不同室溫下EDTA修復(fù)時間對P504S蛋白在前列腺癌組織中表達(dá)的影響研究

禤瑞霞

不同室溫下EDTA修復(fù)時間對P504S蛋白在前列腺癌組織中表達(dá)的影響研究

禤瑞霞

目的 探討不同室溫下EDTA修復(fù)時間對P504S蛋白在前列腺癌組織中表達(dá)的影響情況。方法 分析30例前列腺癌患者臨床資料, 將病理標(biāo)本分別在3種不同室溫下進(jìn)行抗原修復(fù), 分別每例標(biāo)本切9張片。觀察不同室溫下進(jìn)行抗原修復(fù)顯色反應(yīng)和背景顯色情況。結(jié)果 室溫8～10℃抗原修復(fù)30 min, 室溫18～20℃抗原修復(fù)20、25 min顯色反應(yīng)的準(zhǔn)確率最高, 背景顯色效果最好, P＜0.05, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 室溫8～10℃抗原修復(fù)30 min, 18～20℃抗原修復(fù)20、25 min對P504S蛋白在前列腺癌組織中表達(dá)顯色效果最好, 為病理診斷提供準(zhǔn)確依據(jù), 值得臨床推廣應(yīng)用。

不同室溫；EDTA修復(fù)時間；P504S蛋白；前列腺癌；表達(dá)；影響

前列腺癌屬于典型老年性疾病, 據(jù)美國癌癥協(xié)會統(tǒng)計(jì), 70%以上的前列腺癌患者年齡＞65歲, 其中60～79歲的發(fā)病率達(dá)0.17%, 我國發(fā)病年齡亦然［1］。目前, 已公認(rèn)前列腺癌的發(fā)病與高脂肪飲食有關(guān), 導(dǎo)致前列腺癌危險因素和保護(hù)因素的失衡, 在低危人群出現(xiàn)發(fā)病率明顯增高趨勢, 而且由于前列腺癌進(jìn)展緩慢, 致病因素的刺激往往在數(shù)十年后才能表現(xiàn)為發(fā)病率的增高, 在我國的發(fā)病率也存在上升趨勢［2］。本研究通過3種不同室內(nèi)溫度及3種不同的抗原修復(fù)時間對30例前列腺癌組織標(biāo)本進(jìn)行修復(fù)檢測比較, 探尋出適合廣東地區(qū)的最佳抗原修復(fù)時間, 現(xiàn)將研究結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取廣東省中山市中醫(yī)院病理科2012年3月～2014年5月收治的前列腺癌患者30例臨床資料進(jìn)行分析,選取患者的存檔蠟塊標(biāo)本進(jìn)行觀察, 其中手術(shù)切除標(biāo)本16例, 經(jīng)尿道電切標(biāo)本10例, 穿刺活檢標(biāo)本4例。將病理標(biāo)本分別在3種不同室溫(8～10℃、18～20℃、28～30℃)下進(jìn)行抗原修復(fù), 分別每例標(biāo)本切9張片。將每例的9張切片分為九組, 在相同室溫下分別進(jìn)行20、25、30 min的抗原修復(fù)。

1.2 試劑與方法

1.2.1 試劑 ①選擇福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司的產(chǎn)品：EDTA抗原修復(fù)液(pH=9.0)、兔抗人α-甲?；o酶A消旋酶(P504S)、快捷型酶標(biāo)羊抗鼠/兔IgG聚合物、DAB緩沖液、DAB底物、DAB色原、PBS磷酸鹽緩沖液。②上海宏茲實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)的環(huán)保透明劑、廣東汕頭西隴化工有限公司生產(chǎn)的酒精。

