3種麻醉劑對(duì)哲羅親魚麻醉效果的比較

楊貴強(qiáng)，王占全，袁 丁，徐紹剛，賀 杰，馬國慶，周 云

(北京市水產(chǎn)科學(xué)研究所暨國家淡水漁業(yè)工程技術(shù)研究中心，北京100068)

哲羅(Hucho taimen)，鮭科，哲羅魚屬，它是生長速度最快、個(gè)體最大的鮭科魚類，體質(zhì)量可達(dá)數(shù)百斤［1-2］。該魚食性兇猛，應(yīng)激反應(yīng)較強(qiáng)，尤其是在親魚檢查和繁殖過程中，常常發(fā)生以下現(xiàn)象:魚本身劇烈掙扎而導(dǎo)致其體表鱗片脫落，人工擠卵易造成其內(nèi)臟損傷，繁殖后親魚損傷較大。

麻醉是用藥物或其它方法使有機(jī)體的全部或一部分暫時(shí)失去知覺。麻醉在魚類的實(shí)際生產(chǎn)和科研試驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用［3-5］，如魚類運(yùn)輸、魚苗注射、催產(chǎn)授精、標(biāo)志放流、血液取樣、性腺鑒定以及魚類解剖等方面。三氯叔丁醇引誘麻醉作用可能引起創(chuàng)傷的創(chuàng)口愈合延緩，但其常見于眼制劑中，刺激較小，鮮有損傷報(bào)道［6］;丁香油作為食品添加劑和牙科止痛劑已經(jīng)被使用了很多年，已經(jīng)被美國食品及藥物管理局認(rèn)證了作為可以在人類使用的一種安全物質(zhì)［7］，根據(jù)美國食品與藥物管理規(guī)定，丁香酚可以直接在食品中添加到質(zhì)量分?jǐn)?shù)100×10－6。苯氧乙醇的誘導(dǎo)劑量和致死劑量之間的安全范圍很小，使用時(shí)須控制好安全質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍;在魚類麻醉運(yùn)輸時(shí)可降低其排氨率［8］;而且如果對(duì)魚體反復(fù)麻醉，也可增加該魚體耐藥性［8］。

近年來三氯叔丁醇、丁香油和苯氧乙醇等麻醉劑在國內(nèi)外運(yùn)用較多［10-13］。筆者研究了3種麻醉劑在不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)下對(duì)哲羅鮭的麻醉效果，以及入麻時(shí)間與恢復(fù)時(shí)間的關(guān)系，同時(shí)將麻醉效果較好的麻醉劑用于模擬繁殖，以評(píng)估對(duì)應(yīng)激的緩解作用，旨在篩選有效的麻醉劑能夠使哲羅鮭在催產(chǎn)繁殖過程中保持魚體安靜，降低應(yīng)激反應(yīng)，減少人為操作過程中對(duì)魚體的傷害，從而提高繁殖后親魚成活率。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)用水是井水，水溫13～14℃，pH 7.75～8.03，DO＞9.0 mg/L。麻醉容器是矩形藍(lán)色塑料箱(容積約150 L)，需要9個(gè)塑料箱，每個(gè)箱內(nèi)裝水40 L。

1.2 麻醉劑

苯氧乙醇和三氯叔丁醇由國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，丁香油購于上海瀚思化工有限公司。苯氧乙醇、丁香油和三氯叔丁醇不易溶于水，使用時(shí)按質(zhì)量1:5比例溶于酒精，然后再溶于水。

1.3 試驗(yàn)魚

試驗(yàn)魚養(yǎng)于北京市水產(chǎn)科學(xué)研究所灤平試驗(yàn)基地，體質(zhì)量4.54～5.08 kg，體長70.9～75.3 cm。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 喪失觸覺階段和恢復(fù)階段的行為特征觀察 試驗(yàn)前先將試驗(yàn)魚放入便于撈取暫養(yǎng)池，停食24 h。隨機(jī)撈取9尾分別放入3個(gè)含有不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)梯度麻醉藥(40 L)的塑料箱內(nèi)，立即開始計(jì)時(shí)，達(dá)到深度麻醉后，記錄入麻時(shí)間，根據(jù)繁殖生產(chǎn)需要設(shè)計(jì)空氣中暴露時(shí)間間隔，達(dá)到要求后，輕輕的放入有輕微水流的環(huán)道槽內(nèi)，隨后記錄恢復(fù)時(shí)間。參考劉長琳等劃分入麻時(shí)間和恢復(fù)時(shí)間的時(shí)期(表2、表3)［13］。入麻時(shí)間分為5個(gè)階段，恢復(fù)時(shí)間分為4個(gè)階段。入麻時(shí)間和恢復(fù)時(shí)間用秒表記錄。入麻時(shí)間是從試驗(yàn)魚被放入麻醉劑開始，直到魚體完全失去反應(yīng)能力，鰓蓋張合微弱，魚腹部朝上為止;恢復(fù)時(shí)間是麻醉的魚從放入清水開始，到身體恢復(fù)平衡，鰓蓋張合有規(guī)律，并恢復(fù)到對(duì)外界的剌激產(chǎn)生反應(yīng)為止。

