戊型肝炎病毒檢測(cè)方法學(xué)評(píng)價(jià)

孫俊紅 李雷花

戊型肝炎病毒檢測(cè)方法學(xué)評(píng)價(jià)

孫俊紅 李雷花

目的 為戊型肝炎病毒檢測(cè)選擇適當(dāng)?shù)姆椒?。方?使用抗-戊型肝炎病毒-IgG(HEV IgG)和抗-戊型肝炎病毒-IgM(HEV IgM)檢測(cè)方法對(duì)200份急性非甲非乙非丙型肝炎患者血清和200份健康人血清及50例散發(fā)性戊型肝炎患者血清進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 在急性非甲非乙型肝炎患者血清中,抗-HEV IgG、抗-HEV IgM和HEV RNA陽性率分別25.50%、18.50%和16.50%。在戊肝系列血清檢測(cè)中,抗-HEV IgG陽性率發(fā)病1個(gè)月內(nèi)為74.0%, 發(fā)病3個(gè)月94.0%, 6個(gè)月38.0%, 12個(gè)月35.4%, 24個(gè)月8.6%。抗-HEV IgM陽性率發(fā)病1個(gè)月內(nèi)為92.0%, 發(fā)病3個(gè)月34.0%, 6個(gè)月4.0%, 12個(gè)月1.0%?？?HEV IgM在發(fā)病初期產(chǎn)生, 多數(shù)在3個(gè)月陰轉(zhuǎn), 即抗HEV IgM陽性是近期HEV感染的標(biāo)志。而HEV IgG持續(xù)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng), 多數(shù)于發(fā)病后6～12個(gè)月轉(zhuǎn)陰, 但亦有持續(xù)幾年者。盡管大部分抗-HEV IgM陽性血清抗-HEV IgG也呈陽性, 但也確有少數(shù)抗-HEV IgG為陰性的。結(jié)論 抗-HEV IgM檢測(cè)是診斷戊肝近期感染最重要的方法, 抗-HEV IgG檢測(cè)對(duì)戊肝感染長(zhǎng)期鑒別診斷最為重要。

戊型肝炎病毒；戊肝病毒-IgG；戊肝病毒-IgM

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(HEV)引起, 是一種單股正鏈RNA病毒, 既往認(rèn)為戊肝主要經(jīng)消化道傳播, 由飲用被戊肝污染的水源或食用被污染的食物所致［1］。近年來, 隨著對(duì)戊肝傳播途徑的研究不斷深入, 經(jīng)血液傳播的直接和間接證據(jù)不斷積累, 為戊型肝炎病毒不同時(shí)期檢測(cè)尋找合適的方法也至關(guān)重要。作者利用酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(ELISA)和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)分別檢測(cè)了急性散發(fā)性戊肝血清中抗-HEV IgG、IgM及HEV RNA?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 血清標(biāo)本 患者血清來自濮陽市各醫(yī)院住院患者, 健康人血清來自濮陽正常人群。

1.2 抗-HEV IgG及IgM檢測(cè)方法［2］用抗-人IgGu鏈、抗人IgMu鏈包被反應(yīng)板, 每個(gè)樣本待測(cè)孔加入樣品稀釋液100 μl, 再加入待測(cè)樣本10 μl。置37℃水浴30 min；洗板5次,每孔加入酶結(jié)合物100 μl, 封板, 置37℃水浴30 min；洗板5次,每孔加入顯色劑A、B液各50 μl, 封板, 置37℃顯色10 min,每孔加終止液50 μl, 終止反應(yīng)。在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度A值, ≥Cut off值為陽性, 反之為陰性。根據(jù)對(duì)200份健康人群血清檢測(cè), 將Cut off 值定為0.25+陰性對(duì)照平均值。

2 結(jié)果

2.1 急性非甲非乙非丙型肝炎血清抗-HEV IgG、IgM及HEVRNA檢測(cè)結(jié)果 急性非甲非乙非丙型肝炎血清抗-HEV IgG、IgM和HEV RNA檢測(cè)共檢測(cè)急性非甲非乙非丙型肝炎血清200份, 健康人血清200份, 結(jié)果見表1。在抗-HEV IgM和HEV RNA均為陽性的血清中, 有4份抗-HEV IgG為陰性, 其余均為抗-HEV IgG也陽性。而在51份抗-HEV IgG陽性的血清中, 抗-HEV IgM陽性者占70.6%(36/51), HEV RNA陽性者僅占62.7%(32/51)。結(jié)果表明用抗-HEV IgG檢測(cè)戊肝高危人群, 陽性率明顯高于抗-HEV IgM及HEV RNA。

