血漿循環(huán)microRNA檢測(cè)及其與冠心病關(guān)聯(lián)性探討

譚文亮 羅進(jìn) 陽(yáng)軍 劉震 羅義

血漿循環(huán)microRNA檢測(cè)及其與冠心病關(guān)聯(lián)性探討

譚文亮 羅進(jìn) 陽(yáng)軍 劉震 羅義

目的 探究血漿循環(huán)微小RNA(microRNA)在冠心病患者外周血中的表達(dá)水平以及臨床意義。方法 60例冠心病患者為觀察組, 另選取同期行體檢的60例健康人群作為對(duì)照組, 比較兩組患者血漿中microRNA的表達(dá)水平, 并對(duì)其差異進(jìn)行分析。結(jié)果 冠心病患者外周血中miRNA-130a、miRNA-126與miRNA-222的表達(dá)水平與正常健康人群相比, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 通過測(cè)定冠心病患者外周血中miRNA-126與miRNA-222的表達(dá)水平能初步確診患者的病情, 同時(shí)還能進(jìn)一步測(cè)定冠狀動(dòng)脈的狹窄情況。

冠心病；血漿循環(huán)；微小RNA；關(guān)聯(lián)

microRNA能抑制蛋白質(zhì)的翻譯過程, 或是直接將蛋白質(zhì)降解, 并在轉(zhuǎn)錄后臺(tái)中對(duì)蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。血漿中的microRNA由于穩(wěn)定性較高, 比較容易測(cè)得, 同時(shí)血漿中的microRNA具有一定的組織特異性, 有望成為一種新型的生物學(xué)標(biāo)志物, 對(duì)心血管疾病、肌肉損傷、腫瘤及炎癥的診斷具有一定的輔助作用?，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)［1］, microRNA尤其是內(nèi)皮特異性microRNA對(duì)于血管內(nèi)皮損傷修復(fù)調(diào)控以及血管新生調(diào)控具有重要的作用。本文為探究microRNA在冠心病患者中的表達(dá)及意義, 對(duì)120例冠心病患者進(jìn)行了調(diào)查, 旨在為今后的microRNA研究提供有力的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2014年1月～2014年8月收治的經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢查確診的冠心病患者60例為觀察組, 另選取同期行體檢的60例健康人群作為對(duì)照組。對(duì)照組男32例, 女28例；年齡24～52歲, 平均年齡(29.2±7.8)歲；經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢查排除冠心病。觀察組男35例, 女25例, 年齡23～54歲, 平均年齡(30.4±7.5)歲。排除先天性心臟病患者, 急性心包炎患者, 急性心肌炎患者, 結(jié)締組織疾病患者,肺動(dòng)脈栓塞患者, 自身免疫性疾病患者, 嚴(yán)重肝腎功能不全患者, 惡性腫瘤患者, 急性感染患者, 腦血管疾病患者。觀察組患者行冠狀動(dòng)脈造影檢查結(jié)果提示：前降支、回旋支、左主干、右冠狀動(dòng)脈及其分支的血管直徑縮?。?0%。兩組研究對(duì)象在性別、年齡等一般資料方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 microRNA檢測(cè)方法 所有研究對(duì)象均于檢測(cè)前禁食8 h, 并于清晨入院抽取6 ml外周血, 將其置入EDTA抗凝管內(nèi),并離心10 min, 將上清液取1 ml繼續(xù)離心10 min, 并將500 μl上清液取出置入新的離心管內(nèi)。按照Trizol LS試劑的操作說明對(duì)各個(gè)樣本的RNA進(jìn)行抽取, 并將其置于-80℃內(nèi)進(jìn)行集中保存, 行逆轉(zhuǎn)錄。使用TaqManmicroRNA Reverse Transcription kit(taqmanmicrorna反轉(zhuǎn)錄試劑盒)并按照操作說明在各個(gè)樣本中提取20 ng總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。將TaqMan microRNAssays：miRNA-130a(000454)、miRNA-126(002228)、miRNA-222(002276)作為引物, 將RNU6B(001093)作為內(nèi)參。在各個(gè)樣本中提取2 μl轉(zhuǎn)錄物, 按照TaqMan universal Master MixⅡ, no UNG(國(guó)產(chǎn)TaqMan探針配套的熒光定量預(yù)

