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    m icroRNA聯(lián)合PET-CT對(duì)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值

    2015-06-01 10:12:42許彤閻慧麗許挺
    中國(guó)醫(yī)療設(shè)備 2015年10期
    關(guān)鍵詞:頭頸部鱗狀準(zhǔn)確度

    許彤,閻慧麗,許挺

    山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院 a.耳鼻喉科;b.內(nèi)分泌科;c.影像科,山東 濟(jì)南250021

    m icroRNA聯(lián)合PET-CT對(duì)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值

    許彤a(chǎn),閻慧麗b,許挺c

    山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院 a.耳鼻喉科;b.內(nèi)分泌科;c.影像科,山東 濟(jì)南250021

    目的 探討一種新型microRNA試劑盒聯(lián)合正電子發(fā)射斷層/計(jì)算機(jī)斷層掃描(PET/CT)對(duì)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值。方法 選取40例行全身PET/CT檢查的頭頸部鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后病例,提取外周血標(biāo)本,應(yīng)用包含4種m icroRNAs的試劑盒診斷腫瘤術(shù)后轉(zhuǎn)移,并與病理診斷結(jié)果進(jìn)行比較,分析兩種檢查方法及聯(lián)合檢查的敏感性、特異性及準(zhǔn)確性。結(jié)果 40例病例中,28例經(jīng)病理診斷為頭頸部鱗狀細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移。m icroRNA試劑盒診斷頭頸部鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的靈敏度為96.43%,特異度為83.33%,準(zhǔn)確度為92.50%;PET/CT診斷的靈敏度為89.29%,特異度為91.67%,準(zhǔn)確度為90.00%;兩者聯(lián)合診斷的靈敏度為100%,特異度為83.33%,準(zhǔn)確度為95.00%。結(jié)論 PET/CT診斷頭頸部鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的特異性較m icroRNA試劑盒高,而敏感性不足,m icroRNA試劑盒對(duì)PET/CT診斷具有補(bǔ)充作用,兩者聯(lián)合應(yīng)用是診斷頭頸部鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的更為理想的方法。

    頭頸部鱗狀細(xì)胞癌;正電子發(fā)射斷層/計(jì)算機(jī)斷層掃描;m icroRNA;腫瘤標(biāo)志物

    頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(Head and Neck Squamous Cell Cancer,HNSCC)是世界第六大腫瘤,占每年世界范圍內(nèi)650,000新發(fā)癌癥病例的6%[1-5]。頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者中,約有30%~50%的病例手術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移[6],其生存時(shí)間與是否轉(zhuǎn)移密切相關(guān),因此早期發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移病灶對(duì)及時(shí)治療意義重大。常規(guī)影像學(xué)檢查手段(如B超、CT、MRI等)具有一定的局限性,作為CT和核醫(yī)學(xué)分子影像設(shè)備的結(jié)合,PET/CT檢查可輔助診斷術(shù)后轉(zhuǎn)移,發(fā)現(xiàn)潛在病灶,為更早發(fā)現(xiàn)病灶提供可能,但仍然會(huì)出現(xiàn)誤診或漏診;同時(shí),由于PET/CT價(jià)格較為昂貴,限制了其臨床應(yīng)用。而外周血microRNA,因其靈敏度高、穩(wěn)定性好、創(chuàng)傷性小,在腫瘤診斷中的應(yīng)用也越來越受到關(guān)注。本研究選取40例頭頸部鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后病例,行PET/CT檢查的同時(shí),采集外周血,應(yīng)用自行研發(fā)的microRNA試劑盒檢測(cè),旨在探討microRNA試劑盒聯(lián)合PET/CT在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后轉(zhuǎn)移中的診斷價(jià)值。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料

    選擇2007年1月~2014年2月于山東省立醫(yī)院醫(yī)學(xué)影像中心診治的40例頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者。其中,男28例,女12例,年齡35~76歲,平均(49.5±8.9)歲。舌鱗狀細(xì)胞癌10例,口底鱗狀細(xì)胞癌8例,喉鱗狀細(xì)胞癌5例,鼻腔鼻竇癌7例,牙齦癌4例,唇癌3例,下咽癌3例。所有患者均于本研究開始前于山東省立醫(yī)院行原發(fā)癌及對(duì)應(yīng)淋巴清掃術(shù),術(shù)后時(shí)間6~39個(gè)月,平均16個(gè)月;患者因術(shù)后查體、自覺不適、臨床懷疑腫瘤轉(zhuǎn)移等原因,于山東省立醫(yī)院影像中心行PET/CT檢查。所有病例均在PET/CT檢查前取血清樣本。

