黃蜀葵花總黃酮定量研究

錢(qián) 芳 張 芹

江蘇省中醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 南京 210029

黃蜀葵花總黃酮定量研究

錢(qián) 芳 張 芹

江蘇省中醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 南京 210029

目的：用高效液相色譜法測(cè)定黃蜀葵花總黃酮中金絲桃苷的含量。方法：色譜柱：依利特-C18柱（250×4.6 mm，5μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速：1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm，柱溫：30℃。結(jié)果：金絲桃苷在11.4059～364.99μg/ml范圍內(nèi)與峰面積的積分值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r=1.0000），平均加樣回收率97.14%，RSD1.86%（n=6）。結(jié)論：HPLC法簡(jiǎn)便易行、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于測(cè)定黃蜀葵花總黃酮中金絲桃苷含量。

黃蜀葵花總黃酮；HPLC法；金絲桃苷

黃蜀葵花為錦葵科秋葵屬黃蜀葵（Abelmoschusmanihot L ·Medic）的干燥花。黃蜀葵花含豐富的黃酮類(lèi)化合物，可用于治療缺血性心臟病和缺血性腦血管病。黃蜀葵花總黃酮對(duì)缺氧損傷、急性心肌缺血具保護(hù)作用，并對(duì)不完全缺血性腦損傷有一定的保護(hù)作用［1-4］。有研究表明，主要由金絲桃苷為主的黃酮醇苷及其苷元組成黃酮類(lèi)成分［5］。文獻(xiàn)［6-8］報(bào)道的金絲桃苷的含量測(cè)定方法多為等度HPLC法，對(duì)于黃蜀葵花中金絲桃苷的有效分離檢測(cè)不易實(shí)現(xiàn)。本試驗(yàn)將梯度

HPLC法用于測(cè)定黃蜀葵花總黃酮中金絲桃苷的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀：Agilent1100，G1322A脫氣機(jī)，G1311A四元泵，G1316A柱溫箱，G1314A VWD檢測(cè)器，Agilent ChemStation，美國(guó)安捷倫公司；1/10萬(wàn)電子分析天平：BP-211D型，德國(guó)Sartorius；超聲波清洗器：KQ -1000E，江蘇昆山超聲儀器公司；電熱鼓風(fēng)干燥箱：101 -1A型，江蘇南通市滬通制藥機(jī)械設(shè)備公司；數(shù)顯型恒溫水浴鍋：HH-4，江蘇金壇榮華儀器公司。

1.2 試藥 金絲桃苷對(duì)照品（批號(hào)111521-201205），中國(guó)藥品生物制品檢定所購(gòu)買(mǎi)，含量測(cè)定用；黃蜀葵花總黃酮（批號(hào)141009、141010、141011），本實(shí)驗(yàn)室制備；液相色譜所用試劑：色譜純；水：超純水；其它試劑：分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：依利特C18柱（250×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液，進(jìn)行梯度洗脫：0～35min（16∶84），35～37min（30∶70），37～53min（30∶70），53～55min（16∶84），55～60min（16∶84）；檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm；柱溫：30℃；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量10μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取金絲桃苷對(duì)照品，精密稱(chēng)定，甲醇溶解制成1m l含729.98μg的溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取黃蜀葵花總黃酮100mg，置于25ml量瓶中，加入甲醇，超聲30min，放冷，再加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 取供試品溶液、對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10μl，在上述液相色譜梯度洗脫條件下，液相色譜圖中，金絲桃苷達(dá)基線分離，理論板數(shù)按金絲桃苷計(jì)在10000以上，分離度大于2.0。（見(jiàn)圖1）

