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    158例涂陰培陽(yáng)肺結(jié)核患者分離菌株耐藥情況分析

    2015-05-22 10:07:57周麗平侯雙翼劉勛李愛(ài)國(guó)趙丁源楊成鳳張玉皮琦羅軍民彭延
    中國(guó)防癆雜志 2015年6期
    關(guān)鍵詞:抗結(jié)核結(jié)核病肺結(jié)核

    周麗平 侯雙翼 劉勛 李愛(ài)國(guó) 趙丁源 楊成鳳 張玉 皮琦 羅軍民 彭延

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    ·論著·

    158例涂陰培陽(yáng)肺結(jié)核患者分離菌株耐藥情況分析

    周麗平 侯雙翼 劉勛 李愛(ài)國(guó) 趙丁源 楊成鳳 張玉 皮琦 羅軍民 彭延

    目的 了解湖北省涂陰培陽(yáng)肺結(jié)核患者分離菌株耐藥水平,為有效控制耐藥結(jié)核病提供依據(jù)。方法 采用WHO推薦的比例法,對(duì)湖北省內(nèi)的4個(gè)國(guó)家級(jí)耐藥監(jiān)測(cè)點(diǎn)2013年獲得的158例涂陰培陽(yáng)患者的臨床分離株進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)(簡(jiǎn)稱“藥敏試驗(yàn)”),其中一線抗結(jié)核藥物有異煙肼(H)、利福平(R)、鏈霉素(S)、乙胺丁醇(E)4種;二線抗結(jié)核藥物有卡那霉素(Km)、卷曲霉素(Cm)、氧氟沙星(Ofx)、對(duì)氨基水楊酸(PAS)、丙硫異煙胺(Pto)5種。采用Excel建立數(shù)據(jù)庫(kù),采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,對(duì)耐藥率的比較采用卡方檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果 分離的158 株菌株總體耐藥率為18.99%(30/158),耐多藥率為1.90%(3/158),一線藥物S的耐藥率最高為13.29%(21/158),二線藥物Cm的耐藥率最高為3.80%(6/158)。9種藥物耐藥率由高到低的順位分別為S 13.29%(21/158)、H 9.49%(15/158)、Cm 3.80%(6/158)、R 3.16%(5/158)、PAS 2.53%(4/158)、Km 1.90%(3/158)、E 1.27%(2/158)、Ofx 1.27%(2/158)、Pto 0.63%(1/158)。9種藥物均出現(xiàn)了耐藥菌株,共出現(xiàn)了15種不同耐藥形式。4種一線藥物耐藥率為15.82%,與湖北省1999年耐藥監(jiān)測(cè)4種一線藥物初始耐藥率17.5%比較基本持平,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.25,P>0.05)。結(jié)論 涂陰培陽(yáng)肺結(jié)核患者分離株有較高的耐藥率,應(yīng)引起重視,加強(qiáng)監(jiān)測(cè),進(jìn)行規(guī)范治療和管理。

    結(jié)核, 肺; 抗藥性, 細(xì)菌; 微生物敏感性試驗(yàn)

    我國(guó)結(jié)核病控制工作已經(jīng)取得較大的成效,實(shí)現(xiàn)了階段性目標(biāo),但耐藥結(jié)核病的流行,為結(jié)核病的有效控制增加了難度。近年來(lái),隨著耐藥結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷的逐步開展,全國(guó)和各省對(duì)結(jié)核病耐藥情況進(jìn)行了監(jiān)測(cè),但研究數(shù)據(jù)多來(lái)源于對(duì)涂陽(yáng)培陽(yáng)肺結(jié)核患者耐藥情況的分析,對(duì)涂陰培陽(yáng)肺結(jié)核患者耐藥情況尚少見(jiàn)報(bào)道。據(jù)我國(guó)肺結(jié)核疫情報(bào)告顯示,目前全國(guó)活動(dòng)性肺結(jié)核患者中絕大多數(shù)為涂陰肺結(jié)核患者[1],本研究通過(guò)收集158例涂陰培陽(yáng)肺結(jié)核患者菌株進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)(簡(jiǎn)稱“藥敏試驗(yàn)”),分析涂陰培陽(yáng)肺結(jié)核患者耐藥現(xiàn)狀。