    1.2 儀器與方法

    1.2.1 PET/CT檢查

    采用Discovery Lightspeed PET/CT機(jī),囑患者檢查前空腹4~6 h,控制血糖≤7.0 mmol/L,在安靜、避光、平臥狀態(tài)下,以3.7~5.55 MBq(0.10~0.15 mCi)/kg體重注射顯影劑。50~60 min后,采用三維采集及飛行時(shí)間(Time of Flight,TOF)采集技術(shù),確定掃描部位,檢查范圍自頭頂至大腿中部,共6~7個(gè)床位,每床位3 min,并對(duì)CT數(shù)據(jù)進(jìn)行衰減校正,采用迭代法獲得全身各方位重建的融合圖像。采用半定量方法進(jìn)行診斷,即最大標(biāo)準(zhǔn)攝取值(SUVmax)>2.5作為判斷陽性的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)初次檢查發(fā)現(xiàn)病變的部位于注射藥物后2 h進(jìn)行延遲掃描,同時(shí)排除正常生理性攝取。

    1.2.2 microRNA試劑盒檢查

    microRNA試劑盒包含4種microRNA的反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)引物,分別為:miR155、miR324、miR23a、miR181。引物設(shè)計(jì)參照文獻(xiàn),引物合成由上海生工生物技術(shù)公司完成。采用mirVana miRNA提取試劑盒(美國(guó)Ambio公司),miRcute miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒(中國(guó)天根生化公司),miRcute miRNA熒光定量檢測(cè)試劑盒(中國(guó)天根生化公司),MJMini梯度PCR儀(美國(guó)Biorad公司),IQ5 PCR實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)系統(tǒng)(美國(guó)Biorad公司)。

    所有患者均于PET/CT檢查前采集靜脈外周血,外周血經(jīng)3000 r/min離心,將分離出的血清置-80 ℃冰箱保存待測(cè),按照miRVana PARIS試劑盒的使用說明書進(jìn)行血清總RNA的提取。提取的總RNA進(jìn)行下一步的反轉(zhuǎn)錄,配制反應(yīng)體系,充分混勻后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。反應(yīng)總體積為20μL,反應(yīng)條件設(shè)定為95 ℃,10 min;95 ℃,15 s;60 ℃,1 min;40個(gè)循環(huán)。以5S rRNA為內(nèi)參,miRNA的表達(dá)量表示為F= 2-ΔΔct,計(jì)算公式為:-ΔΔct=ΔctmicroRNA-Δct5SrRNA。以4種miRNA試劑盒檢測(cè)結(jié)果中有任意不小于三種miRNA表達(dá)上調(diào)作為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

    1.3 臨床診斷方法

    所有患者均隨訪3個(gè)月,由2位副主任以上醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行診斷。根據(jù)以下條件診斷腫瘤是否轉(zhuǎn)移:①再次手術(shù)或活檢病理證實(shí)腫瘤轉(zhuǎn)移;②超聲、CT、MRI或后續(xù)PET/CT等影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)新發(fā)病灶或病灶增大;④臨床治療過程及病情發(fā)展。

    1.4 統(tǒng)計(jì)分析

    采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以臨床最終診斷為金標(biāo)準(zhǔn),計(jì)算PET/CT、microRNA試劑盒及聯(lián)合檢查診斷頭頸部鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度。計(jì)算公式:準(zhǔn)確度=(真陽性+真陰性)/(真陽性+假陰性+真陰性+假陽性)×100%;特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)×100%;靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%。

    2 結(jié)果

    2.1 臨床診斷結(jié)果

    40例病例中,28例經(jīng)臨床診斷為腫瘤術(shù)后轉(zhuǎn)移,其中15例經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí),13例經(jīng)其他影像學(xué)檢查及隨訪確診;另12例病例至2014年6月1日未發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移。

