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    傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒細(xì)胞免疫功能變化及意義

    2015-06-05 08:39:52劉志強(qiáng)段榮柯江維
    關(guān)鍵詞:百分比亞群急性期

    劉志強(qiáng),段榮,柯江維

    (江西省兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科,江西 南昌330006)

    傳染性單核細(xì)胞增多癥(infectious mononucleosis,IM)是由 EB 病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染引起的淋巴細(xì)胞增生性傳染病,小兒時(shí)期常見。臨床上以發(fā)熱、咽峽炎、淋巴結(jié)及肝脾大、外周血中淋巴細(xì)胞增加并出現(xiàn)異型淋巴細(xì)胞等為特征[1.2]。近年來,隨著臨床免疫學(xué)研究的發(fā)展,本病免疫功能的改變受到更多的關(guān)注。DNT細(xì)胞 (CD3+CD4-CD8-T細(xì)胞)是新近發(fā)現(xiàn)的一類細(xì)胞表面既不表達(dá)CD4分子同時(shí)也不表達(dá)CD8分子的T細(xì)胞群,它屬于雙陰性調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞,對免疫應(yīng)答有抑制作用,是機(jī)體在感染、腫瘤及自身免疫等過程中進(jìn)行調(diào)節(jié)的關(guān)鍵因素[3]。本文通過檢測IM患兒不同病期外周血DNT細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞分化抗原(CD)的表達(dá)水平,并與健康兒童的相應(yīng)指標(biāo)作對比分析,觀察IM患兒細(xì)胞免疫狀態(tài)的變化及可能對預(yù)后的影響。

    1 資料與方法

    1.1 標(biāo)本來源 3例IM患兒均為本院血液科2011年9月至2013年7月收治的住院患兒。男36例,女27例。年齡12個(gè)月~9歲。均符合IM診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。健康對照組30例,均為同期體檢的健康兒童,男17例,女13例;年齡1~8.5歲。兩組間性別、年齡相比無顯著性差異(P>0.05)。

    1.2 檢測方法

    1.2.1 標(biāo)本采集 采集IM患兒急性期、恢復(fù)期及對照組健康兒童清晨空腹靜脈血lml,置含肝素抗凝管中,標(biāo)本2h內(nèi)檢測。

    1.2.2 淋巴細(xì)胞CD系列表達(dá)檢測 取美國BD公司CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE 鼠抗人熒光單克隆抗體混合試劑20ml,加入肝素抗凝血100μl,混勻,室溫避光孵育20min,分別加入紅細(xì)胞裂解液1ml,室溫避光放置 10min,1000r/min 離心 5min,棄上清液,用PBS洗滌2次,棄上清,加PBS 250μl上機(jī),采用BD公司FACSCanto流式細(xì)胞儀檢測受檢者外周血淋巴細(xì)胞CD3+CD4-CD8-淋巴細(xì)胞及CD3+、CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+淋巴細(xì)胞的百分率,采用BD FACSDiva軟件進(jìn)行結(jié)果分析。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSSl3.0軟件處理,數(shù)據(jù)以表示,組間均數(shù)比較采用配對和成組設(shè)計(jì)t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    急性期IM患兒DNT細(xì)胞、CD3+T細(xì)胞、CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞百分比顯著高于恢復(fù)期IM患兒和對照組兒童 (P<0.01),CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞百分比顯著低于恢復(fù)期IM患兒和對照組兒童 (P<0.01)?;謴?fù)期IM患兒DNT細(xì)胞、CD3+T細(xì)胞、CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞、CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞百分比與對照組比較無顯著性差異(P>0.05)。見表1。

    表1 IM患兒與對照組DNT細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群水平測定值(s,%)

    表1 IM患兒與對照組DNT細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群水平測定值(s,%)

    組別 n CD3+ CD3+CD4+CD8- CD3+CD4-CD8+ DNT急性期恢復(fù)期對照組63 63 30 85.22±4.31 68.96±1.41 66.89±8.23 20.76±5.13 51.24±4.38 52.64±6.25 62.14±8.21 37.66±5.21 35.42±6.28 10.17±4.16 6.09±1.82 5.64±1.61

