探析不同炮制方法對(duì)麻黃主要功效影響的機(jī)理

廖 芳，張 丹，蘭明輝，李春林

1成都市新都區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，四川 成都 610500；2瀘州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院

探析不同炮制方法對(duì)麻黃主要功效影響的機(jī)理

廖 芳1，張 丹2△，蘭明輝1，李春林1

1成都市新都區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，四川 成都 610500；2瀘州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院

目的：探索不同炮制方法對(duì)麻黃發(fā)汗與平喘藥效的影響。方法：制備生麻黃、清炒麻黃及蜜炙麻黃供試液，并制備生物堿、揮發(fā)油、醇溶性及水溶性部位。以大鼠為研究對(duì)象進(jìn)行足跖汗液分泌著色實(shí)驗(yàn)，比較炮制對(duì)麻黃發(fā)汗作用的影響，以豚鼠為研究對(duì)象進(jìn)行噴霧致喘實(shí)驗(yàn)，比較炮制對(duì)麻黃平喘作用的影響。結(jié)果：生麻黃、清炒麻黃、蜜炙麻黃的發(fā)汗作用由強(qiáng)至弱；揮發(fā)油部位、醇提部位、水提部位、生物堿部位的發(fā)汗作用由強(qiáng)至弱；生麻黃的揮發(fā)油部位的發(fā)汗作用最強(qiáng)。蜜炙麻黃、生麻黃和清炒麻黃的平喘作用由強(qiáng)至弱；生物堿部位、揮發(fā)油部位、醇提部位、水提部位的平喘作用由強(qiáng)至弱，蜜炙麻黃的生物堿部位的平喘作用最強(qiáng)。結(jié)論：炮制降低了麻黃的發(fā)汗作用，增強(qiáng)了平喘的效果，還應(yīng)深入探討麻黃發(fā)汗及平喘的量效關(guān)系及作用機(jī)制。

炮制方法；麻黃；發(fā)汗；平喘；藥效研究

麻黃是一味常用中草藥，多分布于亞、美、北非、東南歐洲等地處干旱和荒漠區(qū)域[1-2]，為草麻黃(Ephedra sinica Stapf)、中麻黃(Ephedra intermedia Schrenk et C.A.Mey.)或木賊麻黃(Ephedra equisetina Bge.)的干燥草質(zhì)莖，辛、微苦，溫。具有發(fā)汗散寒，宣肺平喘，利水消腫的功效[3]。在我國(guó)，麻黃主要分布于內(nèi)蒙古、吉林、遼寧等地，其成分豐富，包括鞣質(zhì)、黃烷、黃酮、多糖、生物堿、有機(jī)酸、揮發(fā)油等，藥理作用也比較廣泛，臨床對(duì)其用藥的研究較多?，F(xiàn)代應(yīng)用的麻黃炮制品有生麻黃、蜜麻黃、炒麻黃等，已有報(bào)道證實(shí)麻黃蜜炙后可促進(jìn)平喘效果和緩和發(fā)汗作用[2-4]，但對(duì)其作用機(jī)制目的研究較少?，F(xiàn)擬通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探索麻黃發(fā)汗與平喘藥效經(jīng)清炒、蜜炙后變化的影響機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥材 麻黃（購(gòu)于四川新荷花中藥飲片有限公司）；生麻黃、清炒麻黃、蜜炙麻黃(實(shí)驗(yàn)室自制。生麻黃、清炒麻黃、蜜炙麻黃均分別配制用于發(fā)汗試驗(yàn)的含生物藥0.4 g/mL的溶液及用于平喘試驗(yàn)的含生物藥0.3 g/mL的溶液；取其提取部位分別配制用于發(fā)汗試驗(yàn)的含生物藥0.7 g/mL的溶液及用于平喘試驗(yàn)的含生物藥0.6 g/mL的溶液，如遇不溶于水的提取部位，則以吐溫80助溶[5]。

1.1.2 動(dòng)物 S D大鼠(體質(zhì)量180～200 g，清潔級(jí)，雌雄各半)；豚鼠(體質(zhì)量180～200 g，雌雄各半)，以上動(dòng)物均由瀘州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物科提供，許可證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第17號(hào)。

1.1.3 儀器 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(R205B，上海豫康)；超聲霧化器(型號(hào)C Z1YY A，珠海市南粵佳華公司提供)；循環(huán)水式真空泵(SH B-III，上海豫康)；紅外測(cè)溫儀(型號(hào)I M P AC IGA 740，德國(guó))。