    2.2 PET/CT檢查結(jié)果

    40例病例中,26例經(jīng)PET/CT檢查為陽性,其中1例結(jié)合臨床診斷為不相關(guān)炎癥,25例結(jié)合臨床診斷為腫瘤轉(zhuǎn)移(圖1);14例陰性,其中3例結(jié)合臨床診斷為腫瘤轉(zhuǎn)移,11例至2014年6月1日未發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移(表1)。

    圖1 PET/CT影像

    表1 PET/CT檢查結(jié)果

    2.3 m icroRNA試劑盒檢查結(jié)果

    40例病例中,29例經(jīng)microRNA試劑盒檢測(cè)為陽性,其中27例結(jié)合臨床診斷為腫瘤轉(zhuǎn)移,2例至2014年6月1日未發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移;11例陰性,其中1例結(jié)合臨床診斷為腫瘤轉(zhuǎn)移,10例至2014年6月1日未發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移(表2)。

    表2 m icroRNA試劑盒檢查結(jié)果

    2.4 PET/CT聯(lián)合m icroRNA試劑盒檢查結(jié)果

    兩種方法有一種為陽性時(shí)判斷為陽性,同時(shí)為陰性時(shí)判斷為陰性。28例結(jié)合臨床診斷為術(shù)后轉(zhuǎn)移;10例為PET/CT陰性且microRNA試劑盒陰性(表3)。

    表3 PET/CT聯(lián)合microRNA試劑盒檢查結(jié)果

    2.5 統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果

    以臨床最終診斷為金標(biāo)準(zhǔn),應(yīng)用公式計(jì)算得,PET/CT診斷的靈敏度為89.29%,特異度為91.67%,準(zhǔn)確度為90.00%;microRNA試劑盒診斷的靈敏度為96.43%,特異度為83.33%,準(zhǔn)確度為92.50%;兩者聯(lián)合診斷的靈敏度為100%,特異度為83.33%,準(zhǔn)確度為95.00%。

    3 討論

    PET/CT與傳統(tǒng)CT、MRI等的成像原理不同,它是將解剖成像、葡萄糖代謝及功能顯像融合在一起的分子影像技術(shù),反映組織和病灶區(qū)域糖代謝的差異[7-9]。分析圖像時(shí),解剖及代謝的統(tǒng)一是確診的立足點(diǎn),但在日常診斷工作中,具有空間分辨率較低等缺點(diǎn),經(jīng)常會(huì)遇到解剖及代謝不統(tǒng)一的情況,給診斷帶來了不確定因素[10-11]。本研究中,以臨床最終診斷為金標(biāo)準(zhǔn),PET/CT診斷頭頸部鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的靈敏度為89.29%,特異度為91.67%,準(zhǔn)確度為90.00%,仍存在著假陽性、假陰性的誤判斷。同時(shí),由于PET/CT價(jià)格較為昂貴,限制了其臨床應(yīng)用。

    微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是一類全長(zhǎng)為19~25個(gè)核糖核苷酸的非編碼調(diào)控單鏈小分子RNA,由一段具有發(fā)卡環(huán)結(jié)構(gòu)的單鏈RNA前體剪切后生成,通過與目標(biāo)mRNA分子的3’-端非編碼區(qū)域(3-UTR)互補(bǔ)配對(duì),抑制目標(biāo)mRNA的翻譯,實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄后水平的表達(dá)調(diào)控。根據(jù)miRBase數(shù)據(jù)庫,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的miRNAs達(dá)9500多個(gè),大量研究發(fā)現(xiàn)microRNA與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。同時(shí),近年來的研究發(fā)現(xiàn),外周血miRNAs不僅具有穩(wěn)定的物理、化學(xué)狀態(tài),且其在腫瘤患者中的表達(dá)量與正常人明顯不同,越來越多的文獻(xiàn)報(bào)道其作為一種特異的腫瘤標(biāo)志物的價(jià)值。大量研究證明,外周血miRNAs在前列腺癌、胃癌、肺癌、結(jié)直腸癌和乳腺癌等發(fā)生的早期即有明顯的改變。

