3-甲基-4-硝基酚對(duì)公雞睪丸早期發(fā)育的影響

徐偉風(fēng)，樸元國(guó)，李延森，李春梅

南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，南京 210095

3-甲基-4-硝基酚對(duì)公雞睪丸早期發(fā)育的影響

徐偉風(fēng)，樸元國(guó)，李延森，李春梅*

南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，南京 210095

研究環(huán)境內(nèi)分泌干擾物3-甲基-4-硝基酚(3-methyl-4-nitrophenol，PNMC)對(duì)公雞睪丸早期發(fā)育的影響。48只1 d齡白羽公雞隨機(jī)分成3個(gè)組，分別為對(duì)照組、10和100 mg·L-1PNMC處理組，連續(xù)飲水42 d。檢測(cè)公雞的生長(zhǎng)性能、睪丸重量和指數(shù)、睪丸的結(jié)構(gòu)變化、血清激素水平和睪丸中CYP17A1及其相關(guān)基因的表達(dá)情況。結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，10 mg·L-1PNMC處理組顯著降低公雞的生長(zhǎng)性能；睪丸重量和睪丸指數(shù)均無(wú)顯著性變化；睪丸細(xì)精管生精細(xì)胞均有不同程度的空泡兼或脫落；血清孕酮和雌二醇水平均無(wú)顯著性差異，睪酮水平隨飲水中PNMC濃度的升高呈遞減的趨勢(shì)；公雞睪丸中CYP17A1、HSD3B2和CYP19A1有升高的趨勢(shì)，HSD17B4在10 mg·L-1PNMC組呈降低的趨勢(shì)，在100 mg·L-1PNMC組呈升高的趨勢(shì)。結(jié)果表明：飲水中添加10 mg·L-1PNMC顯著影響了公雞的生長(zhǎng)性能；飲水中添加100 mg·L-1PNMC引起公雞睪丸細(xì)精管生精細(xì)胞變性、壞死，造成結(jié)構(gòu)病理?yè)p傷，從而對(duì)生殖系統(tǒng)造成損傷。

3-甲基-4-硝基酚；睪丸；公雞；生殖損傷

環(huán)境內(nèi)分泌干擾物是一類通過(guò)干擾生物體內(nèi)調(diào)節(jié)發(fā)育過(guò)程的天然激素的合成、分泌、運(yùn)輸、結(jié)合、反應(yīng)和代謝等過(guò)程，從而對(duì)生物體生殖、神經(jīng)和免疫系統(tǒng)等功能產(chǎn)生影響的外源性化學(xué)物質(zhì)[1]。3-甲基-4-硝基酚(3-methyl-4-nirophenol，PNMC)，系苯酚衍生物，是一種重要的化工原料，廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)殺蟲劑、除草劑、染料、醫(yī)藥等行業(yè)，常常在生產(chǎn)和使用過(guò)程中被釋放到環(huán)境中，它們難以降解，在環(huán)境中可長(zhǎng)期殘留，對(duì)土壤、水體和大氣造成嚴(yán)重的污染，已被美國(guó)環(huán)境保護(hù)局和我國(guó)列為“優(yōu)先控制污染物”之一。最近研究發(fā)現(xiàn)柴油車尾氣中也含有PNMC，約1 kg尾氣顆粒中PNMC含量可以高達(dá)28 mg[2]，而且PNMC是有機(jī)磷殺蟲劑——?dú)⒚傻乃猱a(chǎn)物[3]。環(huán)境中各種來(lái)源的PNMC可以通過(guò)呼吸道、消化道以及皮膚等途徑進(jìn)入機(jī)體內(nèi)部，嚴(yán)重威脅著人類及動(dòng)物的健康。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)PNMC具有雌激素和抗雄激素的作用[4-5]，能夠引起精囊、前列腺以及陰莖頭重量顯著降低，擾亂雄性大鼠腎上腺皮質(zhì)類固醇激素的分泌[6]。

目前，關(guān)于PNMC作用機(jī)制的相關(guān)研究在大鼠[7-8]、小鼠[9]、鵪鶉[10]等動(dòng)物上已有報(bào)道，但是，PNMC對(duì)家禽生殖的影響仍處于空白。因此，本試驗(yàn)以白羽公雞為研究對(duì)象，在飲水中添加不同濃度的PNMC，研究PNMC對(duì)白羽公雞的生長(zhǎng)性能、睪丸指數(shù)、睪丸組織結(jié)構(gòu)變化、血清激素水平和睪丸中CYP17A1及相關(guān)基因表達(dá)的影響，為今后研究PNMC對(duì)家禽的影響提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