    材料和方法

    一、研究對(duì)象

    1. 標(biāo)本的來(lái)源:湖北省浠水、麻城、天門、隨州4個(gè)國(guó)家級(jí)耐藥監(jiān)測(cè)點(diǎn)2013年1月1日至12月31日,共新登記活動(dòng)性肺結(jié)核患者2677例,發(fā)現(xiàn)涂陽(yáng)患者470例,涂陽(yáng)檢出率17.56%(470/2677),新登記的涂陰肺結(jié)核患者2207例;新登記的涂陰患者中男1613例、女594例,最大年齡88歲,最小年齡8歲,平均年齡(49.36±17.79)歲;將每位涂陰患者收集2份質(zhì)量較好的痰標(biāo)本,進(jìn)行分離培養(yǎng),獲得陽(yáng)性培養(yǎng)物168例,涂陰培陽(yáng)率為7.61%(168/2207);將168例陽(yáng)性培養(yǎng)物送省結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行菌種鑒定和藥敏試驗(yàn),轉(zhuǎn)種失敗1例,進(jìn)行菌種鑒定9株為非結(jié)核分枝桿菌,158株為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群;對(duì)158株結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行一、二線共9種抗結(jié)核藥物的敏感性檢測(cè)。

    2. 新登記的涂陰培陽(yáng)肺結(jié)核的界定:指從未用過(guò)抗結(jié)核藥物治療或用抗結(jié)核藥物化療不足1個(gè)月(因其他疾病應(yīng)用抗結(jié)核藥物治療除外),痰涂片檢查為陰性,痰培養(yǎng)檢查為陽(yáng)性的肺結(jié)核。

    二、實(shí)驗(yàn)方法

    1.涂片、培養(yǎng)和菌種鑒定: 按照中國(guó)防癆協(xié)會(huì)《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》[2]進(jìn)行。

    2. 藥敏試驗(yàn): 采用WHO《結(jié)核病藥物耐藥性監(jiān)測(cè)指南》[3]推薦的比例法對(duì)分離菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)檢測(cè)。對(duì)異煙肼(H)、利福平(R)、鏈霉素(S)、乙胺丁醇(E)4種一線抗結(jié)核藥物和卡那霉素(Km)、卷曲霉素(Cm)、氧氟沙星(Ofx)、對(duì)氨基水楊酸(PAS)、丙硫異煙胺(Pto)5種二線抗結(jié)核藥物進(jìn)行檢測(cè)。各含藥培養(yǎng)基內(nèi)的藥物濃度分別為:H 0.2 μg/ml,R 40 μg/ml,S 4 μg/ml,E 2 μg/ml,Km 30 μg/ml,Cm 40 μg/ml,Ofx 2.0 μg/ml,PAS 1.0 μg/ml,Pto 40.0 μg/ml。結(jié)果判定:以試驗(yàn)管(含藥培養(yǎng)基)菌落數(shù)與對(duì)照管(不含藥培養(yǎng)基)菌落數(shù)之比計(jì)算耐藥百分比,若耐藥百分比>1%則認(rèn)為受試菌對(duì)該抗結(jié)核藥物耐藥,<1%則為敏感[3-5]。

    3.實(shí)驗(yàn)材料:抗酸染色液、酸性羅氏培養(yǎng)基、改良羅氏培養(yǎng)基、菌種鑒定培養(yǎng)基和含藥培養(yǎng)基均購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司,結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv由國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室提供。

    三、質(zhì)量控制

    (1) 涂片鏡檢和培養(yǎng)的質(zhì)量保證按常規(guī)國(guó)家相關(guān)規(guī)定執(zhí)行[6-7]。(2) 藥敏試驗(yàn)由國(guó)家參比室對(duì)湖北省結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行藥敏試驗(yàn)質(zhì)量控制,參比室藥敏試驗(yàn)結(jié)果符合率達(dá)到要求,方可對(duì)收集臨床株進(jìn)行耐藥性檢測(cè)。(3)每批藥敏試驗(yàn)均用結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株(H37Rv敏感株)檢測(cè)含藥培養(yǎng)基的質(zhì)量。試驗(yàn)中,若高稀釋度菌液在對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)<20 CFU/ml,則從對(duì)照管傳代培養(yǎng),重復(fù)試驗(yàn)。

