電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)抗甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體的性能驗(yàn)證及其在甲狀腺疾病中的診斷價(jià)值

羅浩元，雷艷梅，劉集鴻，曾濤，梁金霞

(惠州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 惠 州516001)

抗甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體 (Thyroid peroxidase antibody TPOAb)作為診斷、鑒別診斷、療效評(píng)估自身免疫性甲狀腺疾病的重要指標(biāo)，已廣泛應(yīng)用于臨床[1，2]。為了保證患者檢測(cè)結(jié)果的可靠性，確立臨床對(duì)使用該項(xiàng)目檢驗(yàn)報(bào)告的信心，本研究對(duì)羅氏Cobas e601配套的TPOAb試劑盒的性能進(jìn)行了核實(shí)驗(yàn)證，對(duì)TPOAb診斷自身免疫性甲狀腺疾病的臨床價(jià)值進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 一般材料 高、低值濃度混合血清標(biāo)本來(lái)自本院門診患者和健康體檢中心，樣本要求無(wú)溶血、黃疸和脂血。

1.2 儀器與試劑 德國(guó)Roche Cobas e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑(批號(hào)175454)、校準(zhǔn)品(批號(hào) 168471、168301 和 172212)。

1.3 方法

1.3.1 精密度 參照CLSI EP15-A2[3]文件執(zhí)行。采用高、低值2個(gè)水平濃度混合血清，每批每天重復(fù)測(cè)定3次，共測(cè)定5d，分別統(tǒng)計(jì)批內(nèi)不精密度(CV)和批間不精密度(CV)，并與廠商聲明的批內(nèi)CV和批間CV進(jìn)行比較，判斷標(biāo)準(zhǔn)：小于廠商聲明的不精密度則認(rèn)為精密度符合要求。

1.3.2 準(zhǔn)確度 對(duì)不同于當(dāng)前使用校準(zhǔn)品批號(hào)的另一校準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)，與被測(cè)校準(zhǔn)品的靶值比較，計(jì)算相對(duì)偏差[4]。判斷標(biāo)準(zhǔn)：相對(duì)偏差在±10%以內(nèi)。

1.3.3 線性范圍 參照CLSI EP6-A[5]文件執(zhí)行。收集覆蓋分析測(cè)量范圍的低濃度(L)和高濃度(H)的血清樣本， 將 L和 H樣本按 1L、0.8L＋0.2H、0.6L＋0.4H、0.4L＋0.6H、0.2L＋0.8H、1H 關(guān)系配制成 6 個(gè)系列樣本。每個(gè)樣本檢測(cè)2次取均值，以預(yù)期值為X，實(shí)測(cè)值為Y進(jìn)行回歸統(tǒng)計(jì)，得出回歸方程Y=b1X＋b0。 判斷標(biāo)準(zhǔn)：斜率 b1在 0.97～1.03 范圍內(nèi)，截距b0接近于0(作截距b0與0差異的t檢驗(yàn))，則直接判斷該測(cè)定方法的分析測(cè)量范圍在實(shí)驗(yàn)已涉及濃度范圍。

1.3.4 生物參考區(qū)間 參照CLSI C28-A3[6]文件執(zhí)行。標(biāo)本來(lái)自本院體檢中心(經(jīng)體格檢查無(wú)心、肺、腎等重要臟器疾病；甲狀腺功能6項(xiàng)指標(biāo)：血清TT3、FT3、TT4、FT4、TSH、TG 均正常； 經(jīng)其他特檢排除甲狀腺疾??；排除甲狀腺疾病家族史患者)的空腹血清，男、女各20例，年齡在18～65歲。檢測(cè)結(jié)果只允許有不超過(guò)10%的數(shù)據(jù)在廠商聲明的生物參考區(qū)間之外。

1.3.5 臨床診斷實(shí)驗(yàn) 對(duì)照組來(lái)自生物參考區(qū)間評(píng)價(jià)標(biāo)本40例，疾病組來(lái)自本院已確診的甲狀腺疾病患者 144例，男 66例，女 78例，年齡在 16～68歲，其中自身免疫性甲狀腺疾病組91例(Graves病48例、橋本氏甲狀腺炎43例)；非自身免疫性甲狀腺疾病組53例，甲狀腺疾病組均符合《中國(guó)甲狀腺疾病診治指南》[7]的診斷標(biāo)準(zhǔn)，疾病組和對(duì)照組的年齡、性別構(gòu)成比無(wú)顯著差異，檢測(cè)結(jié)果以TPOAb＞34IU／ml判為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS13.0軟件處理，陽(yáng)性率比較用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)獲得低、高水平濃度混合血清的批內(nèi)精密度和批間精密度均在廠家聲明的要求內(nèi)，表明TPOAb精密度良好。精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 TPOAb精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(IU／ml)

2.2 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 檢測(cè)系統(tǒng)先用TPOAb批號(hào)為168471的校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)，再對(duì)批號(hào)為168301和172212的TPOAb校準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定值與靶值比較，相對(duì)偏差在-3.01%～3.84%之間，表明檢測(cè)系統(tǒng)準(zhǔn)確度高。準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 TPOAb的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(IU／ml)

2.3 線性范圍實(shí)驗(yàn)結(jié)果 廠商聲明的線性為5～600IU ／ml。 選擇低(5.8IU／ml)、高(588.6IU ／ml)值新鮮混合血清，每份系列樣本重復(fù)測(cè)定2次，實(shí)測(cè)值和預(yù)期值見表3。以預(yù)期值為X，實(shí)測(cè)值為Y做線性回歸，得出回歸方程為Y=0.9861X+1.0995，r2=0.9999。 結(jié)果顯示，相關(guān)系數(shù) r2＞0.95，斜率在 0.97～1.03之間，截距1.0995與0比較不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t＝-0.71，P＝0.52)，表明 TPOAb 在 5.8～588.6IU／ml之間線性良好。