1 d齡健康白羽公雞48只(南京青龍山實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供)。

1.2 主要試劑

3-甲基-4-硝基酚(3-methyl-4-nitrophenol，PNMC，純度99.9%，成都科隆化學(xué)品有限公司)，電解多維(四川天紅牧業(yè)有限公司)，多聚甲醛(上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)，動(dòng)物切片石蠟(熔點(diǎn)60～62 ℃，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，HE(蘇木精-伊紅)染液(南京建成生物科技有限公司)，反轉(zhuǎn)錄試劑盒(大連寶生物工程有限公司)，PCR定量試劑盒(上海皓嘉科技發(fā)展有限公司)，雌二醇試劑盒(北京北方生物技術(shù)研究所)，孕酮和睪酮試劑盒(南京建成生物科技有限公司)。

1.3 主要試驗(yàn)儀器

石蠟切片機(jī)Leica RM2235和烘片機(jī)Leica HI1220(上海徠卡儀器有限公司)，光學(xué)顯微鏡Nikon YS100和倒置顯微鏡(日本Nikon株式會(huì)社)，酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo公司)，5417R型臺(tái)式冷凍高速離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)，低溫冷凍離心機(jī)J2-MI型(德國(guó)Beckman公司)，Real-time PCR儀(美國(guó)Bio-rad公司)。

1.4 動(dòng)物分組與處理

試驗(yàn)為單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)。將48只1 d齡健康白羽公雞隨機(jī)分為3個(gè)處理組，每個(gè)處理組設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4只雞，試驗(yàn)期為42 d。試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧采用玉米-豆粕型日糧，分1～21 d和21～42 d兩階段進(jìn)行飼養(yǎng)，日糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。對(duì)照組飲水中不添加PNMC，試驗(yàn)組分別向飲水中添加10 mg·L-1和100 mg·L-1的PNMC。試驗(yàn)階段采用籠養(yǎng)，24 h光照，并且確保雞群能夠自由飲水和采食，對(duì)照組與試驗(yàn)組采用相同的免疫程序進(jìn)行免疫以及相同的飼養(yǎng)管理方式進(jìn)行飼養(yǎng)。

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能

從初生重開(kāi)始記錄，于每周對(duì)所有雞只進(jìn)行稱重(稱重前12 h斷料)，按重復(fù)記錄飼料采食量和剩余采食量，根據(jù)體重和采食量，計(jì)算各階段平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)。

1.5.2 睪丸重量與睪丸指數(shù)

試驗(yàn)結(jié)束后，采用頸部割喉法處死雞只，剝離、取出睪丸并準(zhǔn)確地除去表面的脂肪和結(jié)締組織，稱重前用濾紙吸干血水后稱重并詳細(xì)記錄每只雞的睪丸重量，計(jì)算睪丸指數(shù)。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成以及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diet (dry mass basis)

注：1) 每kg飼糧提供的微量元素為Fe 80 mg，Cu 8.0 mg，Zn 65 mg，Mn 110 mg，I 1.1 mg，Se 0.3 mg；

2) 每kg飼糧提供的維生素為VA 24 mg，VD3 6 mg，VE 20 mg，VK 1.3 mg，VB12.2 mg，VB28 mg，VB340 mg，VB64 mg，VB120.013 mg，VH 0.04 mg；葉酸1 mg，桿菌肽鋅30 mg，膽堿400 mg，泛酸鈣10 mg；

3) 營(yíng)養(yǎng)水平為計(jì)算值。

Note: 1) One kg of the diet provides trace elements: Fe 80 mg,Cu 8.0 mg,Zn 65 mg,Mn 110 mg,I 1.1 mg,Se 0.3 mg;

2) One kg of the diet provides Vitamins: VA 24 mg,VD36 mg,VE 20 mg,VK 1.3 mg,VB12.2 mg,VB28 mg,VB340 mg,VB64 mg,VB120.013 mg,VH 0.04 mg; Folic acid 1 mg,bacitracin zinc 30 mg,choline 400 mg,calcium pantothenate 10 mg;

3) Nutrient levels are calculated values.