1.1.4 試劑 吐溫80；氫氧化鈉、氯仿、無水乙醇、95%乙醇、鹽酸(分析純)；氯化乙酰膽堿(賽默默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司)；磷酸組織胺(上海金穗生物科技有限公司)；和田-高垣氏試劑A、B液。

1.2 方法

1.2.1 制備炮制品 1）生麻黃：麻黃原材料除去雜質(zhì)，切段備用。2）清炒麻黃：生麻黃段置鍋內(nèi)文火炒制10分鐘，直至色澤加深可聞及香氣飄出后，取出晾涼備用。3）蜜炙麻黃：煉蜜與開水混合均勻，再加入生麻黃攪拌均勻，悶潤(rùn)，置鍋內(nèi)文火炒制10分鐘，至顏色加深、觸摸不粘手后，取出，晾涼備用。

1.2.2 制備供試液 生麻黃、清炒麻黃、蜜炙麻黃分別加入10倍的水量浸泡半小時(shí)，回流提取，30分鐘后進(jìn)行過濾，濾渣再次加入8倍的水量，回流提取，約20分鐘左右過濾。將2次濾液混合均勻并進(jìn)行濃縮處理，形成含生藥1g/mL的溶液，再以生理鹽水配置成待測(cè)試劑。

1.2.3 制備提取部位樣品 生麻黃、清炒麻黃、蜜炙麻黃共制備四類提取部位樣品，分別為生物堿、揮發(fā)油、醇溶性及水溶性部位。

1.2.3.1 生物堿部位制備[6-7]生麻黃、清炒麻黃、蜜炙麻黃炮制品加入p H值為1~2的酸性水溶液（取1mo l/L H CL溶液加水配制）8倍量浸泡30分鐘后回流提取2小時(shí)，然后再進(jìn)行超聲提取1小時(shí)，過濾，濾渣再加入6倍量的酸性水溶液，超聲提取1小時(shí)，過濾；合并濾液，加入濃度5%的N aO H溶液，調(diào)濾液p H值至12~13。取2倍體積的三氯甲烷先后行3次萃取處理后，混合萃取液，回收三氯甲烷，殘?jiān)鼮樯飰A部位供試品。

1.2.3.2 揮發(fā)油部位制備生麻黃、清炒麻黃、蜜炙麻黃炮制品，粉碎，置于揮發(fā)油提取器中，加水適量，浸泡1小時(shí)，置電子調(diào)溫電爐上緩緩加熱至沸，提取24小時(shí)，放置至涼，加入適量乙醚萃取揮發(fā)油，待水與乙醚均勻分層后，取出乙醚層，無水硫酸鈉干燥，自然揮干乙醚，得具有特殊濃烈香味的深黃色油狀物，得麻黃揮發(fā)油供試品。

1.2.3.3 醇溶性部位制備經(jīng)蒸餾法提取后的藥渣加入乙醇8倍量，置于80℃水浴回流提取2小時(shí)后過濾，藥渣再加入乙醇6倍量，回流提取1小時(shí)后過濾，合并2次的提出液，得醇溶性部位供試品。

1.2.3.4 水溶性部位制備：經(jīng)三氯甲烷萃取處理的水層液體和酸水提取液經(jīng)減壓濃縮回收的水合并，p H值調(diào)節(jié)為中性，倒入藥渣內(nèi)，蒸餾法進(jìn)行提取24小時(shí)后過濾回收，回收的溶液即為水提部位供試品。

1.2.4 大鼠足跖汗液分泌著色實(shí)驗(yàn)（生品及炮制品） 取實(shí)驗(yàn)S D大鼠16只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組編碼，每組4只大鼠。取棉簽蘸無水乙醇對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠足跖部進(jìn)行清潔去污，I組為空白對(duì)照組，給予生理鹽水灌胃，Ⅱ組給予生麻黃供試液灌胃，Ⅲ組給予清炒麻黃供試液灌胃，IV組給予蜜炙麻黃供試液灌胃，4組所用試液體積相同。受試大鼠均仰位固定于固定器內(nèi)，使雙后肢充分暴露。待30分鐘后，將各受試大鼠足跖部位擦拭干凈，取和田-高垣氏試劑A液涂于足跖部皮膚上，干燥，涂和田-高垣氏試劑B液。取放大鏡觀察大鼠足跖皮膚的著色點(diǎn)顏色變化并計(jì)算著色點(diǎn)數(shù)量，每間隔10分鐘觀察并記錄1次，連續(xù)觀察3次。

