蛹蟲草小分子肽增強(qiáng)胃癌細(xì)胞株SGC-7901對氟尿嘧啶化療的敏感性

張 楠 逄 利 凡文博 侯 玥 徐大海 王少坤 吳 揚(yáng)

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院急診科，吉林 長春 130021)

手術(shù)切除是目前胃癌最有效的治療方法，但單純手術(shù)治療難以達(dá)到治療目的，有些甚至無法進(jìn)行手術(shù)治療，如何改善胃癌細(xì)胞的化療敏感性是目前談?wù)摰臒狳c(diǎn)〔1〕。蛹蟲草(Cordyceps militaris)是一種重要的傳統(tǒng)中藥材，具有抗腫瘤，免疫調(diào)節(jié)，抗氧化，抑制炎癥反應(yīng)，延緩衰老等功效〔2〕。蛹蟲草的小分子肽具有促進(jìn)機(jī)體淋巴細(xì)胞增殖、增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能等作用，進(jìn)而提高機(jī)體抵御外界病原體感染的能力，并具有抗腫瘤功能，有可能為胃癌的治療帶來新希望。

1 材料與方法

1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料及試劑 胃癌細(xì)胞株SGC-7901，氟尿嘧啶(5-FU)，胎牛血清(10%FBS);胰蛋白酶(250 U/mg)，RPMI-1640、噻唑藍(lán)(MTT)。

1.2 蟲草小分子肽的提取 將購買的蛹蟲草制成小分子肽，采用高效凝膠過濾色譜法(HPGFC)測定，小分子多肽峰值分子量范圍為300～700 D。

1.3 SGC-7901細(xì)胞的培養(yǎng) 將購回的胃癌細(xì)胞SGC-7901采用含10%FBS的RPMI 1640培養(yǎng)液，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于37℃，含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。連續(xù)傳代培養(yǎng)得到2～3代處于對數(shù)生長期的細(xì)胞。處理后放入-80℃冰箱內(nèi)，48 h移入液氮中繼續(xù)保存。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方法 對胃癌細(xì)胞株SGC-7901進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，鋪96孔板，于常規(guī)培養(yǎng)48 h后按預(yù)設(shè)分組給藥:(1)對照組:SGC-7901親本株常規(guī)培養(yǎng);(2)實(shí)驗(yàn)組1:培養(yǎng)液中加入5-FU(1 200μmol/L);(3)實(shí)驗(yàn)組2:培養(yǎng)液中加入5-FU(1 200μmol/L)和蛹蟲草小分子肽5 mg/ml;(4)實(shí)驗(yàn)組3:培養(yǎng)液中加入5-FU(1 200μmol/L)和蛹蟲草小分子肽10 mg/ml;(5)實(shí)驗(yàn)組4:培養(yǎng)液中加入5-FU(1 200μmol/L)和蛹蟲草小分子肽20 mg/ml。于給藥后24 h倒置顯微鏡觀察觀察胃癌細(xì)胞SGC-7901的細(xì)胞形態(tài)變化。

各組中分別設(shè)置5-FU濃度梯度，使5-FU最終濃度分別為 (μmol/L):25，50，100，200，400，800，1 200，1 600。各組于給藥后24 h采用MTT法檢測細(xì)胞增殖活力，并計(jì)算腫瘤細(xì)胞增殖抑制率，以抑制率為縱坐標(biāo)，化療藥物濃度為橫坐標(biāo)，制成抑制率曲線。根據(jù)改良寇式法計(jì)算IC50，lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)，其中Xm=lg最大劑量，I=lg(最大劑量/相鄰劑量)，P=抑制率之和，Pm=最大抑制率，Pn=最小抑制率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 倒置顯微鏡觀察不同濃度蛹蟲草小分子肽對胃癌細(xì)胞株SGC-7901細(xì)胞學(xué)形態(tài)的影響 對照組光鏡下可見細(xì)胞貼壁生長，腫瘤細(xì)胞呈多邊形或菱形，胞體大，結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞之間連接緊密，局部細(xì)胞過度增殖導(dǎo)致細(xì)胞重疊、幾乎接近漂浮生長;實(shí)驗(yàn)組1胃癌細(xì)胞，多呈現(xiàn)菱形、細(xì)胞邊緣銳利，細(xì)胞間隙增大，細(xì)胞密度減低。實(shí)驗(yàn)組2、實(shí)驗(yàn)組3和實(shí)驗(yàn)組4，隨著蛹蟲草小分子肽濃度的增加，細(xì)胞密度逐漸減低，細(xì)胞邊緣趨于圓滑，細(xì)胞間隙逐漸增大，局部可見部分已經(jīng)固縮的腫瘤細(xì)胞及已經(jīng)死亡的細(xì)胞碎片。見圖1。

圖1 倒置顯微鏡觀察不同濃度蛹蟲草小分子肽對胃癌細(xì)胞SGC-7901形態(tài)的影響(×100)

2.2 SGC-7901對不同濃度5-FU的敏感性 各組SGC-7901對5-FU化療敏感性的IC50值，對照組為(1 206.3 ±53.2)μmol/L;實(shí)驗(yàn)組1為(1 069.4 ± 79.1)μmol/L，實(shí)驗(yàn)組2為(987.8 ± 40.5)μmol/L，實(shí)驗(yàn)組3為(943.1 ± 49.5)μmol/L;組間比較顯示，各實(shí)驗(yàn)組IC50的值明顯低于對照組(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組2和實(shí)驗(yàn)組3的IC50值明顯高于實(shí)驗(yàn)組1(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組3的IC50值明顯高于實(shí)驗(yàn)組2(P＜0.05)。見圖2。

圖2 胃癌細(xì)胞SGC-7901對不同濃度5-FU的化療敏感性

3 討論

5-FU是尿嘧啶的類似物，在細(xì)胞內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為氟尿嘧啶脫氧核苷酸，從而阻斷脫氧核糖尿苷酸被胸苷酸合成酶轉(zhuǎn)化為胸苷酸，干擾DNA的合成，同樣也可以干擾RNA的合成。5-FU被轉(zhuǎn)換成核苷酸后，被活躍分裂的組織及腫瘤所優(yōu)先攝取，是最早的應(yīng)用于臨床抗癌藥物之一，也是胃癌化療方案中的基礎(chǔ)用藥〔3，4〕。本研究結(jié)果顯示，在本實(shí)驗(yàn)采用的劑量范圍內(nèi)，蛹蟲草小分子肽對SGC-7901細(xì)胞的增殖具有抑制作用，其濃度越高，對胃癌細(xì)胞株SGC-7901的抑制作用越明顯。在本實(shí)驗(yàn)所采用的劑量范圍內(nèi)，蛹蟲草小分子肽可以提高SGC-7901對5-FU的化療敏感性，作用具有劑量依賴性。

1 趙 璐，趙愛光.老年胃癌的臨床特點(diǎn)及治療〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2012;32(23):5366-9.

2 Ng TB，Wang HX.Pharmacological actions of Cordyceps，a prized folk medicine〔J〕.JPharm Pharmacol，2005;57(12):1509-19.

3 Ferlay J，Shin HR，Bray F，et al.Estimates of worldwideburden of cancer in 2008:GLOBOCAN 2008〔J〕.Int JCancer，2010;127(12):2893-917.

4 孫秀睇，牧 人，周有尚，等.中國胃癌死亡率20年變化情況分析及其發(fā)展趨勢預(yù)測〔J〕.中華腫瘤雜志，2004;26(1):4-9.