圖1 HPLC圖

2.4 線性關(guān)系考察 取上述對(duì)照品溶液，用甲醇分別稀釋至364.99、182.495、91.2475、45.6238、22.8119、11.4059μg/ml，在高效液相色譜儀中，注入不同濃度的對(duì)照品溶液10μl，測(cè)定。經(jīng)線性回歸，得金絲桃苷回歸方程y=21.93x+27.36，r= 1.0000，金絲桃苷在11.4059～364.99μg/ml范圍內(nèi)，同峰面積的積分值呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 同一對(duì)照品溶液，精密吸取10μl后，注入液相色譜儀，重復(fù)測(cè)定6次，以峰面積計(jì)算，RSD為0.58%（n=6）。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 同一供試品溶液，于0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，RSD為0.84%（n=6），結(jié)果表明：供試品溶液12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（141009）的黃蜀葵花總黃酮，約100mg，共6份，精密稱(chēng)定，依法制備供試品溶液，測(cè)定，以金絲桃苷含量計(jì)算，RSD為1.21%（n=6）。結(jié)果表明，重復(fù)性較好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 根據(jù)加樣回收率試驗(yàn)的要求，取已知含量的黃蜀葵花總黃酮（141009）約50mg，共6份，精密稱(chēng)定后，加入金絲桃苷對(duì)照品，依法制備供試品溶液，液相色譜儀中注入精密吸取的10μl，測(cè)定，計(jì)算，平均回收率為97.14%，RSD為1.86%。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定 取3批黃蜀葵花總黃酮，每批2份，根據(jù)上述方法，制備供試品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算結(jié)果如下。見(jiàn)表2。

表2 含量測(cè)定結(jié)果表

3 討論

試驗(yàn)中曾參考藥典［9］：以乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）為流動(dòng)相，結(jié)果分離效果不好，又嘗試乙腈-0.1%磷酸溶液，不同比例等度洗脫系統(tǒng)，金絲桃苷未能有效分離，且分析時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。通過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，最后以乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脫：0～35min（16∶84），35～37min（30∶70），37～53min（30∶70），53～55min（16∶84），55～60min（16∶84），實(shí)現(xiàn)了較好的分離效果。

HPLC法測(cè)定黃蜀葵花總黃酮中金絲桃苷含量簡(jiǎn)便易行、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于其質(zhì)量控制。

［1］李春梅，安雅婷，王濤，等.中藥黃蜀葵花化學(xué)成分的分離與鑒定（Ⅲ）［J］.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，28（7）：520-525.

［2］范麗，郭巖，陳志武，等.黃蜀葵花總黃酮預(yù)處理對(duì)家兔心肌缺血再灌注損傷的影響［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2006，22（1）：106-109.

［3］李慶林，王成永，彭代銀，等.黃蜀葵花總黃酮對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006，12（2）：39-42.

［4］劉爽，江蔚新，吳斌.黃蜀葵化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展 ［J］.中國(guó)現(xiàn)代中藥，2010，12（8）：5-9.

［5］賴(lài)先銀，趙玉英，梁鴻.黃蜀葵花化學(xué)成分的研究 ［J］.中國(guó)中藥雜志，2006，31（19）：1597-1600.

［6］田元春，劉倩，韋水林，等.HPLC測(cè)定參杞強(qiáng)精膠囊中金絲桃苷含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（14）：149-151.

［7］韓霖，劉妍如，楊建云，等.貫葉連翹提取物中金絲桃苷含量的RPHPLC法測(cè)定［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23（10）：2432-2434.

［8］楊海麗.HPLC法測(cè)定加味水陸丸中金絲桃苷的含量 ［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，20（3）：72-73.

［9］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部 ［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：287.

Quantitative Study of Total Flavones of Abelmoschus Manihot

QIAN Fang ZHANG Qin
Pharmaceutical Department of Jiangsu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Nanjing 210029，China

Objective To establish a method for the determination of Hyperin in total flavones of Abelmoschus Manihot by HPLC.M ethods The elite C18column（250×4.6mm，5μm）was used，themobile phase was acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution with gradientelution.The flow rate was1.0ml/min，the detection wavelength was360nm，and column temperaturewas 30℃.Results The linear range of Hyperin was11.4059～364.99μg/m l（r=1.0000），the average recovery ratewas97.14%，and RSD was 1.86%（n=6）.Conclusion Themethod is simple，rapid，accurate and reliable.It can be used for the content determination of Hyperin in total flavones of AbelmoschusManihot.

Total Flavones of AbelmoschusManihot；HPLC；Hyperin

R284.1

A

1007-8517（2015）23-0014-02

2015.09.08）

江蘇省中醫(yī)藥局項(xiàng)目資助（LZ13063）。

錢(qián)芳（1975-），副主任中藥師，主要從事中藥制劑和新藥研究工作。E-mail：qfss1024@126.com