1.2.2 方法 石蠟組織切片脫蠟至水, 并浸泡于水中待用,取適量已稀釋成工作液的EDTA抗原修復(fù)液(按1：50比例)于高壓鍋中, 將高壓鍋置于電磁爐上, 大功率加熱至沸騰后將功率調(diào)至最小, 將置于耐高溫架上的切片放進(jìn)已沸騰的修復(fù)液中, 蓋上鍋蓋, 繼續(xù)加熱至噴氣1 min后將不銹鋼鍋離開電磁爐, 并用流水在高壓鍋外壁分別沖冼20、25、30 min (時間均從切片放進(jìn)修復(fù)液中計(jì)起), 冷卻至室溫后取出切片,流水沖洗3 min, 在離組織3 mm處用油筆畫圈后用PBS沖冼3次, 3 min/次, 滴加新鮮配制DAB顯色液100 μl, 室溫下染色3 min, 自來水沖洗, 蘇木素復(fù)染, 自來水沖洗10 min返藍(lán),再經(jīng)酒精梯度脫水, CR3透明, 中性樹膠封固, 鏡下觀察陽性細(xì)胞數(shù)量及染色強(qiáng)度, 并進(jìn)行對比、分析、記錄。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 以胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或者棕色顆粒表示陽性, 陰性表示為(-)、弱陽性表示為(+)、陽性表示為(++)。背景清晰表示為(-)、輕微的背景染色表示為(+)。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察在室溫8～10℃抗原修復(fù)20、25、30 min, 室溫18～20℃抗原修復(fù)20、25、30 min, 室溫28～30℃抗原修復(fù)20、25、30 min顯色反應(yīng)和背景顯色情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

不同室溫下EDTA修復(fù)時間下P504S蛋白在前列腺癌組織中表達(dá)情況：室溫8～10℃抗原修復(fù)30 min, 室溫18～20℃抗原修復(fù)20、25 min顯色反應(yīng)的準(zhǔn)確率最高, 背景顯色效果最好, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 不同室溫下EDTA修復(fù)時間下P504S蛋白在前列腺癌組織中表達(dá)情況(n)

3 討論

前列腺癌(PCa)是男性泌尿生殖系腫瘤中最為常見的一種, 屬于人類特有的疾病［3］。有資料顯示［4］, 在歐美前列腺癌死亡比例較高, 在北歐國家前列腺癌的發(fā)病率占男性腫瘤的首位, 在美國是男性癌癥死亡率的第二位, 僅低于肺癌。前列腺癌臨床診斷依據(jù)主要是腫瘤細(xì)胞的特異性、組織結(jié)構(gòu)和浸潤方式等, 一些前列腺癌往往在光鏡下不容易找到充足的診斷依據(jù), 進(jìn)行確診時相對困難, 尤其是一些穿刺活檢方式, 往往有一定的局限性, 進(jìn)而提高了病理學(xué)診斷的要求,選擇高敏感性的免疫組化方式進(jìn)行前列腺癌的確診具有重要的意義［5］。組織病理學(xué)組織通過甲醛固定, 在固定的過程中會形成醛鍵及羥甲基, 對抗原決定簇進(jìn)行封閉, 甲醛和蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián), 從而形成醛交聯(lián)蛋白, 對抗原進(jìn)行封閉, 促使抗原無法表達(dá)［6］。在通過甲醛進(jìn)行固定的過程中, 要通過酶消化或者熱抗原修復(fù)的方法來對蛋白和甲醛交聯(lián)化合物-醛鍵進(jìn)行割裂, 從而將抗原決定簇充分的暴露, 促進(jìn)其染色［7］?？乖迯?fù)的過程是石蠟切片免疫組化染色前用酶、表面活性劑、微波、金屬鹽等對抗原決定簇進(jìn)行暴露和修復(fù), 從而促使抗原充分的暴露, 進(jìn)而抗原在一定程度上得到恢復(fù), 抗原熱修復(fù)是一個免疫組化的重要步驟, 有可能由于不同條件引起陽性細(xì)胞和染色強(qiáng)度發(fā)生變化, 直接對染色結(jié)果和組織病理學(xué)的判定造成重大的影響［8］。P504S屬于前列腺癌的特異性標(biāo)記物, P504S蛋白多存在于過氧化物酶和線粒體上面,其屬于α甲?；o酶A消旋。P504S只是在前列腺癌和一些高級別皮內(nèi)腫瘤中呈現(xiàn)強(qiáng)陽性表達(dá), 但是在前列腺的良性腫瘤中表達(dá)較少。有資料顯示P504S表達(dá)和不同的Gleason分級具有明顯的差異性和等級的相關(guān)性, 因而P504S表達(dá)對于前列腺癌惡性程度評價具有重要的意義。P504S在前列腺腫瘤的診斷與鑒別診斷中發(fā)揮著越來越重要的作用, 另外由于室溫因環(huán)境變化可能有一定的改變, 對于不同室溫下EDTA修復(fù)時間, P504S蛋白表達(dá)是否存在一定的影響, 目前研究結(jié)果較少。

