細胞實驗室污染原因及有效預防控制措施的分析

邱小華 ，賀文鳳 ，梁茜 ，胡龍華

(南昌大學第二附屬醫(yī)院；1、分子醫(yī)學重點實驗室；2、檢驗科，江西 南昌330006)

實驗污染一直困擾著科研和臨床醫(yī)務工作者，污染可能導致實驗結(jié)果錯誤，甚至科研失敗，污染可能導致檢驗結(jié)果錯誤，延誤患者治療或治療失敗。細胞實驗室對環(huán)境要求更為嚴格，導致醫(yī)學細胞實驗室污染因素很多，如：實驗操作過程中產(chǎn)生的氣溶膠，帶有粉末、微生物的空氣進入無菌實驗室，污染試劑，操作技術(shù)人員無菌觀念較差，無菌操作不規(guī)范等等。Wedum[1]認為實驗室感染中65%以上的感染是由微生物氣溶膠引起的，而且微生物氣溶膠在一個實驗室內(nèi)產(chǎn)生后,還可以通過氣流轉(zhuǎn)移到同一建筑物的其他地方,甚至污染整個建筑物的空氣[2]。近期，我科細胞實驗室短期內(nèi)出現(xiàn)幾次細胞培養(yǎng)嚴重污染情況，對此，我們進行了污染原因分析，并采取了相應的預防措施，達到了預期的效果，現(xiàn)將調(diào)查報告如下。

1 材料與方法

1.1 采樣 針對3次嚴重污染情況，均采集無菌培養(yǎng)室不同方向的空氣，培養(yǎng)箱各個層面的氣體，凈化工作臺面棉拭子，凈化工作臺四個頂角及臺面中央同時采集了5個空氣點，可疑細胞培養(yǎng)基等。1.2培養(yǎng) 將采集的各種標本置入血平板培養(yǎng)基和PDA培養(yǎng)基，置37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h及48h，分別觀察血平板和PDA平板上細菌生長情況，根據(jù)生長情況，用VITEK2-Compact全自動微生物分析儀鑒定。

2 結(jié)果

干預前3次培養(yǎng)結(jié)果觀察見表1。

表1 干預前培養(yǎng)結(jié)果

干預前培養(yǎng)基內(nèi)見大量連接成長鏈狀的芽生孢子并可見到大量菌絲。此外,在部分培養(yǎng)基中見到球形細菌，經(jīng)過革蘭染色為革蘭陰性球桿菌和革蘭陽性球菌，經(jīng)VITEK2-Compact全自動微生物分析儀鑒定為鮑曼不動桿菌和白念珠菌。

干預后未見培養(yǎng)基內(nèi)克隆生長。

3 討論

3.1 主要對策 (1)75%的酒精擦拭凈化工作臺及培養(yǎng)箱：酒精消毒。酒精屬于醇類消毒劑，其優(yōu)點為作用較快，性能穩(wěn)定，基本無腐蝕性，無毒，而且滲透能力強，進入細菌體內(nèi)使其蛋白質(zhì)凝固，從而殺死細菌。但其缺點為對細菌芽孢及鮑曼不動桿菌和白念珠菌無效。以巴氏消毒液消毒地面及操作臺面,并以紫外線照射過夜。巴氏消毒液有效成分是次氯酸鈉，有很強的氧化性，但仍對細菌芽孢無效，消毒后對培養(yǎng)基、凈化工作臺、培養(yǎng)箱及室內(nèi)空氣采樣培養(yǎng)，血平板仍見克隆生長。(2)甲醛(40%)10ml/m2,高錳酸鉀5g/m2，熏蒸細胞培養(yǎng)室：封閉熏蒸24h后，開窗通風，置換室內(nèi)空氣中的甲醛，并以75%的酒精拭凈化工作臺及培養(yǎng)箱。甲醛與高錳酸鉀反應產(chǎn)生甲醛氣體，甲醛氣體能使菌體蛋白質(zhì)變性凝固，溶解菌體類脂，殺滅物體表面和空氣中的細菌繁殖體、真菌芽胞和病毒[3-9]。消毒后對培養(yǎng)基、凈化工作臺、培養(yǎng)箱及室內(nèi)空氣采樣培養(yǎng)，血平板均未見克隆生長。