    四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    采用Excel建立數(shù)據(jù)庫(kù),對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行雙人錄入和復(fù)核,采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,對(duì)耐藥率的比較進(jìn)行卡方檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    一、抗結(jié)核藥物在158例涂陰培陽(yáng)患者中的耐藥率

    在158例涂陰培陽(yáng)菌株中,敏感菌株128株,耐任一藥物菌株30株,總耐藥率為18.99%(30/158),耐多藥(至少同時(shí)耐R+H)菌株3株,耐多藥率為1.90%(3/158)。其中不同形式耐4種一線藥物的耐藥率為15.82%(25/158),與我省1999年全省耐藥監(jiān)測(cè)4種一線藥物初始耐藥率17.5%基本持平,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((χ2=0.25,P>0.05)。5種二線藥物的耐藥率6.96%(11/158),4種一線藥物加Ofx和Km 2種二線藥物的耐藥率為17.72%(28/158)。9種藥物耐藥率由高到低的耐藥順位依次為S、H、Cm、R、PAS、Km、E、Ofx、Pto;S的耐藥率最高[13.29%(21/158)],Pto的耐藥率最低[0.63%(1/158)],二線藥物中Cm的耐藥率最高[3.80% (6/158)](表1)。

    二、不同抗結(jié)核藥物的耐藥形式在158例涂陰培陽(yáng)患者中的耐藥率

    9種藥物均出現(xiàn)了耐藥菌株,30株耐藥菌株共出現(xiàn)了15種不同耐藥形式,其中單耐藥13株,占43.33%(13/30),多耐藥14株,占46.67%(14/30),耐多藥3株,占10.00%(3/30),對(duì)R耐藥的5株菌株中3株同時(shí)耐H, 沒(méi)有出現(xiàn)廣泛耐藥菌株(表2)。

    表1 9種抗結(jié)核藥物在158例涂陰培陽(yáng)患者中的耐藥率

    表2 不同抗結(jié)核藥物的耐藥形式 在158例涂陰培陽(yáng)患者中的耐藥率

    三、不同特征涂陰培陽(yáng)患者的耐藥情況

    患者從未用過(guò)藥與用藥<1月,耐藥率分別為19.01%(27/142)和18.75%(3/16),耐藥率之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.00,P>0.05)。不同性別患者耐藥率分別為男19.66%(23/117)、女17.07%(7/41),耐藥率之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.20,P>0.05)。男女的各個(gè)年齡組的耐藥率情況見(jiàn)表3。

    討 論

    我國(guó)是全球22個(gè)結(jié)核病流行嚴(yán)重的高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一,同時(shí)也是全球27個(gè)耐多藥結(jié)核病流行嚴(yán)重的高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一[8],耐藥結(jié)核病的增多與傳播已成為全球結(jié)核病發(fā)病率急驟上升的原因之一,特別是耐多藥肺結(jié)核的發(fā)生對(duì)結(jié)核病的控制造成了極大的威脅[9],掌握結(jié)核病疫情和結(jié)核分枝桿菌耐藥情況,對(duì)結(jié)核病預(yù)防與控制具有非常重要的意義。目前國(guó)內(nèi)外耐藥監(jiān)測(cè)報(bào)道均以涂陽(yáng)肺結(jié)核患者及分離菌株耐藥情況為主,本研究對(duì)涂陰培陽(yáng)肺結(jié)核患者耐藥情況進(jìn)行了分析。

    一、耐藥疫情較嚴(yán)重,應(yīng)加強(qiáng)耐藥監(jiān)測(cè)