綜上所述, 室溫8～10℃抗原修復(fù)30 min, 18～20℃抗原修復(fù)20、25 min對P504S蛋白在前列腺癌組織中表達(dá)顯色效果最好, 可提高P504S在前列腺癌組織中著色強(qiáng)度及陽性表達(dá)率, 為病理診斷提供準(zhǔn)確依據(jù), 值得臨床推廣應(yīng)用。

［1］ 陳晨, 楊曉靜.EDTA的pH值和修復(fù)時間對CD138染色方法的效果比較.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志, 2008, 18(15):2253-2254.

［2］ 張世革, 邱雁, 邱梁, 等.P504S、EZH2和 pim-1在前列腺癌組織中的表達(dá)和意義.現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志, 2010, 2(6):354-355.

［3］ Kunju LP, Chinnaiyan AM, Shah RB.Comparison of monoclonal antibody (P504S) and polyclonal antibody to alpha methylacyl-CoA racemase (AMACR) in the work-up of prostate cancer.Histopathology, 2005, 47(6):587-596.

［4］ 陳建武, 王佩飛, 黃巨丹, 等.P504S、p63、 34βE12聯(lián)合檢測在前列腺癌病理診斷中的應(yīng)用.中國現(xiàn)代醫(yī)生, 2011, 49(17): 1-3.

［5］ 賽利佛, 張孝斌, 程帆, 等.聯(lián)合P504s/P63檢測應(yīng)用于前列腺癌診療的價值.武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2011, 32(3):378-380.

［6］ 丁佩芬, 楊道華, 戎丹平.前列腺癌中P504s、34βE12、P63的檢測及意義.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2012, 20(10):2095-2098.

［7］ 溫爽, 蓋宇, 宗華鳳, 等.前列腺癌組織 P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白表達(dá)及意義.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2013, 35(2):123-126.

［8］ 馮小蘭, 黃喜健, 農(nóng)勤高.前列腺癌術(shù)后 Gleason 分級與 PSA、 P504s、Ki-67蛋白表達(dá)相關(guān)性分析.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2014, 22(8):1907-1909.

Research of influence of EDTA repair time in different indoor temperature on expression of P504S protein in prostatic cancer tissue

XUAN Rui-xia.Guangdong Zhongshan City Hospital of Traditional Chinese Medicine, Zhongshan 528400, China

Objective To investigate influence of EDTA repair time in different indoor temperature on expression of P504S protein in prostatic cancer tissue.Methods Clinical data of 30 patients with prostatic cancer were analyzed.Their pathological samples were placed in 3 different indoor temperatures for antigen retrieval, and each sample was made into 9 slices.Chromogenic reaction and background chromogenic condition of antigen retrieval in different indoor temperature were observed.Results The accuracy of chromogenic reaction and effect of background chromogenic condition were in the best situation at 30 min of antigen retrieval in 8～10℃, and at 20 and 25 min in 18～20℃.P＜0.05, The difference had statistical significance.Conclusion Antigen retrieval in 8～10℃ for 30 min and 18～20℃ for 20 and 25 min have the best effect for expression of P504S portion in prostatic cancer tissue, and that can provide accurate reference for pathological diagnosis.It is worthy of clinical promotion and application.

Different indoor temperature; EDTA repair time; P504S protein; Prostatic cancer; Expression; Influence

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.09.007

2014-11-17］

528400 廣東省中山市中醫(yī)院