混液)操作說明使用ABI 7500 PCR儀器對(duì)TaqMan探針繼續(xù)擰定量熒光聚合鏈反應(yīng)以及PCR雙重特異引物擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222的Ct值, 同時(shí)將RNU6B作為內(nèi)參。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本次研究數(shù)據(jù)采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組研究對(duì)象miRNA檢測(cè)結(jié)果比較, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組對(duì)象miRNA檢測(cè)結(jié)果比較( x-±s)

3 討論

動(dòng)脈粥樣硬化屬于慢性進(jìn)行性的炎性疾病, 造成動(dòng)脈粥樣硬化的始動(dòng)因素是血管內(nèi)皮損傷, 所以目前臨床對(duì)血管內(nèi)皮損傷修復(fù)的關(guān)聯(lián)基因進(jìn)行了大量的研究。既往研究指出［2］,內(nèi)皮特異性microRNA在整個(gè)血管新生的過程中起到重要的調(diào)控作用, 并分為促進(jìn)血管新生以及抑制血管新生兩種類型。大量研究結(jié)果指出miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222在人體的內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)高度表達(dá), 同時(shí)具有明顯的特異性［2-4］。國(guó)外學(xué)者［5］發(fā)現(xiàn)miRNA-126在炎癥因子的刺激下能抑制血管細(xì)胞粘附因子-1的表達(dá), 同時(shí)能調(diào)節(jié)炎癥因子的遷移, 促進(jìn)毛細(xì)血管形成網(wǎng)絡(luò)并使其存活。

有研究指出［6］miRNA-126在心肌再灌注或是缺血情況下誘導(dǎo)的心生血管中具有明顯的促進(jìn)作用。miRNA-130a能靶向作用在HOXA5與GAX上, 由此達(dá)到促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移與增殖的目的。miRNA-221或miRNA-222還能靶向作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞上的c-kit與eNOS, 以此達(dá)到改變血管通透性的目的, 同時(shí)還能抑制細(xì)胞遷移與增殖。降低人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞上的miRNA-221或miRNA-222表達(dá), 能有效降低細(xì)胞的增殖。

本次研究發(fā)現(xiàn), 冠心病患者外周血中的miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222表達(dá)水平與健康成年人表達(dá)水平有明顯差異, 同時(shí)其表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈的狹窄程度具有一定的關(guān)系。所以通過檢測(cè)冠心病患者外周血中的miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222表達(dá)水平能間接的反映出患者冠狀動(dòng)脈的狹窄程度以及內(nèi)皮損傷的嚴(yán)重性。讓microRNA有望成為新型的心血管疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)以及靶向治療的生物學(xué)標(biāo)志物。

［1］ 聶曉敏, 蘇利霄, 周雅婧, 等.冠心病患者血漿微小RNA-221和微小RNA-222與側(cè)支循環(huán)形成的相關(guān)性研究.中國(guó)醫(yī)藥, 2014, 9(6):778-782.

［2］ 張佳菊, 王莉娜, 馮毅, 等.微小RNA-1靶基因多態(tài)性與早發(fā)冠心病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)研究.中華心血管病雜志, 2012, 40(5): 386-391.

［3］ 李凝詩(shī), 楊麗霞, 郭瑞威, 等.冠心病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中microRNA-155及146a的表達(dá)水平.西南國(guó)防醫(yī)藥, 2014, 24(4):380-382.

［4］ 石曉鳳, 韋小未, 朱建兵, 等.microRNA 與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的相關(guān)性研究.中華臨床醫(yī)師雜志(電子版), 2013, 11(24):11140-11143.

［5］ Marraccini P, Bianchi M, Bottoni A, et al.Prevalence of thyroid dysfunction and effect of contrast medium on thyroid metabolism in cardiac patients undergoing coronary angiography.Acta Radiologica, 2013, 54(1):42-47.

［6］ 周娜, 梁軍, 騰飛, 等.糖代謝異常對(duì)冠心病相關(guān)血清微小RNA表達(dá)的影響.中華老年心腦血管病雜志, 2013, 15(1):14-17.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.10.033

2014-09-05］

510180 廣州市第一人民醫(yī)院心血管內(nèi)科