培育成功，填補(bǔ)了我國利用天然稀有植物降血壓、降血脂、防治心血管等多種疾病的空白。

1 試驗(yàn)材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

選用白城市林業(yè)科學(xué)研究院選育的降壓草優(yōu)株2號新品種為試材。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 取材消毒與接種 在春季采剪生長旺盛的嫩枝，沖洗干凈，切成帶腋芽的莖段，用70%的酒精消毒20～30s，無菌水沖洗2次；0.1%的HgCI2消毒6～8min，無菌水沖洗2次，接種于空白培養(yǎng)基。接種時將莖段兩端接觸消毒液的切口剪掉，外植體長3.0～5.0cm，當(dāng)嫩鞘長至1.5～2.0cm時，轉(zhuǎn)至附加不同濃度的培養(yǎng)基中，觀察芽的誘導(dǎo)、增殖與生長的規(guī)律。

1.2.2 基本培養(yǎng)基選擇 將莖段分別在MS、1／2MS和B5培養(yǎng)基中附加6－BA1.0mgL－1＋NAA0.1mgL－1的培養(yǎng)基中培養(yǎng)30d，觀察不同培養(yǎng)基對誘導(dǎo)外植體分化的影響，確定適宜培養(yǎng)基類型。

1.2.3 愈傷組織的誘導(dǎo)和初代培養(yǎng) 將經(jīng)消毒的外植體接種于培養(yǎng)基中，在25±2℃條件下培養(yǎng)15 d左右，莖段邊緣切口處出現(xiàn)淡綠色愈傷組織。經(jīng)10d左右的誘導(dǎo)培養(yǎng)，形成的愈傷組織轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽分化，分化培養(yǎng)20d，可見愈傷組織出現(xiàn)綠色小突起，繼續(xù)培養(yǎng)則分化成不定芽。為了解基本培養(yǎng)基、激素組合對腋芽萌發(fā)的影響，采用3因素3水平9個處理試驗(yàn)，每瓶接種外植體1個，多個處理接種12瓶，重復(fù)3次。

表1 初代培養(yǎng)誘導(dǎo)叢生芽9處理

2.3 繼代增殖培養(yǎng)基的選擇

通過初代培養(yǎng)基而獲得的無菌苗，叢生芽的數(shù)量是有限的，需要繼代培養(yǎng)增殖來擴(kuò)大繁殖系數(shù)。考慮到細(xì)胞分裂素和生長素之間可能存在交互作用，為了更準(zhǔn)確詳細(xì)地研究叢生芽的增殖問題，分別選取不同含量的細(xì)胞分裂素和生長素進(jìn)行誘導(dǎo)分化，選擇采用3因素3水平試驗(yàn)，觀察降壓草增殖培養(yǎng)結(jié)果。

表2 繼代增殖培養(yǎng)誘導(dǎo)分化9處理

2 結(jié)果與分析

2.1 降壓草基本培養(yǎng)基的選擇及培養(yǎng)條件

由表3可知，MS培養(yǎng)基褐變率最低，分化率最高，較適合降壓草的快繁。以MS為基本培養(yǎng)基，除特別說明，均附加蔗糖20gL－1，瓊脂8gL－1，pH5.8。培養(yǎng)基在121℃下滅菌25min，培養(yǎng)溫度25℃，光照強(qiáng)度2 000lx，光照12h。

表3 不同培養(yǎng)基對誘導(dǎo)外植體分化的影響

2.2 降壓草愈傷組織的誘導(dǎo)和初代培養(yǎng)

試驗(yàn)的9個處理中，處理5：MS＋6－BA0.5 mgL－1＋NAA0.1mgL－1＋I(xiàn)AA0.2mgL－1，誘導(dǎo)的叢生芽較粗壯，分生系數(shù)較高，最適宜降壓草的叢生芽誘導(dǎo)；處理1－3培養(yǎng)基基本不分生；處理4：MS＋6－BA0.5mgL－1＋I(xiàn)AA0.1mgL－1誘導(dǎo)的叢生芽細(xì)，分生系數(shù)低；而處理6－9分生系數(shù)最高，但芽苗細(xì)弱，不適合進(jìn)一步培養(yǎng)。

2.3 繼代增殖培養(yǎng)

將上一階段誘導(dǎo)培養(yǎng)的叢生芽切成小塊繼代和增殖，降壓草剛增殖時，嫩莖條增加的倍數(shù)比較低，幾次繼代后，倍數(shù)加大，壯苗增加。不同的6－BA和NAA對繼代增殖的影響效果是不同的。觀察降壓草增殖培養(yǎng)結(jié)果，處理6號MS＋6－BA 0.8mg L－1＋NAA0.5mgL－1＋I(xiàn)BA0.1mgL－1的繼代效果最好。

3 結(jié)論

3.1 在初代培養(yǎng)階段，以改良的MS培養(yǎng)基適合降壓草外植體誘導(dǎo)分化。適宜的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS＋6－BA0.5mgL－1＋NAA0.1mgL－1。

3.2 在繼代與增殖培養(yǎng)階段，以改良的MS作為基本培養(yǎng)基，適宜的增殖培養(yǎng)基為MS＋6－BA1.0 mgL－1＋NAA0.5mgL－1＋I(xiàn)AA0.1mgL－1。利用細(xì)胞分裂素可以促進(jìn)腋芽的快速形成，從而使嫩莖獲得增殖，這是快繁的一個重要途徑。該途徑速率快，繁殖系數(shù)高，遺傳性狀穩(wěn)定。

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