1.5.3 睪丸組織結(jié)構(gòu)觀察

試驗(yàn)結(jié)束后，試驗(yàn)公雞采血后屠宰，分離睪丸，取部分樣品放入福爾馬林溶液中固定，用石蠟包埋處理，切片為5 μm，進(jìn)行HE染色，觀察睪丸組織結(jié)構(gòu)變化。

1.5.4 血清激素水平

試驗(yàn)結(jié)束后，采用頸部割喉法處死雞只，收集血液，3 500 r·min-1離心15 min，吸取上清液，-20 ℃保存。采用試劑盒測(cè)定血清睪酮(testosterone)、孕酮(progesterone)和雌二醇(estradiol)的含量。

1.5.5 睪丸組織總RNA的提取和定量測(cè)定

按照Trizol說(shuō)明書提取睪丸組織的總RNA，提取的RNA保存于-70 ℃超低溫冰箱中，或立即用于反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄時(shí)，按照Takara Prime Script ? RT reagent Kit反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書，取上述純化的總RNA 2.0 μg 加入2×RT Buffer 10 μL、20×RT Enzyme Mix 1 μL、Nuclease-free H2O補(bǔ)足至20 μL，置于PCR儀內(nèi)37 ℃15 min，95 ℃反轉(zhuǎn)錄滅活15 s，反應(yīng)結(jié)束后所得cDNA用于定量PCR。按照TakaraSYBR? Premix Ex TaqTM定量試劑盒說(shuō)明書，依次往定量PCR管加入下列試劑(20 μL體系)：H2O 3.4 μL、引物(10 μmol·L-1)各0.2 μL、模板1 μL、ROX Reference Dye 0.2 μL、SYBR Premix Ex Taq 5 μL，混勻離心后在Real-time PCR儀上反應(yīng)檢測(cè)，反應(yīng)程序如下：95 ℃變性10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 45 s，重復(fù)45個(gè)循環(huán)；反應(yīng)結(jié)束繪制熔解曲線。利用2-△△Ct法對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行相對(duì)定量，下表為試驗(yàn)中所用引物序列，見(jiàn)表2。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用單因素ANOVA法分析差異性，若差異顯著則用LSD法進(jìn)行多重比較(當(dāng)P <0.05時(shí)即被認(rèn)為差異顯著)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean±SEM)表示。

2 結(jié)果(Results)

2.1 PNMC對(duì)公雞生長(zhǎng)性能的影響

PNMC對(duì)公雞生長(zhǎng)性能的影響見(jiàn)表3。與對(duì)照組相比，10 mg·L-1組的全期平均日增重顯著降低(P<0.05)，全期平均日采食量和全期料重比卻有極顯著的上升(P<0.01)；與對(duì)照組相比，100 mg·L-1組在1～21 d時(shí)平均日采食量和料重比極顯著的增加(P<0.01)，其他各個(gè)時(shí)期的平均日增重、平均日采食量和料重比都無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

表2 Real-time PCR所用引物Table 2 Primers for real-time PCR analyses

表3 3-甲基-4-硝基酚(PNMC)對(duì)公雞生長(zhǎng)性能的影響Table 3 Effects of 3-methyl-4-nitrophenol (PNMC) on growth performance of roosters

注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)小寫字母不同表示差異顯著(P <0.05)，大寫字母不同表示差異極顯著(P<0.01)。

Note: In the same row,values with different small letter superscripts mean the difference is significantly at 0.05,and values with different capital letter superscripts mean the difference is significantly at 0.01.