1.4.2 合適麻醉劑的篩選 每種麻醉劑設(shè)置3個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)梯度(表1)，各梯度設(shè)置3個(gè)平行，各平行收容試驗(yàn)魚1尾，微充氣。根據(jù)繁殖生產(chǎn)需要設(shè)計(jì)空氣中暴露時(shí)間間隔梯度分別為:三氯叔丁醇，90，180，270 s;丁香油，90，180，270 s;苯氧乙醇，60，180，300 s。

1.4.3 空氣暴露時(shí)間對(duì)哲羅親魚恢復(fù)時(shí)間的影響 依據(jù)試驗(yàn)1.4.2的試驗(yàn)結(jié)果，選用最適麻醉劑，在其有效質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍內(nèi)對(duì)哲羅親魚進(jìn)行麻醉后，根據(jù)人工催產(chǎn)和擠卵(精)的操作需要，將其在空氣中暴露60，120，180，240，300 s，之后轉(zhuǎn)入有微水流的環(huán)道槽內(nèi)恢復(fù)，記錄恢復(fù)時(shí)間，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)分別統(tǒng)計(jì)不同試驗(yàn)組的恢復(fù)時(shí)間，每組設(shè)平行3個(gè)，每個(gè)平行用魚1尾。

表1 3種麻醉劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)梯度Tab.1 Concentrations of 3 anaesthetics

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

通過Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和作圖，結(jié)果以mean±std表示，使用SPSS16.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05為顯著水平，P＜0.01為極顯著水平。

2 結(jié)果

2.1 哲羅鮭親魚麻醉階段和恢復(fù)階段的行為特征

在3種麻醉劑作用下，哲羅親魚在麻醉和恢復(fù)過程中表現(xiàn)出一系列明顯不同的行為特征(表2、表3)，據(jù)此可區(qū)分不同的麻醉或恢復(fù)階段。將哲羅親魚輕輕放入裝有麻醉藥的塑料桶內(nèi)，該魚的應(yīng)激發(fā)應(yīng)很強(qiáng)烈，呼吸頻率明顯加快，偶爾劇烈掙扎兩下(A1階段)，隨著藥物的吸收，魚體反應(yīng)能力逐漸降低，逐漸喪失觸覺，鰓蓋張合頻率減弱(A2階段)，直至觸覺完全喪失，但此時(shí)鰓蓋張合幅度略小，并且無規(guī)律(A3階段)，最后魚體失去平衡，腹部完全朝上，鰓蓋仍有小幅度張合(A4階段)，即此時(shí)進(jìn)入深度麻醉期。在空氣中暴露一定時(shí)間后，將麻醉魚輕輕放入微水流的環(huán)道槽內(nèi)進(jìn)行恢復(fù)，魚體在水中側(cè)臥或腹部朝上，首先是鰓蓋張合頻率逐漸增加(R1階段);隨后鰓蓋張合頻率規(guī)律均勻，尾鰭擺動(dòng)，魚體背部朝上，勉強(qiáng)維持平衡(R2階段);緊接著，魚體的反應(yīng)能力逐漸恢復(fù)，能夠保持身體平衡，并開始游動(dòng)(R2階段);最后，麻醉魚的觸覺完全恢復(fù)，呼吸正常，并且能夠迅速調(diào)整身體保持平衡。

表2 麻醉分期及各期的行為特征Tab.2 Anaesthesia stages and behavior characteristics of taimen during anaesthesia

表3 恢復(fù)分期及各期行為特征Tab.3 Recovery stages and behavior characteristics of taimen during recovery

2.2 3種麻醉劑麻醉哲羅親魚的麻醉效果

3種不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)麻醉劑對(duì)哲羅親魚的麻醉效果見表4、表5、表6。其中，三氯叔丁醇，入麻時(shí)間較長，可達(dá)到深度麻醉期，恢復(fù)時(shí)間也長;丁香油，入麻時(shí)間短，不能達(dá)到深度麻醉期，觸覺恢復(fù)快，但完全恢復(fù)所需時(shí)間較長;苯氧乙醇，入麻時(shí)間短，可達(dá)到深度麻醉期，恢復(fù)也快。隨著麻醉劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)的升高，試驗(yàn)魚的入麻時(shí)間不斷縮短，兩者呈負(fù)相關(guān)。魚體恢復(fù)所需要的時(shí)間與麻醉劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈正相關(guān)(表4、表5、表6)，隨著麻醉劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)升高，魚體恢復(fù)的時(shí)間也逐漸增加(P＜0.01)。