1.2.5 大鼠足跖汗液分泌著色實(shí)驗(yàn)（不同提取部位） 大鼠足跖汗液分泌著色實(shí)驗(yàn)與“1.2.4”相同。選取20只S D大鼠，雌雄各半，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)分為5組，每組各4只受試大鼠，分別給予不同提取部位藥液及生理鹽水灌胃，包括Ⅰ組對(duì)照組（生理鹽水），Ⅱ組（生物堿部位），Ⅲ組（水提部位），Ⅳ組（醇提部位），Ⅴ組（揮發(fā)油部位）。觀察和記錄各組汗點(diǎn)數(shù)量。

1.2.6 豚鼠噴霧致喘實(shí)驗(yàn)（生品及炮制品） 取16只受試豚鼠隨機(jī)分為4組，每組4只，分別灌胃給予同等體積的生理鹽水、生麻黃供試液、清炒麻黃供試液和蜜炙麻黃供試液。給藥后30分鐘將豚鼠置于透明玻璃窗口內(nèi)噴入混合液（濃度0.1%的磷酸組織胺與2%的氯化乙酰膽堿以1∶1比例混合），觀察和記錄平喘潛伏期。

1.2.7 豚鼠噴霧致喘實(shí)驗(yàn)（不同提取部位） 取20只受試豚鼠隨機(jī)分為5組，每組4只，分別灌胃給予揮發(fā)油部位、醇提部位、水提部位及生物堿部位，實(shí)驗(yàn)方法和平喘效果檢驗(yàn)方法參照“1.2.6”。

2 結(jié)果

2.1 生麻黃及炮制品大鼠足跖汗液分泌著色實(shí)驗(yàn)結(jié)果 生麻黃、清炒麻黃、蜜炙麻黃的發(fā)汗作用由強(qiáng)至弱，麻黃及炮制品的發(fā)汗點(diǎn)數(shù)量與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 生麻黃、清炒麻黃、蜜炙麻黃對(duì)大鼠足跖發(fā)汗的影響作用比較

2.2 生麻黃不同提取部位大鼠足跖汗液分泌著色實(shí)驗(yàn)結(jié)果 揮發(fā)油部位、醇提部位、水提部位、生物堿部位的發(fā)汗作用由強(qiáng)至弱，揮發(fā)油部位和醇提部位的發(fā)汗點(diǎn)數(shù)量與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 生物堿、水提、醇提、揮發(fā)油提取部位對(duì)大鼠足跖發(fā)汗的影響作用比較

2.3 生麻黃及炮制品與不同提取部位的發(fā)汗作用交叉比較 生麻黃的揮發(fā)油部位的發(fā)汗作用最強(qiáng)，發(fā)汗點(diǎn)數(shù)量較生麻黃的醇提部位、清炒麻黃和蜜炙麻黃的揮發(fā)油部位高（P＜0.05）。見表3。

表3 生麻黃及炮制品與不同提取部位的大鼠足跖發(fā)汗作用交叉比較

2.4 生麻黃及炮制品豚鼠噴霧致喘實(shí)驗(yàn)結(jié)果 蜜炙麻黃、生麻黃和清炒麻黃的平喘作用由強(qiáng)至弱，與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

2.5 蜜炙麻黃不同提取部位豚鼠噴霧致喘實(shí)驗(yàn)結(jié)果 生物堿部位、揮發(fā)油部位、醇提部位、水提部位的平喘作用由強(qiáng)至弱，揮發(fā)油部位和生物堿部位的平喘作用與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表5。

表4 生麻黃、清炒麻黃、蜜炙麻黃平喘作用比較

表5 生物堿、水提、醇提、揮發(fā)油提取部位平喘作用比較

2.6 生麻黃及炮制品與不同提取部位平喘作用交叉比較 蜜炙麻黃的生物堿部位的平喘作用最強(qiáng)，平喘作用較蜜炙麻黃的揮發(fā)油部位、麻黃生品和清炒麻黃的生物堿部位高（P＜0.05）。見表6。

表6 生麻黃及炮制品與不同提取部位的平喘作用交叉比較

3 討論

麻黃在臨床應(yīng)用廣泛，近些年來其發(fā)汗和平喘功能受到關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)以S D大鼠及豚鼠作為研究對(duì)象，分別制備麻黃生品、麻黃炮制品、清炒麻黃及蜜炙麻黃，并利用各原材料提取生物堿、水提、醇提及揮發(fā)油部位進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，對(duì)麻黃的發(fā)汗及平喘藥效進(jìn)行比較，希望為臨床用藥提供更好的炮制和提取方案。