2.2 PNMC對(duì)公雞體重和睪丸重量的影響

對(duì)照組和PNMC處理組公雞生長(zhǎng)正常。與對(duì)照組相比，10 mg·L-1組體重極顯著降低(P<0.01)，100 mg·L-1組體重下降，但差異不顯著(P>0.05)。睪丸重量和睪丸指數(shù)均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，見(jiàn)表4。

2.3 PNMC對(duì)公雞睪丸組織結(jié)構(gòu)的影響

圖1為各組公雞睪丸組織的HE染色圖。從圖中可以看到，對(duì)照組公雞睪丸組織間質(zhì)細(xì)胞、支持細(xì)胞、生精細(xì)胞均清晰可見(jiàn)，排列整齊、均勻分布、緊湊有序，形態(tài)正常(圖1A)。與對(duì)照組相比，PNMC組(圖1B、圖1C)呈現(xiàn)不同程度的病理形態(tài)學(xué)變化：10 mg·L-1組部分睪丸組織體積縮小，排列不夠緊湊并出現(xiàn)輕微的空泡化(圖1B)；100 mg·L-1組細(xì)精管細(xì)胞排列疏松存在嚴(yán)重的脫落趨勢(shì)(圖1C)。

表4 PNMC對(duì)公雞體重、睪丸重及睪丸指數(shù)影響Table 4 Effects of PNMC on the body weight,testicle weight and testicle index of roosters

注： 同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)大寫字母不同表示差異極顯著(P<0.01)。

Note: In the same column,values with different capital letter superscripts mean the difference is significantly at 0.01.

圖1 PNMC處理對(duì)公雞睪丸組織結(jié)構(gòu)的影響(A)對(duì)照組; (B)10 mg·L-1 PNMC組; (C)100 mg·L-1 PNMC組

2.4 PNMC對(duì)公雞血清激素水平的影響

與對(duì)照組相比，PNMC處理組中血清孕酮和雌二醇水平均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，睪酮水平隨飲水中PNMC濃度的升高呈遞減的趨勢(shì)，但差異不顯著(P>0.05)，見(jiàn)表5。

表5 PNMC對(duì)公雞血清激素水平的影響Table 5 Effects of PNMC on serum hormone levels of roosters

2.5 PNMC對(duì)公雞睪丸組織類固醇激素合成相關(guān)酶的基因表達(dá)的影響

圖2為各組公雞睪丸組織中CYP17A1、HSD3B2、CYP19A1和HSD17B4 mRNA相對(duì)表達(dá)量的變化。與對(duì)照組相比，10 mg·L-1組的CYP17A1(圖4A)、HSD3B2(圖4B)和CYP19A1(圖4C)有升高的趨勢(shì)，但差異不顯著(P>0.05)，HSD17B4(圖4D)呈降低的趨勢(shì)(P>0.05)；CYP17A1(圖4A)、HSD3B2(圖4B)、CYP19A1(圖4C)和HSD17B4(圖4D)在100 mg·L-1組均有升高趨勢(shì)，但差異不顯著(P>0.05)。

3 討論(Discussion)

3.1 PNMC對(duì)公雞生長(zhǎng)性能及睪丸重量的影響

飲水中分別添加濃度為10 mg·L-1和100 mg·L-1PNMC，不會(huì)引起急性中毒癥狀。濃度為10 mg·L-1時(shí)顯著影響公雞的生長(zhǎng)性能，而濃度為100 mg·L-1時(shí)無(wú)顯著影響，這一結(jié)果與岳卓等[7]、Li等[11]的研究不同。分析其原因，可能PNMC對(duì)公雞生長(zhǎng)性能的影響不存在濃度依賴性，當(dāng)濃度為10 mg·L-1PNMC進(jìn)入動(dòng)物消化道后，可能改變消化道內(nèi)環(huán)境，降低了動(dòng)物對(duì)養(yǎng)分的消化吸收能力，從而引起生長(zhǎng)性能的降低；而濃度為100 mg·L-1時(shí)無(wú)顯著影響，可能與給藥方式、試驗(yàn)動(dòng)物、處理時(shí)間等有關(guān)，但具體作用機(jī)制尚不清楚。在睪丸重量和睪丸指數(shù)方面，如果睪丸指數(shù)變小，表明睪丸可能出現(xiàn)萎縮和退行性變化；如果睪丸指數(shù)變大，表明睪丸可能出現(xiàn)水腫、充血和增生等病變[12]。濃度為10 mg·L-1和100 mg·L-1PNMC沒(méi)有引起公雞睪丸重量和睪丸指數(shù)發(fā)生顯著性變化，說(shuō)明PNMC在本試驗(yàn)劑量下對(duì)公雞生殖器官的生長(zhǎng)沒(méi)有顯著影響。

