1728例手足口病病原學檢測結果分析及臨床意義

謝海珍，祝曉靜，陸紅云

(宜春市疾病預防控制中心檢驗科，江西 宜 春336000)

手足口病(Hand foot and mouth disease,HFMD)屬丙類傳染病，由多種腸道病毒引起的常見傳染病，病原體20多種。主要病原體為腸道病毒71型(EV71)和柯薩奇病毒A組16型(CA16),以5歲以下兒童發(fā)病為主。臨床特征為發(fā)熱和手、足、口腔等部位皮疹或皰疹，少數患兒可出現(xiàn)中樞神經、呼吸系統(tǒng)損害，引發(fā)腦炎、急性弛緩性麻痹、腦水腫和心肌炎等，病情嚴重者可致死亡[1，2]。為掌握宜春市手足口病的流行規(guī)律，為制定有效的防控措施提供依據，對2011年1月-2013年12月宜春市手足口病病原學進行監(jiān)測，并對結果進行統(tǒng)計分析報告如下。

1 材料與方法

1.1 樣本來源 轄區(qū)各縣、市、區(qū)疾病預防控制中心負責采集、送檢及上報患者基本信息到市疾控中心手足口PCR檢測實驗室。標本采集方法、儲存、運送、處理按中華人民共和國衛(wèi)生部《手足口病預防控制指南(2009年版)》執(zhí)行。標本是宜春市各縣、市、區(qū)報告的HFMD病例的糞便、肛拭子、咽拭子、皰疹液。

1.2 方法與試劑 采用德國QIAGEN公司提供的試劑對RNA進行核酸提取,采用廣州中山大學達安基因股份有限公司提供的腸道通用、EV71和柯薩奇病毒A16型Real-Time PCR(PCR-熒光探針法,PCR-Fluorescence Probing)試劑盒進行檢測。

1.2.1 標本處理 咽拭和皰疹液直接提取核酸。糞便和肛拭子加入相應Hank’s液振蕩混勻制成懸液，2000r/min×5min,離心吸取上清液進行核酸提取。

1.2.2 病毒RNA提取 按照Viral RNA mimi Ex-traction Kit操作說明提取病毒RNA，提取RNA立即進行逆轉錄。

1.2.3 Real-Time PCR對腸道病毒通用型、腸道病毒71型、腸道病毒A組16型鑒別診斷。提取的病毒RNA按照達安基因試劑公司提供的試劑盒說明配置反應體系，經45℃反轉錄25min，94℃變性3min,再按 95℃×15s→55℃×45s，循環(huán) 40 次。 反應體系為25μl。熒光通道檢測選用FAM通道。

1.2.6 結果判斷 擴增曲線呈典型S型擴增曲線且Ct值≤34.8判為陽性，無典型S型擴增曲線且Ct值＞34.8判為陰性。

1.3 統(tǒng)計處理 采用SPSS17統(tǒng)計軟件。率的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 手足口病例標本檢測陽性率及構成 2011年1月-2013年12月共檢測手足口病例標本1728例，檢出EV71型、CA16型以及EV通用型陽性數共計1062例，陽性率為61.5%，各型陽性率見表1。 三年共計檢出EV71型413例，陽性檢出率為23.9%，陽性構成比為 38.9%(413/1062)；CA16型263例，陽性檢出率為15.2%，陽性構成比為24.8%(263/1062)；EV通用型 386例，陽性檢出率為22.3%，陽性構成比為36.3%(386/1062)。

表1 手足口病例標本檢測陽性率[n(%)]

2.2 手足口病例標本檢測重癥和監(jiān)測病例情況分析 1728份手足口病病例中，重癥標本222例，陽性數148例，陽性率為66.7%，監(jiān)測標本1506例，陽性數912例，陽性率為60.7%。其中2011年檢測重癥病例218例，2012年4例，2013年無重癥病例。重癥病例標本以EV71陽性為主,非重癥病例標本中EV71、CA16及其他腸道病毒陽性率相近。具體檢測情況見表2。

表2 手足口病檢測重癥和監(jiān)測病例情況分析[n(%)]