2.2 戊型肝炎患者抗-HEV IgG和IgM抗體檢測(cè)的比較分析55例HEV抗體陽性的患者血清, 抗-HEV IgG和IgM同時(shí)陽性的33份, 兩者一致率為60.0%；單獨(dú)IgG抗體陽性的22份, 占40.0%；單獨(dú)IgM抗體陽性的4份, 占7.3%。

2.3 戊型肝炎患者血清抗-HEV IgG、IgM及HEV RNA動(dòng)態(tài)檢測(cè)結(jié)果 對(duì)50例散發(fā)性戊型肝炎患者的系列血清檢測(cè)結(jié)果, 見表2。在發(fā)病1個(gè)月內(nèi), 46例抗-HEV IgM陽性者中, 37例抗-HEV IgG同時(shí)陽性, 9例抗-HEV IgG陰性；而37例抗-HEV IgG陽性中, 有35例抗-HEV IgM同時(shí)陽性, 2例抗-HEV IgM及HEV RNA陰性。50例戊肝患者血清中,抗-HEV IgG陽性和抗-HEV IgM陽性累計(jì)為97.5%。

結(jié)果表明, 抗-HEV IgM抗體出現(xiàn)時(shí)間早, 發(fā)病后1個(gè)月內(nèi)陽性率為92.0%(46/50), 2～4個(gè)月內(nèi)逐漸轉(zhuǎn)陰, 個(gè)別患者可持續(xù)1年。抗-HEV IgG檢出率在1個(gè)月后逐漸升高, 2～6個(gè)月陽性檢出率達(dá)到高峰, 且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng), 6～12個(gè)月逐漸轉(zhuǎn)陰, 個(gè)別持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng), 達(dá)2～3年。而HEV RNA檢出率和存在時(shí)間均比抗-HEV IgM和抗-HEV IgG低, 但HEV RNA檢測(cè)結(jié)果陽性, 即可判定為HEV感染, 為HEV感染的確證試驗(yàn)。

表1 急性非甲非乙非丙肝炎血清抗-HEV IgG、IgM及HEV RNA檢測(cè)［n(%)］

表2 戊肝患者血清抗-HEV IgG、IgM及HEV RNA動(dòng)態(tài)檢測(cè)結(jié)果［n(%)］

3 討論

抗-HEV IgG、抗-HEV IgM、HEV RNA這三項(xiàng)指標(biāo)在戊肝診斷中, 抗-HEV IgG檢測(cè)價(jià)值較大, 因其檢出率高, 所以較適用于戊肝篩查, 而抗-HEV IgM和HEV RNA較適用于HEV早期診斷。但抗-HEV IgG不足之處在于:多數(shù)患者抗-HEV IgG持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng), 因此抗-HEV IgG陽性無法區(qū)別是急性HEV感染還是既往感染。對(duì)于抗-HEV IgG陽性病例還應(yīng)輔以抗-HEV IgM或HEV RNA檢測(cè), 有助于區(qū)分急性和既往感染。抗-HEV IgM或HEV RNA陽性可診斷為急性感染, 但陰性不能排除戊型肝炎病毒感染, 對(duì)于戊型肝炎診斷, 國(guó)內(nèi)外雖有不少研究報(bào)導(dǎo), 但本研究可以看出, 三種檢測(cè)方法均有其優(yōu)點(diǎn)和局限, 尚需繼續(xù)深入研究?？?HEV的檢測(cè), 應(yīng)發(fā)展檢出率高、抗體出現(xiàn)早、抗體持續(xù)時(shí)間更短的試劑。HEV RNA在血中存在時(shí)間短, 其結(jié)果受抽血時(shí)間限制很大, 操作相對(duì)復(fù)雜, 費(fèi)用也高, 對(duì)于戊肝常規(guī)診斷價(jià)值不大。就目前的研究結(jié)果, 作者認(rèn)為對(duì)于戊肝診斷早期應(yīng)以抗-HEV IgM檢測(cè)為主, 以抗-HEV IgG檢測(cè)為輔, 對(duì)于發(fā)展期則應(yīng)抗-HEV IgG為主, 抗-HEV IgM為輔。

［1］ 阮冰, 馬亦林, 莊輝, 等.戊型肝炎患者病毒血癥的研究.中華預(yù)防雜志, 1997, 31(6):352-354.

［2］ 鄭英杰, 姜慶五, 張軍, 等.三種戊型肝炎診斷試劑可靠性的研究.中國(guó)肝臟病雜志, 2004, 12(1):16-17.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.18.052

2015-02-09］

457000 濮陽市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科