復(fù)發(fā)性尖銳濕疣患者CD4+、CD8+T細(xì)胞及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)及其臨床意義

何曉華等

【摘要】目的探討復(fù)發(fā)性尖銳濕疣患者CD4+、CD8+T細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg細(xì)胞）的表達(dá)與臨床意義。方法收集22例復(fù)發(fā)性尖銳濕疣患者（觀察組）和24例正常對照者（對照組）的血清，采用流式細(xì)胞儀檢測外周血CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+T細(xì)胞和Treg細(xì)胞的表達(dá)水平。結(jié)果觀察組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的表達(dá)明顯低于對照組 （P<0.01），而Treg細(xì)胞的表達(dá)則明顯高于對照組 （P<0.01）。觀察組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的表達(dá)水平與患者的復(fù)發(fā)次數(shù)無顯著相關(guān)性（P>0.05）；Treg的表達(dá)水平與患者的復(fù)發(fā)次數(shù)呈顯著正相關(guān)（P<0.01）。結(jié)論復(fù)發(fā)性尖銳濕疣患者T細(xì)胞免疫功能低下，Treg細(xì)胞的表達(dá)水平與尖銳濕疣的復(fù)發(fā)密切相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】尖銳濕疣； CD4+T細(xì)胞； CD8+T細(xì)胞；CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

中圖分類號：R752.5+3 文獻標(biāo)識碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2015.04.007

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expressions and clinical significance of CD4+，CD8+T cells and CD4+CD25+Foxp3+regulatory T cells （Treg cells） of patients with recrudescent condyloma acuminatum.Methods22 cases of recrudescent condyloma acuminatum were selected as observation group，and 24 cases of normal controls as control group.Serum of both groups were collected，and flow cytometer was used to detect the expression levels of CD4+，CD8+，CD4+/ CD8+T cells and Treg cells in peripheral blood.Results The expression levels of CD4+， CD8+， CD4+/ CD8+T cells in the observation group were lower than those in the control group （P<0.01），while the expression levels of Treg cells in the former group were higher than those in the latter group （P<0.01）.The recurrent frequency of the patients had no significant correlation with the expression level of CD4+，CD8+，CD4+/ CD8+T cells in the observation group（P>0.05），but it had significant positive correlation with the expression level of Treg cells（P<0.01）.ConclusionPatients with recrudescent condyloma acuminatum have a low Treg cells immune function，and the recurrence of condyloma acuminatum has close relationship with the expression level of Treg cells.

【Key words】condyloma acuminatum；CD4+cell，CD8+Tcell；CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells

尖銳濕疣（Condyloma acuminatum，CA）是由人類乳頭瘤病毒 （Human papillomavirus，HPV）感染所致，是最常見的性傳播疾病之一，該病容易復(fù)發(fā)，傳染性強[1]。近年來，尖銳濕疣發(fā)病率逐年升高[2]。有研究顯示患者細(xì)胞免疫功能可能與CA的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸關(guān)系密切[1，3]。本研究通過觀察復(fù)發(fā)性CA患者細(xì)胞免疫水平，探討CA的發(fā)病機制，以便用于指導(dǎo)CA的治療、判斷預(yù)后。

1資料與方法1.1一般資料所有患者來自我院2013年1月～2014年2月性病科門診，按照就診順序收集22例復(fù)發(fā)性CA患者作為觀察組。觀察組男15例，女7例，年齡18～48歲，平均（36.28±9.70）歲，病程2個月～2年，平均（10.1±4.3）個月，復(fù)發(fā)次數(shù)2～6次。選擇在我院體檢中心健康體檢正常者24例作為對照組，其中男10例，女14例，年齡18～50歲，平均（30.68±10.01）歲。兩組年齡、性別等比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2病例入選和排除標(biāo)準(zhǔn)入選標(biāo)準(zhǔn)： ①符合尖銳濕疣的診斷標(biāo)準(zhǔn)：臨床表現(xiàn)為外生殖器、會陰、肛周部位有典型的乳頭狀、菜花狀或雞冠狀增生物；②5%醋酸白試驗陽性；③復(fù)發(fā)2次或2次以上；④在本次治療前未經(jīng)任何治療；⑤無結(jié)核、腫瘤、自身免疫性疾病，未合并其他性病，在治療前1個月內(nèi)沒有全身應(yīng)用抗病毒藥、免疫調(diào)節(jié)劑、中藥等藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期或哺乳期婦女；②精神障礙，難以溝通患者；③合并HIV、生殖器皰疹或者梅毒感染患者。

1.3實驗方法流式細(xì)胞儀檢測：抽取兩組受試者肝素抗凝血100 μl，加入淋巴細(xì)胞檢測試劑25 μl，混勻，室溫避光染色20 min；加入2 ml紅細(xì)胞裂解液，室溫避光放置10 min； 1500 r/min離心5 min棄上清液，加磷酸鹽緩沖液（PBS）2 ml，混勻；1500 r/min離心5 min棄上清液，加2%多聚甲醛PBS 500 ml固定，放置4℃～8℃冰箱待檢測。每管加細(xì)胞液100 μl，加入10 μl抗CD4 mAbPerCP、抗CD8mAbPerCP、抗CD4+CD25+Foxp3+ mAbPerCP，溫室避光放置15 min；紅細(xì)胞溶解液0.5 μl溶解紅細(xì)胞15 min；破膜劑Ⅰ、Ⅱ固定和破膜；加PBS 3 ml，1200 r/min離心5 min，棄上清；加細(xì)胞因子抗體，每份標(biāo)本分別加同型對照IgG1FITC；溫室避光放置15 min；加PBS 4 ml，1200 r/min，離心10 min，棄上清；適量PBS重懸細(xì)胞上流式細(xì)胞儀檢測；每份標(biāo)本檢測1萬個細(xì)胞，在 CD4+T淋巴細(xì)胞中，根據(jù)陰性對照試劑結(jié)果，以 CD25、Foxp3 設(shè)門，分析CD4+CD25+ Foxp3+細(xì)胞占 CD4+T淋巴細(xì)胞的比例。結(jié)果以陽性細(xì)胞百分率（%）表示并經(jīng)Cell Quest功能軟件進行參數(shù)獲取和數(shù)據(jù)分析。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，相關(guān)性采用直線相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果2.1兩組T細(xì)胞及Treg細(xì)胞的表達(dá)情況比較觀察組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的表達(dá)明顯低于對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；而Treg細(xì)胞的表達(dá)則明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表1。