2.3 疑似手足口病不同類型標本分布 1062例陽性病例中，以咽拭子檢測數最多，糞便、肛拭子、皰疹液、咽拭子的陽性檢出率分別為83.3%、75.0%、65.7%、59.9%。經SPSS統(tǒng)計軟件χ2檢驗，各種標本的檢出率差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 手足口病例不同類型標本分布標本類型 檢測數 陽性數 陽性率(%)糞便肛拭子皰疹液咽拭子合計64 53 431 1287 1728 283 771 1062 83.3 75.0 65.7 59.9 61.5

2.4 手足口病病原體核酸檢測陽性病例性別分布1062例陽性病例中，男性672例，占63.3%(672/1062)，女性 390例，占 36.7%(390/1062)。男性患者明顯高于女性。但是經SPSS統(tǒng)計軟件χ2檢驗，EV71、CA16及其它通用型腸道病毒的檢出率在男女性別間的差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具體性別分布見表4。

表4 手足口核酸檢測陽性病例性別分布[n(%)]

2.5 手足口病原體核酸檢測陽性病例年齡分布陽性病例中，年齡最小的2個月，最大的48歲，以1歲~3歲以下幼兒咽拭子標本的陽性數最多，占總數的82.7%(878/1062)。具體年齡分布見表5。

表5 不同年齡患者腸道病毒的檢出情況[n(%)]

3 討論

宜春市自2011年1月至2013年12月，收到手足口病標本1728例，檢出陽性數1062例，陽性率為61.5%，這與周邊地市比較接近[3]，宜春市從2011年到2012年手足口病例出現(xiàn)小幅上升，但到2013年明顯回落；EV71陽性率差異明顯,從2011年的41.1%降到2013年的4.7%，EV71感染率呈逐年下降趨勢。在1062例陽性病例中，有386例為既非EV71也非CA16的其它腸道病毒引起。2011年廣州市HFMD病原譜分析也發(fā)現(xiàn)，除EV71和CA16外，廣州市存在CA6等多種腸道病毒，這些腸道病毒也可引起HFMD的流行[4]，因此建立多種HFMD病原譜監(jiān)測系統(tǒng)對防控HFMD有重要意義。重癥病例多由EV71型引起，與報道一致[5-6]，重癥病例發(fā)病人數在逐年降低。非重癥病例標本中EV71、CA16及其他腸道病毒陽性檢出率相近。手足口病例標本中以糞便檢出率最高，但各種標本的檢出率差別無統(tǒng)計學意義。由于糞便標本較難采集[7],特別是發(fā)病人數較多的暴發(fā)疫情,標本量的不足往往不能真實反映疫情的流行病學信息。而咽拭子標本的采集不但簡便易行,且從理論上講,咽部是手足口病相關病毒最早感染繁殖的部分,能夠最早采集到病毒[8]，所以通常會以咽拭子標本為主。男性患者明顯高于女性，可能是男孩好動。但病原體的各種型別分布在兩性間無差異。0~5歲的兒童是手足口病的高發(fā)人群，以1歲~3歲年齡組最為常見。這可能與該年齡段血清保護性抗體和免疫力相對較低，而幼托機構兒童聚集性強，幼兒本身衛(wèi)生防護意識較差，手足口病相互傳染性更大有關[9]。

2012年手足口病發(fā)病數、重癥數和死亡數較2011年同期上升明顯。衛(wèi)生部要求各地相關部門進一步做好手足口病等重點傳染病防控工作。2013年我市手足口病也得到了很好的控制。但是手足口病尚無安全有效的疫苗進行預防，發(fā)病以后無特效治療藥物，主要采用綜合性的防治措施。因此，對手足口病原體的流行病學分析有助于做好手足口病的防控工作。加強對公共場所及托幼機構衛(wèi)生的監(jiān)測力度，實行早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早報告、早隔離治療、早處理疫點[10]，堅持加強手足口病的疫情監(jiān)測與標本檢測,重點加強暴發(fā)疫情與重癥病例的監(jiān)測,對可能出現(xiàn)的聚集性發(fā)病異常信息及時組織核實、排查、全面落實應急處理措施,從而掌握其流行規(guī)律，為疾控部門的干預和決策提供及時而準確的實驗室依據。充分利用各種媒體,廣泛開展手足口病防治知識的宣傳教育。做好個人生活衛(wèi)生如勤洗手等，防止病從口入。提高居民的防控意識和水平，以便更好地預防和控制手足口的流行和暴發(fā)。

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