3.2 預防控制措施 (1)嚴格執(zhí)行細胞實驗室規(guī)章制度：在運行中不斷完善無菌實驗室規(guī)章制度，并加強無菌實驗室的管理。對外來的進修人員、實習學生進入實驗室前要接受培訓和教育，在掌握了一定的基本理論與實驗技能、操作規(guī)程等，并在帶教老師的指導下方可進行實驗操作。(2)培養(yǎng)箱、無菌室、凈化臺定期消毒：凈化工作臺實驗前紫外燈消毒30min，實驗后再用75%的酒精擦拭臺面，對生物樣本和實驗廢棄物進行高壓蒸汽滅菌后，丟棄醫(yī)療廢物桶，無菌室以甲醛(40%)10ml/m2,高錳酸鉀5g/m2濃度定期封閉消毒[10，11]，甲醛氣體必須分布到房間的每個角落。(3)杜絕感染源的產(chǎn)生：盡量減少實驗人員頻繁出入細胞實驗室，進入實驗室必須穿隔離衣，實驗操作時動作輕柔，避免微生物氣溶膠的產(chǎn)生。一旦發(fā)現(xiàn)細胞污染，應立即查明原因，采取有效可靠方法徹底清除污染源，阻止細胞大面積污染。(4)控制實驗室濕度與溫度：鮑曼不動桿菌和霉菌等廣泛存在于自然界中，屬于條件致病菌，有著很強的繁殖能力，溫暖潮濕的環(huán)境，就會大量滋生[12-18]。必須控制室內(nèi)溫度濕度，保持細胞室的干燥與清潔來阻止其繁殖或切斷其傳播途徑。

[1]Wedum AG.Control of laboratory airborne infection[J].Bacteriol Rev,1961,25(3):210-216.

[2]Mcgarrity GJ,Coriell LL.Mass airflow cabinet for control of airborne infection of laboratory rodents[J].Appl Microbiol,1973,26(2):167-172.

[3]Baig A,Cabral TM,Corbett CR.Development and characterization of monoclonal antibodies for rapid detection of acinetobacter baumannii[J].Monoclon Antib Immunodiagn Immunother,2014,33(4):291-298.

[4]Chaudhary M,Payasi A.Molecular characterization and in vitro susceptibilities of beta-lactamase producing Escherichia coli,Klebsiella species,Acinetobacter baumannii,Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus to CSE1034 and other beta-lactams[J].Asian Pac J Trop Med,2014,7(S1):S217-S223.

[5]Claeys KC,Fiorvento AD,Rybak MJ.A review of novel combinations of colistin and Lipopeptide or glycopeptide antibiotics for the treatment of multidrug-resistant acinetobacter baumannii[J].Infect Dis Ther,2014,3(2):69-81.

[6]Dahdouh E,Shoucair SH,Salem SE,et al.Mutant prevention concentrations of imipenem and meropenem against Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii[J].Scientific World,2014,2014:979648.

[7]Garcia-Quintanilla M,Pulido MR,Pachon J,et al.Immunization with lipopolysaccharide-deficient whole cells provides protective immunity in an experimental mouse model of acinetobacter baumannii infection[J].PLoS One,2014,9(12):e114410.

[8]Mo GX,She DY,Guan XZ,et al.Laboratory to Clinical Investigation of Carbapenem Resistant Acinetobacter baumannii Outbreak in a General Hospital[J].Jundishapur J Microbiol,2014,7(1):e13120.

[9]Guven T,Yilmaz G,Guner HR,et al.Increasing resistance of nosocomial Acinetobacter baumannii:are we going to be defeated?[J].Turk J Med Sci,2014,44(1):73-78.

[10]李勁松.病原微生物實驗室相關(guān)感染的原因及預防措施[J].中國預防醫(yī)學雜志,2003,4(3)232-234.

[11]費飛,趙越,王曉博.一起霉菌引起實驗室污染的調(diào)查[J].醫(yī)學動物防制,2006,22(11)811-812.

[12]章白苓,桂炳東,胡龍華,等.ICU鮑氏不動桿菌感染及耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學雜志,2013,23(13):1934-1938.

[13]Jacobs AC,Zurawski DV.Laboratory maintenance of acinetobacter baumannii[J].Curr Protoc Microbiol,2014,35:1G-6G.

[14]Kim Y,Bae IK,Lee H,et al.In vivo emergence of colistin resistance in Acinetobacter baumannii clinical isolates of sequence type 357 during colistin treatment[J].Diagn Microbiol Infect Dis,2014,79(3):362-366.

[15]Nait CY,Marti S,Rihouey C,et al.Characterisation of pellicles formed by Acinetobacter baumannii at the air-liquid interface[J].PLoS One,2014,9(10):e111660.

[16]Nguyen DQ,Ngo HP,Ahn YJ,et al.Expression,crystallization and preliminary X-ray crystallographic analysis of cystathionine beta-lyase from Acinetobacter baumannii OXA-23 [J].Acta Crystallogr F Struct Biol Commun,2014,70(Pt 10):1368-1371.

[17]Wang H,He Y,Xia Y,et al.Inhibition of gene expression and growth of multidrug-resistant Acinetobacter baumannii by antisense peptide nucleic acids[J].Mol Biol Rep,2014,41(11):7535-7541.

[18]徐嬌君,呂火祥,胡慶豐,等.替加環(huán)素對鮑曼不動桿菌的體外抗菌活性[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2010,28(4):355-356.