    在頭頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展、治療及預(yù)后等方面,microRNAs同樣起著重要作用,國(guó)內(nèi)外學(xué)者也做了大量相關(guān)研究。2009年Wong等[12]通過qRT-PCR技術(shù)分析了4種舌癌,結(jié)果發(fā)現(xiàn)早期舌癌患者與進(jìn)展性舌癌患者血液中的miR-184含量均明顯增高。而手術(shù)切除原發(fā)灶后,miR-184含量明顯下降。2010年Liu等[13]報(bào)道,口腔鱗癌患者血液中miR-31表達(dá)上調(diào),并且與年齡等因素相關(guān)。同時(shí),在手術(shù)切除腫瘤后,表達(dá)明顯下降。同年,Lin等[14]也發(fā)現(xiàn),miR-24在口腔鱗癌患者的血液中過表達(dá)。2011年,Yang等[15]發(fā)現(xiàn)組織與血液中miR-181的過表達(dá)與口腔鱗癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不良預(yù)后有密切相關(guān)性。2012年,Maclellan[16]通過對(duì)原位癌等高風(fēng)險(xiǎn)口腔病損患者的血清進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)有15種miRNAs明顯上調(diào),而5種miRNAs(miR-16、let-7b、miR-338-3p、miR-223、miR-29a)明顯下調(diào)。本研究選取4種microRNA(miR-155、miR-324、miR-23a、miR-181)組成試劑盒,分析其在診斷頭頸鱗癌術(shù)后轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果表明,其靈敏度為96.43%,特異度為83.33%,準(zhǔn)確度為92.50%,較PET/CT更為靈敏,而特異性不足。

    本研究將microRNA試劑盒與PET/CT聯(lián)合應(yīng)用,診斷頭頸部鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后轉(zhuǎn)移,以任意一項(xiàng)陽性即判斷為轉(zhuǎn)移,兩項(xiàng)檢查均為陰性判斷為無轉(zhuǎn)移,特異性雖未提高,但其敏感性、準(zhǔn)確度明顯增加,是比較理想的檢查手段,對(duì)于指導(dǎo)再次手術(shù)或化療、放療后隨訪有重要意義。

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    App lication Value of Combination Value of M icro-RNA and PET-CT in Diagnosis of Postoperative M etastasis of Head and Neck Squamous Cell Cancers

    XU Tonga, YAN Hui-lib, XU Tingc
    a. Departm ent o f O to laryngo logy;b. Department of Endocrinology;c. Department of Imaging, Shandong Prov incia l Hosp ita l A ffiliated to Shandong University, Jinan Shandong 250021, China

    Ob jective To discuss the application value of positron em ission tomography/computed tomography(PET/CT)and m icro-RNA in diagnosis of post-operative metastasis of head and neck squamous cell cancers. Methods A ltogether 40 patients w ith surgical history of head and neck cancer simultaneously underwent the examination of PET/CT in combination w ith a micro-RNA kit that was comprised four micro-RNAs. The results were compared w ith the final diagnosis so as to analyze the sensitivity, specificity and accuracy of these two diagnosis methods. Results Of those 40 cases, 28 were found w ith metastases of head and neck squamous cell carcinoma as was diagnosed pathologically. The sensitivity, specifi city and accuracy of the m icro-RNA kit for diagnosis of metastasis were 96.43%, 83.33% and 92.50%. While, those of PET/CT were 89.29%, 91.67% and 90.00%, respectively. Promisingly, those by the detection of PET/CT combined w ith the micro-RNA kit were 100%, 83.33% and 95.00%. Conc lusion PET/CT showed higher specificity and lower sensitivity in assessment of postoperative metastasis of head and neck cancers than those by the m icro-RNA kit. The m icro-RNA kit detection may be used as a supplementary tool to PET/CT exam ination. Combined use of the two exam inations was an ideal strategy for detecting the metastases of head and neck cancers.

    head and neck squamous cell cancer;positron em ission tomography/computed tomography;micro-RNA;tumor markers

    R739.91;R814.42

    B

    10.3969/j.issn.1674-1633.2015.10.014

    1674-1633(2015)10-0051-04

    2015-03-02

    2015-04-02

    山東省科技發(fā)展計(jì)劃(2014GSF1181)。

    許挺,主管護(hù)師。

    通訊作者郵箱:d594251@163.com

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