圖2 PNMC處理對(duì)公雞睪丸組織類固醇激素合成相關(guān)酶的基因表達(dá)的影響

3.2 PNMC對(duì)公雞睪丸組織結(jié)構(gòu)變化的影響

飲水中添加不同濃度的PNMC對(duì)公雞睪丸有不同程度的損傷。這與前人報(bào)道一致，如岳卓等[7]的研究表明對(duì)照組大鼠睪丸曲細(xì)精管內(nèi)支持細(xì)胞和各級(jí)生精細(xì)胞排列緊密、有序，精細(xì)胞整齊密集；PNMC處理(皮下注射)可導(dǎo)致大鼠睪丸組織均有不同程度的損傷，主要表現(xiàn)為曲細(xì)精管內(nèi)大量生精細(xì)胞壞死，細(xì)胞核固縮凝聚，并出現(xiàn)形成空泡樣結(jié)構(gòu)。布同良等[13]研究表明100 mg·kg-1的PNMC腹腔注射可引起小鼠睪丸的局部嚴(yán)重?fù)p傷，表現(xiàn)為曲細(xì)精管的損傷，生精上皮中生殖細(xì)胞量顯著減少。上述研究表明PNMC可能是阻礙生精細(xì)胞在減數(shù)分裂前后的分化與增殖，使其發(fā)育成精子細(xì)胞和精子的數(shù)量減少。

3.3 PNMC對(duì)血清激素水平和睪丸組織類固醇激素合成相關(guān)酶的基因表達(dá)的影響

作為汽車尾氣顆粒物中成分之一的PNMC可抑制成年小鼠[14]、大鼠[15]以及未成年大鼠精子的生成[16]。飲水中添加10 mg·L-1和100 mg·L-1PNMC時(shí)，睪酮的含量雖無(wú)顯著性減少，但呈降低的趨勢(shì)。這與他人的研究結(jié)果一致，如岳卓等[9]報(bào)道，PNMC處理(經(jīng)口灌胃)會(huì)導(dǎo)致曲細(xì)精管內(nèi)睪酮含量降低，最終導(dǎo)致精子生成障礙。同時(shí)Li等[17]研究表明PNMC肌肉注射可以使成年雄性鵪鶉的睪酮分泌下降，并影響睪丸功能，但機(jī)制尚不清楚。近來(lái)研究表明，生理劑量的孕激素可以促進(jìn)雄激素依賴的雄性性行為表現(xiàn)，這在Young等[18]的實(shí)驗(yàn)中已得到證實(shí)。與10 mg·L-1PNMC組相比，飲水中添加100 mg·L-1PNMC時(shí)，雌二醇的含量呈降低的趨勢(shì)，肉雞血清中孕酮的含量有升高的趨勢(shì)。這一結(jié)果與Li等[19]報(bào)道類似，100 mg·kg-1PNMC組肌肉注射顯著降低了雌二醇的含量，顯著增加了孕酮的含量。說(shuō)明飲水中添加PNMC能夠在一定程度上影響血清激素水平的變化，導(dǎo)致內(nèi)分泌功能紊亂，從而對(duì)生殖系統(tǒng)造成損傷。