表3 6個(gè)系列樣本實(shí)測(cè)值和預(yù)期值(IU／ml)

2.4 參考區(qū)間實(shí)驗(yàn)結(jié)果 男性20個(gè)參考個(gè)體，TPOAb 在 9.2IU／ml～30.6IU／ml，檢測(cè)值均在廠商提供的生物參考區(qū)間(＜34IU／ml)之內(nèi)；女性20個(gè)參考個(gè)體，TPOAb 在 7.8IU／ml～36.1IU／ml， 有 1 例檢測(cè)值超出廠商提供的生物參考區(qū)間，因不同性別組參考區(qū)間不存在差異(t=2.04，P＞0.05)，故可以合并統(tǒng)計(jì)。40個(gè)參考個(gè)體中只有1例觀測(cè)值超出廠商提供的生物參考區(qū)間，根據(jù)C28–A3文件，廠商聲明的參考區(qū)間在本實(shí)驗(yàn)室可以轉(zhuǎn)移使用。

2.5 臨床診斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果 健康對(duì)照組與甲狀腺疾病組TPOAb陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2＝66.24，P＜0.01)；自身免疫性甲狀腺疾病組與非自身免疫性甲狀腺疾病組TPOAb陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2＝53.60，P＜0.01)。各組 TPOAb 陽(yáng)性率見表4。

表4 健康對(duì)照組與甲狀腺疾病組TPOAb陽(yáng)性率

3 討論

電化學(xué)發(fā)光免疫分析(ECLIA)是繼放射免疫、酶聯(lián)免疫、熒光免疫、化學(xué)發(fā)光免疫之后的新一代標(biāo)記免疫分析技術(shù)，與傳統(tǒng)的 EIA、RIA、CLIA法相比較，具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、示蹤物穩(wěn)定、標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍寬、不受樣品自然熒光干擾、無(wú)放射性污染、標(biāo)記物存儲(chǔ)時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)[8]。臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)配套檢測(cè)系統(tǒng)的精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍和生物參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證也是國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室ISO15189認(rèn)可的要求。利用CLSI EP15–A2文件可以使實(shí)驗(yàn)室通過(guò)最小的努力即可核實(shí)廠家聲明精密度性能，表1結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)得出高、低值樣本批內(nèi)和批間CV均小于廠商聲明的CV要求，表明檢測(cè)系統(tǒng)精密度良好。

保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性是醫(yī)療衛(wèi)生工作的需要和臨床實(shí)驗(yàn)室的工作目標(biāo)，分析有證參考物質(zhì)是評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度的主要方法之一，將實(shí)驗(yàn)結(jié)果與靶值比較，判斷偏倚是否與廠商聲明或其他規(guī)定的性能要求一致[9]。由于目前TPOAb在 CLIA′88和生物學(xué)變異的分析質(zhì)量要求中未提及，故參考其他腫瘤標(biāo)志物來(lái)設(shè)定本實(shí)驗(yàn)室TPOAb偏倚<10%。表2結(jié)果顯示，檢測(cè)4份校準(zhǔn)品的偏倚在(-3.01%～3.84%)之間，均符合分析質(zhì)量要求。在線性范圍評(píng)價(jià)中，TPOAb 在 5.8IU／ml～588.6IU／ml線性良好；由于TPOAb達(dá)到600IU／ml的血清標(biāo)本一時(shí)無(wú)法獲得，最高檢測(cè)588.6IU／m1，略低于廠家的最高檢測(cè)值，還需補(bǔ)充驗(yàn)證。

生物參考區(qū)間是臨床判斷健康與否的標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室必須保證給臨床提供的生物參考區(qū)間正確適用。最新的CLSI／國(guó)際臨床化學(xué)和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)(IFCC)參考區(qū)間建立指南建議采用轉(zhuǎn)移、引用和驗(yàn)證已經(jīng)建立的參考區(qū)間[10]。CLSI C28–A3文件提供3種方法來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)移的參考區(qū)間在本實(shí)驗(yàn)室是否適用：(1)系統(tǒng)性評(píng)審；(2)用20個(gè)參考值數(shù)據(jù)驗(yàn)證；(3)用60個(gè)參考值數(shù)據(jù)驗(yàn)證；本研究采用方法2進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示，廠商聲明的參考區(qū)間可以轉(zhuǎn)移使用。

為了評(píng)價(jià)TPOAb在甲狀腺疾病中的診斷價(jià)值，本研究選取144例已確診的不同類型甲狀腺疾病患者和40例健康人群進(jìn)行TPOAb水平分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TPOAb陽(yáng)性率在健康對(duì)照組與甲狀腺疾病組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2＝66.24，P＜0.01)，自身免疫性甲狀腺疾病與非自身免疫性甲狀腺疾病的TPOAb陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=53.60，P<0.01)，TPOAb 陽(yáng)性率在自身免疫性甲狀腺疾病中達(dá)78.2%，尤其在橋本氏甲狀腺炎患者中陽(yáng)性檢出率高達(dá)84.4%，與既往文獻(xiàn)報(bào)道一致[11]，表明TPOAb在自身免疫性甲狀腺疾病中具有重要臨床診斷價(jià)值。

綜上所述，羅氏Cobas e601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)TPOAb的基本分析性能符合質(zhì)量目標(biāo)要求，檢測(cè)TPOAb在診斷自身免疫性甲狀腺疾病中具有重要臨床價(jià)值，值得臨床推廣應(yīng)用。

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