表4 哲羅親魚在不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)三氯叔丁醇麻醉液中的入麻、休克、蘇醒時(shí)間Tab.4 Anesthetizing time，exposure time，and recovery time for taimen(parent fish)in different concentrations of chlorobutanol

表5 哲羅親魚在不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)丁香魚麻醉液中的入麻、休克、蘇醒時(shí)間Tab.5 Anesthetizing time，exposure time，and recovery time for taimen(parent fish)in different concentrations of clove oil

表6 哲羅親魚在不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)苯氧乙醇麻醉液中的入麻、休克、蘇醒時(shí)間Tab.6 Anesthetizing time，exposure time，and recovery time for taimen(parent fish)in different concentrations of 2-phenoxyethanol

2.3 暴露時(shí)間對(duì)苯氧乙醇麻醉哲羅親魚恢復(fù)時(shí)間的影響

暴露時(shí)間對(duì)哲羅親魚恢復(fù)的影響見圖1。由圖1可知，隨著暴露時(shí)間延長，恢復(fù)時(shí)間也延長，二者呈正相關(guān)。3種不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的苯氧乙醇麻醉親魚的恢復(fù)時(shí)間y(s)與暴露時(shí)間x(s)之間可用線性方程表示，依次為:0.1‰的苯氧乙醇，y1=24.5x+65.9，(R2=0.990 3，60≤x≤300);0.3‰的苯氧乙醇，y3=26.5x+82.3，(R2=0.976 1，60≤x≤300);0.5‰的苯氧乙醇，y5=55.5x+176.0，(R2=0.999 8，60≤x≤300)。

圖1 暴露時(shí)間對(duì)哲羅親魚恢復(fù)時(shí)間的影響Fig.1 Effect of exposure time on the recovery time of taimen(parent fish)

3 討論

影響魚類麻醉效果的因子較多，其中麻醉劑的種類較為重要［14］，每一種麻醉劑都有各自的特點(diǎn)，因而不同類型的麻醉劑對(duì)同一種魚的麻醉效果也有所不同。本試驗(yàn)中，用三氯叔丁醇麻醉哲羅親魚，入麻時(shí)間和恢復(fù)時(shí)間均較長;用丁香油麻醉哲羅親魚，不能達(dá)到深度麻醉，且恢復(fù)時(shí)間也較長。因此三氯叔丁醇和丁香油雖能麻醉該魚，但效果不是很理想。通常，理想的麻醉劑需要同時(shí)滿足入麻快、恢復(fù)快、安全邊界寬、對(duì)人和魚體無害、低殘留［15-16］等要求。有研究者建議，最佳麻醉劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)應(yīng)在3 min內(nèi)使魚麻醉和5 min內(nèi)魚能恢復(fù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍內(nèi)選擇［16］。因此，本試驗(yàn)中測(cè)得苯氧乙醇麻醉哲羅親魚的安全效用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1‰～3‰。在此范圍內(nèi)，能夠有效的使魚麻醉，入麻和恢復(fù)快，可達(dá)深度麻醉期。麻醉過程中的時(shí)間分布便于擠卵(精)、抽血、標(biāo)記等操作而不傷魚。

3種不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的苯氧乙醇麻醉親魚的恢復(fù)時(shí)間y(s)與暴露時(shí)間x(s)呈線性關(guān)系。哲羅親魚在質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.3‰的苯氧乙醇藥液中浸泡93～97 s，達(dá)到深度麻醉后，在空氣中暴露60～300 s，魚體可在102～213 s內(nèi)全部復(fù)蘇，在此時(shí)間范圍內(nèi)可以進(jìn)行催產(chǎn)注射、擠卵(精)等操作而不傷害魚。而在質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1‰的苯氧乙醇藥液中浸泡131～137 s，使魚體深度麻醉后，在空氣中暴露60～300 s，魚體也能在89～191 s內(nèi)全部復(fù)蘇，但較前者相比，入麻時(shí)間稍長;在質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5‰的苯氧乙醇藥液中浸泡55～60 s，使魚體深度麻醉后，在空氣中暴露60～180 s，魚體也能在232～343 s內(nèi)全部復(fù)蘇，但較前者相比，恢復(fù)時(shí)間較長。因此，建議在對(duì)哲羅親魚進(jìn)行標(biāo)志、人工催產(chǎn)或擠卵(精)時(shí)，選用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.3‰的苯氧乙醇，藥浴93～97 s，這樣可以使魚體達(dá)到深度麻醉，而且入麻和恢復(fù)均較快，使麻醉劑對(duì)親魚的影響度降至最低。苯氧乙醇是一種低致敏，高效，廣譜的防腐殺菌劑［17］，價(jià)廉易得，且其代謝物能夠快速地從血液和組織中排出，不會(huì)誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生突變物質(zhì)，對(duì)人體健康無影響。

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