    本次涂陰培陽(yáng)肺結(jié)核患者分離的158株菌株中,9種藥物總耐藥率為18.99%,4種一線藥物耐藥率為15.82%,耐多藥率為1.90%,與我省1999年全省耐藥監(jiān)測(cè)4種一線藥物初始耐藥率17.5%(χ2=0.25,P>0.05)和初始耐多藥率2.1%(χ2=0.03,P>0.05)比較基本一致[10]。4種一線藥物加2種二線藥物(Ofx和Km)總耐藥率17.72%,略高于2008年全球72個(gè)國(guó)家和地區(qū)初治涂陽(yáng)17.00%的平均總耐藥率[11]。說(shuō)明湖北省涂陰培陽(yáng)肺結(jié)核患者分離株耐藥率較高,耐藥疫情比較嚴(yán)重,應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)患者的發(fā)現(xiàn)、治療與管理,加強(qiáng)結(jié)核病患者的耐藥監(jiān)測(cè)。

    二、耐藥譜廣泛,耐藥順位發(fā)生變化

    9種藥物均出現(xiàn)了耐藥菌株,且出現(xiàn)了15種不同耐藥形式,說(shuō)明涂陰培陽(yáng)菌株耐藥譜廣泛。耐藥率順位前五位為S、H、Cm、R、PAS,其中仍然以S耐藥率為高,目前結(jié)核病常規(guī)治療方案中, S不再是

    表3 各年齡組不同性別涂陰培陽(yáng)患者臨床分離株耐藥率

    應(yīng)用于患者治療的必選藥物,因此S高耐藥可能與早期主要應(yīng)用S抗結(jié)核和抗炎治療有關(guān),同時(shí)抗結(jié)核藥物治療不超過(guò)1個(gè)月與未用過(guò)抗結(jié)核藥物治療患者的分離株耐藥情況無(wú)差別,均說(shuō)明患者很可能是由于既往感染了具有耐藥性的菌株,為原發(fā)耐藥,原發(fā)耐藥是耐藥結(jié)核病產(chǎn)生的重要原因[12]。二線藥物中Cm、PAS耐藥率排位靠前,Cm排在總順位第三位,5種二線藥物均出現(xiàn)耐藥,說(shuō)明我省二線藥物使用廣泛,有待規(guī)范,二線藥物耐藥形式不容樂(lè)觀。R耐藥的5株菌株中同時(shí)耐H的3株,提示加強(qiáng)涂陰培陽(yáng)患者的R耐藥監(jiān)測(cè)有利于提高耐多藥患者的發(fā)現(xiàn)。

    三、年齡組間耐藥率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

    經(jīng)過(guò)單項(xiàng)有序卡方檢驗(yàn),年齡對(duì)藥敏試驗(yàn)結(jié)果的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。0~歲年齡組耐藥率最低(0.00%),20~歲年齡組耐藥率最高(29.27%)。與李靜等[13]、黨麗云等[14]、何佩賢等[15]報(bào)道的情況類似,可能與該年齡段人群生活壓力大、生活不規(guī)律、一些不良的生活習(xí)慣等導(dǎo)致其抵抗力下降,以及流動(dòng)性大、集體工作生活機(jī)會(huì)多導(dǎo)致感染機(jī)會(huì)增多,治療依從性較差等因素有關(guān)。在我國(guó)改革開放、經(jīng)濟(jì)發(fā)展的新形勢(shì)下耐藥趨勢(shì)在發(fā)生改變,應(yīng)加強(qiáng)對(duì)20~歲年齡段,特別是男性20~歲年齡段耐藥情況的研究,及時(shí)采取干預(yù)措施。

    涂陰培陽(yáng)患者實(shí)際上是痰涂片檢查時(shí)沒(méi)被發(fā)現(xiàn)而通過(guò)培養(yǎng)的方法發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌學(xué)陽(yáng)性患者。2010年全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查顯示,活動(dòng)性患者中涂陰患者占85.65%,其中涂陰培陽(yáng)率為14.17%,占活動(dòng)性患者的比例為12.14%[1],本研究涂陰培陽(yáng)率達(dá)到7.61%,說(shuō)明活動(dòng)性患者中存在相當(dāng)數(shù)量的涂陰培陽(yáng)患者,亦存在一定數(shù)量的耐藥患者,應(yīng)關(guān)注涂陰培陽(yáng)患者對(duì)結(jié)核病疫情及耐藥結(jié)核病疫情的影響。