大鼠足跖汗液分泌著色實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，麻黃生品及炮制品對(duì)大鼠均有明顯的發(fā)汗作用，三者中以麻黃生品的發(fā)汗作用最強(qiáng)，在對(duì)不同提取部位的試品研究中顯示，揮發(fā)油部位對(duì)發(fā)汗的影響作用最大，其次是醇提部位，交叉研究結(jié)果顯示麻黃生品的揮發(fā)油部位具有最強(qiáng)的發(fā)汗作用。豚鼠噴霧致喘實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，麻黃生品及炮制品對(duì)豚鼠均有明顯的平喘作用，三者中蜜炙麻黃對(duì)豚鼠的平喘作用最強(qiáng)，在對(duì)不同提取部位的試品研究中顯示，生物堿部位對(duì)平喘的影響作用最大，其次是揮發(fā)油部位，交叉研究結(jié)果顯示蜜炙麻黃生物堿部位具有最強(qiáng)的平喘作用。

由此可見，對(duì)麻黃及炮制品的研究未來應(yīng)重視麻黃生品揮發(fā)油部位的發(fā)汗藥效及蜜炙麻黃生物堿部位的平喘藥效方面，并深入探討其發(fā)汗及平喘的量效關(guān)系及細(xì)胞學(xué)、分子學(xué)層次的作用機(jī)制。

[1] 甘國(guó)珺，安珍，王天河.河西地區(qū)常見麻黃種類簡(jiǎn)介[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技，2009（1）：44-45.

[2] 李佳蓮，方磊，張永清，等.麻黃的化學(xué)成分和藥理活性的研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2012，14（7）：21-23.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：300-301.

[4] 顏正華.中藥學(xué)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：80-83.

[5] 鐘凌云，祝婧，龔千鋒，等.炮制對(duì)麻黃發(fā)汗、平喘藥效影響研究[J].中藥藥理與臨床，2008，24（6）：53-55.

[6] 王艷宏，王秋紅，夏永剛，等.麻黃化學(xué)拆分組分的性味藥理學(xué)評(píng)價(jià)—麻黃化學(xué)拆分組分“辛溫”發(fā)汗、利水作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2011，18（6）：489-491.

[7] 侯小雙.相關(guān)因素對(duì)麻黃發(fā)汗作用及對(duì)麻黃堿煎出量影響的實(shí)驗(yàn)研究[D].石家莊:河北醫(yī)科大學(xué)，2013：19-22.

Exploration on Influencing M echanism ofD ifferentProcessing Methods on Main Functionsof MaHuang

LIAO Fang1,ZHANG Dan2△,LAN Minghui1,LIChunlin
1 Xindu District TCM Hospital of Chengdu City,Chengdu 610500,China; 2 Clinical Pharmacy School of Luzhou Medical College

Objective:To survey the influence of different processingmethods on perspiration and relieving asthma of MaHuang(Ephedra sinica Stapf).Methods:Probational liquids of raw MaHuang,fried MaHuang and fried MaHuang w ith honey were prepared,alkaloid,volatile oil,alcohol soluble and water soluble reigonswere established. Ratwas performed w ith plantar sweating secretion tinting experiments to compare the effects of the processingmethodson perspiration ofMaHuang,guinea pigswere studied in spray inducing asthma experiment to compare the effects of processing on relieving asthma of MaHuang.Results:The order of the perspiration was raw MaHuan g＞fried MaHuang＞fried MaHuang w ith honey;the perspiration in the order was volatile oil region＞alcohol extraction region＞water extraction region＞alkaloid region;the perspiration of raw MaHuang volatile oil region showed the strongest.The function of relieving asthma was in the order:fried MaHuang w ith honey＞raw MaHuang＞fried MaHuang;the function of relieving asthmawas in the order:alkaloid region＞volatile oil region＞alcoholextraction region＞waterextraction region,alkaloid region of fried MaHuang w ith honey showed the strongest function of relieving asthma.Conclusion:Processing could decrease the perspiration of MaHuang,increase the effects of relieving asthma, dose-effects relationship of perspiration and relieving asthma of MaHuang and itsmechanism should be further explored.

processingmethods;MaHuang;perspiration;relieving asthma;pharmacodynm ic study

R285.1

A

1004-6852(2015)08-0012-04

2014-10-25

廖芳（1975—）女，碩士學(xué)位，副主任中藥師。研究方向：中藥制劑及工藝、中藥制劑質(zhì)量控制。

△通迅作者：張丹（1975—），女，博士學(xué)位，副教授。研究方向：中藥新劑型、新工藝。