對環(huán)磷腺苷葡胺注射劑含量測定方法的探討

趙悅輝 周立云

摘 要：本文主要對環(huán)磷腺苷葡胺注射劑中的有效成分含量進(jìn)行了測定，因此，本文重點(diǎn)對環(huán)磷腺苷葡胺注射劑含量測定方法進(jìn)行了探討分析，從而總結(jié)出以下相關(guān)結(jié)論，以供參考交流。

關(guān)鍵詞：環(huán)磷腺苷葡胺；注射劑；含量；測定方法

中圖分類號：R927 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

環(huán)磷腺昔注射劑是我國研發(fā)出的一種新型制劑，在國外并不任何相關(guān)產(chǎn)品以及標(biāo)準(zhǔn)體系。在環(huán)磷腺苷葡胺注射劑中，主要存在了兩種單一的化合物，一種是環(huán)磷腺昔，另一種則是葡甲胺，在目前環(huán)磷腺苷葡胺注射劑的制劑說明書中，生產(chǎn)廠家已經(jīng)明確標(biāo)識出了該類制劑中的主要成分是環(huán)磷腺苷葡胺，我國現(xiàn)行相關(guān)規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)中已經(jīng)對環(huán)磷腺苷葡胺含量有著明確的規(guī)定，普遍認(rèn)為葡甲胺和環(huán)磷腺芬為同一類的化合物，同歸對目前含量測定方法進(jìn)行研究分析之后，從而提出更加準(zhǔn)確、高效的含量測量計(jì)算方法，充分保障測定結(jié)果的精確合理性。

1 檢驗(yàn)?zāi)康?/p>

我們在對產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行檢查分析過程中，發(fā)現(xiàn)以下幾點(diǎn)問題：第一，在對制藥企業(yè)進(jìn)行調(diào)研時(shí)，觀察到各制藥企業(yè)普遍是將環(huán)磷腺苷和葡甲胺作為生產(chǎn)原材料，通過按照一定量的比例投入生產(chǎn)，其中，并沒有任何一家制藥企業(yè)將單獨(dú)的環(huán)磷腺苷葡胺作為原料。第二，目前我國尚未存在關(guān)于環(huán)磷腺苷葡胺的理化性質(zhì)的研究文獻(xiàn)。因此，針對這一點(diǎn)問題，我們需要對現(xiàn)行環(huán)磷腺苷葡胺注射劑含量的測定方法進(jìn)行考察，得出葡甲胺和環(huán)磷腺苷在色譜條件下產(chǎn)生的色譜行為，同時(shí)判斷出使用的含量計(jì)算方法是否準(zhǔn)確。

2 儀器與試劑

Waters 2695液相色譜儀，配2487紫外檢測器與2414示差檢測器；Sartorius BP211D電子天平；Sartorius PB一21。環(huán)磷腺昔標(biāo)準(zhǔn)品來自中國生物制品檢定研究院，葡甲胺、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、氨水、磷酸、構(gòu)株酸、冰乙酸、氫氧化鈉、三乙胺、四丁基澳化按等來自市售分析純，乙睛、甲醇為市售色譜純，水為純化水。環(huán)磷腺昔葡胺注射液與注射用環(huán)磷腺昔均為市場抽驗(yàn)獲得的上市藥品。

3 方法

3.1 色譜條件

本次環(huán)磷腺昔葡胺制劑抽驗(yàn)涉及到的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)共29份，其中23份采用H PLC法，流動相種類共有10種視表。用一八烷基硅烷鍵介硅膠為填充劑采用紫外檢測器與示差檢測器串聯(lián)，檢測波長為257nm或259nm，柱溫30℃。

3.2 供試品溶液的配制

精密稱取出適量的環(huán)磷腺和葡甲胺，其中，環(huán)磷腺苷將作為對照品。通過加水之后，制成相應(yīng)比例的溶液，用作定位。然后，分別稱取適量的環(huán)磷腺苷葡胺注射液，加水制成含有環(huán)磷腺苷成分的溶液，作為供試品溶液。

4 結(jié)果

在對環(huán)磷腺苷葡胺注射劑含量進(jìn)行測定時(shí)，通常都會采用液相色譜法，我們在對檢測器色譜圖示差進(jìn)行查看過程中發(fā)現(xiàn)，葡甲胺與環(huán)磷腺苷有著單獨(dú)的色譜峰。并且，在所有的流動相體系中，也并未出現(xiàn)過單獨(dú)的無環(huán)磷腺苷葡胺色譜峰，以下重點(diǎn)列舉了環(huán)磷腺苷葡胺色譜峰的流動相圖，如圖1、圖2、圖3所示。

5 討論

環(huán)磷腺苷屬于一種蛋白激酶致活劑，并且具有易用于水的物理性質(zhì)，我國相關(guān)醫(yī)藥學(xué)家在對環(huán)磷腺苷葡胺注射液進(jìn)行深入分析之后，重點(diǎn)對其溶解性問題進(jìn)行了改善。并在后期的臨床應(yīng)用過程中將環(huán)磷腺苷葡胺上市，其中主要是將環(huán)磷腺苷當(dāng)做對照品，同時(shí)對環(huán)磷腺苷葡胺注射劑中的環(huán)磷腺苷葡胺含量進(jìn)行準(zhǔn)確的計(jì)算，具體表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：

（1）由于環(huán)磷腺苷易于在水中微溶，但在加入少量的葡甲胺之后，對溶解性問題進(jìn)行了有效的抑制，使其理化性質(zhì)產(chǎn)生了明顯的變化，因此使得相關(guān)研究人員誤認(rèn)為生成了新的化合物。而葡甲胺屬于一種增溶劑，可以加大環(huán)磷腺苷的溶解濃度，這是因?yàn)楫?dāng)葡甲胺浸泡在水溶液中時(shí)，將會與環(huán)磷腺苷迅速結(jié)合在一起，從而形成復(fù)鹽。但是，以往內(nèi)這兩者的結(jié)合較為松散，很難形成穩(wěn)定性較高的化合物，因此無法獲取的高純度的環(huán)磷腺苷和葡甲胺反應(yīng)固體成品。

（2）在反向的色譜條件下，葡甲胺并未產(chǎn)生任何紫外信號，也沒有保留反相色譜柱。所以，在對液相色譜方法學(xué)進(jìn)行建立時(shí)，若是將十八烷基鍵合硅膠柱當(dāng)做主要的分析柱，紫外檢測器一般無法采集到紫外檢測器環(huán)磷腺苷葡胺注射劑中有關(guān)葡甲胺的信息。這就導(dǎo)致很多實(shí)驗(yàn)研究人員認(rèn)為制劑中的環(huán)磷腺苷峰就是環(huán)磷腺苷葡胺峰。并將現(xiàn)行的環(huán)磷腺苷作為對照品，同時(shí)計(jì)算出環(huán)磷腺苷葡胺含量。

從上面的檢測結(jié)果中我們可以看出，當(dāng)前很多含量測量方法是將環(huán)磷腺苷作為對照品，而采用環(huán)磷腺苷葡胺含量的計(jì)算方法并不合理，需要分別對環(huán)磷腺苷和葡甲胺進(jìn)行計(jì)算。

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