2.2觀察組CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+T細(xì)胞和Treg細(xì)胞與復(fù)發(fā)次數(shù)的相關(guān)性分析觀察組CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+的表達(dá)水平與患者的復(fù)發(fā)次數(shù)無顯著相關(guān)性（r=0.555，P=0.352；r=-0.319，P=0650；r=0.239，P=0.284）；Treg的表達(dá)水平與患者的復(fù)發(fā)次數(shù)呈顯著正相關(guān)（r=0.612，P=0.002）。3討論細(xì)胞免疫是免疫活性T淋巴細(xì)胞所介導(dǎo)的一系列免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)功能。免疫活性T淋巴細(xì)胞可分為CD4和CD8兩個亞群，CD4 T細(xì)胞亞群根據(jù)它們細(xì)胞因子分泌模式和效應(yīng)子功能的不同又可極化為兩個亞群，即Th1和Th2細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，CA患者外周血有CD4和CD8細(xì)胞亞群數(shù)目及比例異常，并有Th1和Th2型細(xì)胞因子分泌異常，表達(dá)傾向于向Th2偏移[5～7]。Th2介導(dǎo)的細(xì)胞免疫功能障礙可能是HPV感染后病毒持久存在并復(fù)制致尖銳濕疣治療后反復(fù)復(fù)發(fā)的病理基礎(chǔ)[5～7]。

前期的研究顯示CA患者的體液免疫缺陷[8，9]，但關(guān)于CA患者的細(xì)胞免疫功能的研究比較少。本研究旨在探討復(fù)發(fā)性CA患者細(xì)胞免疫水平，結(jié)果顯示，CD4+、CD8+細(xì)胞水平及CD4+/ CD8+的比值明顯低于對照組，提示CA患者細(xì)胞免疫功能低下，機體免疫監(jiān)測功能減低，HPV病毒復(fù)制，臨床表現(xiàn)為疣狀贅生物持續(xù)生長，本研究結(jié)果與黃永華等[4]的研究結(jié)果基本一致。Treg細(xì)胞是一類控制體內(nèi)自身免疫反應(yīng)的T細(xì)胞亞群。機體對抗原的免疫應(yīng)答是一把雙刃劍，反饋調(diào)節(jié)達(dá)到陰陽平衡，一方面清除有害抗原，另一方面又可造成機體損傷[10]。免疫平衡需要完善的調(diào)節(jié)機制。Treg細(xì)胞對維持機體免疫耐受和免疫應(yīng)答穩(wěn)態(tài)具有非常重要的作用，可以通過一系列機制抑制過強的免疫應(yīng)答，使得機體在自身損傷最小的情況下有效地清除抗原或病原體。本研究顯示復(fù)發(fā)性CA患者外周血Treg的表達(dá)水平明顯高于健康對照組，提示機體受到HPV病毒感染時，體內(nèi)T細(xì)胞向Treg細(xì)胞分化明顯加強，產(chǎn)生更多的Treg細(xì)胞來清除病毒。復(fù)發(fā)性CA患者CD4+、CD8+細(xì)胞水平下降，而Treg升高，這種免疫機理可能與病毒刺激機體誘導(dǎo)免疫反應(yīng)過程中，免疫正應(yīng)答與潛在免疫耐受誘導(dǎo)同時共存。

本研究結(jié)果顯示，CD4+、CD8+細(xì)胞水平及CD4+/ CD8+的比值與患者的復(fù)發(fā)次數(shù)無顯著相關(guān)性，但Treg細(xì)胞表達(dá)水平與患者的復(fù)發(fā)次數(shù)呈顯著的正相關(guān)，即復(fù)發(fā)次數(shù)越多，Treg細(xì)胞水平越高，提示尖銳濕疣患者在首發(fā)時檢測Treg細(xì)胞表達(dá)水平可判斷預(yù)后，對于高表達(dá)的患者給予更多的關(guān)注。黃永華等[4]的研究結(jié)果顯示CA患者抑郁情緒發(fā)生率為48.6%；CA患者抑郁組CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+和NK細(xì)胞的水平明顯低于非抑郁組，提示CA患者存在明顯抑郁情緒并與個人及社會因素相關(guān)，且抑郁者細(xì)胞免疫功能更為低下。本研究結(jié)果結(jié)合前期研究，提示復(fù)發(fā)性CA患者除了給予常規(guī)的物理、藥物治療外，還需要緩解患者的抑郁情緒，有助于提高機體細(xì)胞免疫功能，減少CA的復(fù)發(fā)。參考文獻[1] 李嘉彥，羅育武，楊日東，等.復(fù)發(fā)性尖銳濕疣患者 HPV 感染模式和細(xì)胞免疫功能的分析[J].皮膚性病診療學(xué)雜志，2014，21（3）：197200.

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