    3 討論

    IM是兒童原發(fā)性EBV感染的典型表現(xiàn),有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)EBV對機(jī)體免疫功能的影響可能在IM的發(fā)病過程中起著重要作用[5]。典型的IM約80%是CD3+CD4-CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)擴(kuò)增活化,它們有良好的溶細(xì)胞能力,不僅能識別并殺死EBV感染的B細(xì)胞,抑制其分化增殖,還能通過釋放過量細(xì)胞因子導(dǎo)致IM癥狀[6]。所以IM患兒的癥狀不是病毒復(fù)制直接引起,而是T淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)的結(jié)果。亦有研究顯示T細(xì)胞激活程度和IM臨床癥狀嚴(yán)重程度有一定關(guān)聯(lián)[7]。因此監(jiān)測IM患兒細(xì)胞免疫功能的改變、掌握正常免疫個(gè)體T細(xì)胞亞群變化的規(guī)律有重要的臨床意義。

    本實(shí)驗(yàn)測定了IM患兒不同時(shí)期外周血淋巴細(xì)胞 CD3+、CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+的表達(dá),結(jié)果顯示:急性期CD3+、CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞百分比明顯增高,CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞百分比明顯降低,與林珊[8]報(bào)道一致。恢復(fù)期CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞百分比升高、CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞百分比降低,但與健康兒童無顯著性差異 (P>0.05),CD3+T細(xì)胞百分比與健康兒童比較無顯著性差異 (P>0.05),與金海榮等[9]的報(bào)道不相一致,是否因樣本因素或其它因素有待進(jìn)一步的觀察。

    在急性EBV感染后,大量EBV特異性CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞增殖,它們有很強(qiáng)的細(xì)胞毒作用功能,能殺滅感染的B細(xì)胞,并消除病毒[10]。而CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞在細(xì)胞免疫過程中起到免疫輔助作用,同時(shí)也具備殺傷功能,在維持EBV感染后細(xì)胞免疫反應(yīng)與被感染細(xì)胞清除的平衡中起到一定的作用[11]。本文中IM患兒急性期與對照組健康兒童比較CD3+CD4+CD8-T明顯下降,CD3+CD4-CD8+T明顯升高,而且CD3+CD4-CD8+T急性期與恢復(fù)期比較明顯升高且有顯著性差異(P<0.05)。分析原因由于IM患兒急性期CD3+CD4-CD8+T淋巴細(xì)胞大量擴(kuò)增以控制EBV誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增殖,而CD3+CD4+CD8-T淋巴細(xì)胞在輔助此過程中被消耗。

    以往研究發(fā)現(xiàn),在外周DNT細(xì)胞中存在去甲基化的CD8基因[12],對DNT細(xì)胞基因高保守序列進(jìn)行多個(gè)基因位點(diǎn)分析,得出DNT細(xì)胞的前體細(xì)胞可能是CD8+T細(xì)胞[13],以上研究暗示DNT細(xì)胞可能來源于CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞。體外研究表明,人類DNT細(xì)胞在體外被激活后可產(chǎn)生TNF-α,IFN-γ,而不分泌IL-4[14];從轉(zhuǎn)基因小鼠中純化出的DNT細(xì)胞可通過抑制同系基因型CD4+T細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞來發(fā)揮其免疫抑制功能[15]。而Kyttaris等[16]用IL-23R處理取自 MRL/lpr小鼠淋巴結(jié)的淋巴細(xì)胞可誘導(dǎo)出DNT細(xì)胞,此DNT細(xì)胞亦高表達(dá)IL-17,向淋巴細(xì)胞缺陷小鼠輸注此DNT細(xì)胞后可導(dǎo)致小鼠狼瘡樣腎炎發(fā)生。本研究發(fā)現(xiàn)急性期IM患兒DNT細(xì)胞是增多的,推測其可能因?yàn)镋BV的感染,導(dǎo)致大量EBV特異性CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞增殖,進(jìn)而促進(jìn)DNT細(xì)胞大量增殖,協(xié)同促進(jìn)炎癥反應(yīng)的加重。但對于IM患兒DNT細(xì)胞確切的作用及機(jī)理目前還不清楚。

    總之,IM是T細(xì)胞功能紊亂性疾病,檢測外周血DNT細(xì)胞與T細(xì)胞亞群變化對評估患兒的細(xì)胞免疫功能狀況,判斷病情預(yù)后具有十分重要的臨床意義,同時(shí),針對IM患者細(xì)胞免疫功能紊亂的狀態(tài),在原治療的基礎(chǔ)上進(jìn)行細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)治療,一定程度上可促進(jìn)病情恢復(fù),有效改善預(yù)后。

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