    通過(guò)對(duì)涂陰培陽(yáng)患者耐藥情況的分析,發(fā)現(xiàn)涂陰培陽(yáng)患者耐藥情況比較嚴(yán)重,提示我們?cè)诮Y(jié)核病防治規(guī)劃制定和結(jié)核病防治策略實(shí)施過(guò)程中應(yīng)重視涂陰肺結(jié)核患者的發(fā)現(xiàn),將痰培養(yǎng)檢查納入結(jié)核病常規(guī)檢查項(xiàng)目,提高涂陰培陽(yáng)患者的發(fā)現(xiàn)率,加強(qiáng)涂陰培陽(yáng)患者的耐藥監(jiān)測(cè),及早發(fā)現(xiàn)耐藥患者,選擇適當(dāng)?shù)闹委煼桨?,?guī)范的進(jìn)行治療和管理,從而有效避免涂陰患者因治療不當(dāng)所致的治療失敗,避免耐多藥和廣泛耐多藥患者的產(chǎn)生。

    [1] 全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查技術(shù)指導(dǎo)組 全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查辦公室.2010年全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查報(bào)告.中國(guó)防癆雜志,2012,34(8):485-508.

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    (本文編輯:王然 薛愛(ài)華)

    Drug resistance analysis of 158 isolated strains from patients with smear-negative and culture-positive tuberculosis

    ZHOULi-ping,HOUShuang-yi,LIUXun,LIAi-guo,ZHAODing-yuan,YANGCheng-feng,ZHANGYu,PIQi,LUOJun-min,PENGYan.

    InstituteforTuberculosisControlandPrevention,HubeiProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention,Wuhan430079,China

    PENGYan,Email: 68633845@qq.com

    Objective To understand the drug-resistant level of strains isolated from patients with smear-ne-gative and culture-positive tuberculosis (TB) in Hubei, and to provide basis for effectively control drug-resistant TB. Methods Proportion method recommended by World Health Organization (WHO) was applied. Drug susceptibility test (DST) of H, R, S, E (the first-line anti-TB drugs) and Km, Cm, Ofx, PAS, Pto (the second-line anti-TB drugs) for 158 isolated strains from patients with smear-negative and culture-positive TB from 4 national drug-resistance monitoring sites in Hubei in 2013 was conducted. Database was established using Excel. Statistical analysis was performed with SPSS 16.0. Chi-square test was used to test drug-resistance rate withP<0.05 as statistically significant difference. Results The overall drug-resistance rate of 158 strains was 18.99% (30/158), and the multi-drug resistant rate was 1.90% (3/158). Specifically, the drug-resistance rates of S and Cm were 13.29% (21/158) and 3.80% (6/158), which were respectively the highest among the first line and the second line drugs. Moreover,the drug-resistance rates of 9 drugs from high to low were S 13.29% (21/158), H 9.49% (15/158), Cm 3.80% (6/158), R 3.16% (5/158), PAS 2.53% (4/158), Km 1.90% (3/158), E 1.27% (2/158), Ofx 1.27% (2/158) and Pto 0.63% (1/158). Drug-resistant strains appeared to 9 drugs, and there were a total of 15 different forms of resistance. All in all, the drug-resistance rate of 4 kinds of first-line drugs was 15.82%, which kept basically balance with the monitoring data 17.5% in Hubei in 1999 (χ2=0.25,P>0.05). Conclusion The drug resistance rates of the isolated strains from patients with smear-negative and culture-positive TB are higher, which should be paid attention to, we should strengthen surveillance, and standardize treatment and management as well.

    Tuberculosis, pulmonary; Drug resistance, bacterial; Microbial sensitivity tests

    10.3969/j.issn.1000-6621.2015.06.011

    430079 武漢, 湖北省疾病預(yù)防控制中心結(jié)核病防治研究所

    彭延,Email: 68633845@qq.com

    2015-01-29)

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