性腺發(fā)育受到下丘腦-垂體-性腺信號(hào)通路的調(diào)節(jié)和控制，激素在信息傳遞中起重要作用，也成為環(huán)境內(nèi)分泌干擾物作用的主要靶點(diǎn)[20]。細(xì)胞色素P450系列酶參與了類固醇激素的合成過(guò)程[21]。CYP11A1和HSD3B2在膽固醇轉(zhuǎn)化成孕酮的生化過(guò)程中不可或缺，CYP17和HSD17B在孕酮轉(zhuǎn)化成睪酮的過(guò)程中扮演著重要的角色，而CYP19在睪酮進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成雌二醇的過(guò)程中發(fā)揮重要的作用[22-23]。其中，由CYP17基因編碼的細(xì)胞色素P450 17α-羥化酶(17α-hydroxylase)、17，20-裂解酶(17，20-lyase)能參與睪丸中膽固醇轉(zhuǎn)化為睪酮的過(guò)程，調(diào)控睪丸性激素合成的總量[24]。P450芳香化酶(P450arom)是調(diào)節(jié)脊椎動(dòng)物體內(nèi)雌激素形成的關(guān)鍵酶，廣泛分布于脊椎動(dòng)物的腦和性腺等器官組織中[25]。魚類CYP19A基因編碼性腺中的P450arom，主要分布于卵巢[26]，在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中有少量表達(dá)，調(diào)控原始精原細(xì)胞的增殖[27]。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)CYP19A1基因的表達(dá)量在PNMC處理組公雞睪丸組織中有增加趨勢(shì)，這一結(jié)果與Hatef等[28]的報(bào)道類似。因此，我們推測(cè)PNMC對(duì)公雞睪丸功能的影響可能是通過(guò)提高CYP19A1基因表達(dá)加速了睪酮向雌激素的轉(zhuǎn)化，使血清中睪酮含量減少，增強(qiáng)雌激素效應(yīng)。CYP17A1、HSD3B2和HSD17B4基因表達(dá)無(wú)明顯的變化，可能是由于這些基因位于上游，但具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，在公雞早期發(fā)育過(guò)程中，飲水中添加10 mg·L-1PNMC時(shí)可顯著影響肉雞的生長(zhǎng)性能，并且這種影響不具有濃度依賴性；飲水中添加100 mg·L-1PNMC時(shí)公雞血清睪酮的生成減少，睪丸細(xì)精管生精細(xì)胞變性、壞死，造成結(jié)構(gòu)變化，引起睪丸功能損傷。而PNMC通過(guò)影響公雞睪丸組織類固醇激素合成相關(guān)酶的表達(dá)而干擾激素分泌的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。

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Effects of 3-methyl-4-nitrophenol on the Early Development of Rooster Testes

Xu Weifeng,PiaoYuanguo,Li Yansen,Li Chunmei*

College of Animal Science and Technology,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China

25 December 2014 accepted 4 February 2015

To investigate the effects of 3-methyl-4-nitrophenol (PNMC),a major component of diesel exhaust particles,on the early development of the rooster testes,forty-eight white roosters(1-d-old) were randomly divided into three groups and supplemented with PNMC in drinking water in different doses (0,10,100 mg·L-1)for 42 days.Growth performance,testes weight and index,the morphological changes of testes,serum hormone levels and the expression levels of the testicular CYP17A1 and related genes were assessed.The results showed that the growth performance was significantly reduced in the 10 mg·L-1PNMC-treated group compared with the control group.The values of testes weight and index showed no significant change among 3 groups.The increased vacuolation were observed in the spermatogenic cells of the seminiferous tubules in the 10 mg·L-1PNMC-treated group.There was no significant difference in serum progesterone,estradiol and testosterone levels.The expression levels of the testicular CYP17A1,HSD3B2 and CYP19A1 in the 10 mg·L-1PNMC-treated group was higher than those of the control group.The expression level of the testicular HSD17B4 was lower in the 10 mg·L-1PNMC-treated group and higher in the 100 mg·L-1PNMC group when comparing with that of the control group.In conclusion,the supplementation of 10 mg·L-1PNMC in drinking water affected the growth performance whereas supplementation of 100 mg·L-1PNMC caused the cell degeneration and necrosis in the seminiferous tubules and triggered the structural changes.Therefore our results indicate that early exposure to PNMC resulting in the damages in the reproductive system of rooster.

3-methyl-4-nitrophenol; testes; rooster; reproductive damage

江蘇省自然基金面上項(xiàng)目(BK20131315)；“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2012BAD39B02)

徐偉風(fēng)(1990-)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)榄h(huán)境毒理學(xué)，E-mail：2013105059@njau.edu.cn；

*通訊作者(Corresponding author)，E-mail: chunmeili@njau.edu.cn

10.7524/AJE.1673-5897.20141225001

2014-12-25 錄用日期：2015-02-04

1673-5897(2015)4-146-08

X171.5

A

李春梅(1974-)，女，博士，教授，博士生導(dǎo)師。主要研究方向動(dòng)物環(huán)境生理與營(yíng)養(yǎng)毒理學(xué)。

徐偉風(fēng),樸元國(guó),李延森,等.3-甲基-4-硝基酚對(duì)公雞睪丸早期發(fā)育的影響[J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào)，2015,10(4): 146-153

Xu W F,Piao Y G,Li Y S,et al.Effects of 3-methyl-4-nitrophenol on the early development of rooster testes [J].Asian Journal of Ecotoxicology,2015,10(4): 146-153 (in Chinese)