4714例無(wú)償獻(xiàn)血者A1抗原檢測(cè)分析

靖春旭 趙菲 姚瑞英 沈延平 任虹

4714例無(wú)償獻(xiàn)血者A1抗原檢測(cè)分析

靖春旭 趙菲 姚瑞英 沈延平 任虹

目的 調(diào)查南陽(yáng)市A型、AB型(ABO正反定型相符)無(wú)償獻(xiàn)血者紅細(xì)胞A1抗原陽(yáng)性率和陽(yáng)性凝集強(qiáng)度。方法 采用96孔微孔板法對(duì)3530例A型、1184例AB型(ABO正反定型相符)無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行A1抗原篩查；對(duì)檢出的弱陽(yáng)性和陰性標(biāo)本使用試管法進(jìn)行確認(rèn)。結(jié).3530例A型與1184例AB型無(wú)償獻(xiàn)血者A1抗原陽(yáng)性率分別為99.12%(3499/3530).97.72%(1157/1184)。A型無(wú)償獻(xiàn)血者A1抗原陽(yáng)性率高于AB型無(wú)償獻(xiàn)血者(χ2=14.35, P＜0.01)。A1抗原在A型無(wú)償獻(xiàn)血者中的凝集強(qiáng)度大于AB型(χ2=428.92, P＜0.01)。結(jié)論 ABO正反定型相符的A型和AB型中存在一定低比例的ABO亞型, 有必要對(duì)這一部分獻(xiàn)血者和用血者進(jìn)行A1抗原的檢測(cè), 以保證輸血安全, 提高輸血療效。

A1抗原；ABO血型；正反定型相符；凝集強(qiáng)度

ABO血型系統(tǒng)是由奧地利病理學(xué)家、免疫學(xué)家Karl Landsteiner 在1900年通過“棋盤法”發(fā)現(xiàn)的, 由于ABO血型抗原的強(qiáng)度是所有人類血型系統(tǒng)中免疫原性最強(qiáng)的, 所以ABO血型系統(tǒng)對(duì)臨床輸血至關(guān)重要。E.von鄧格恩和L.希爾斯費(fèi)爾德在1911年最先注意到有些A抗原較正常紅細(xì)胞表達(dá)弱, 從而認(rèn)識(shí)到A亞型的存在, Landsteiner和Levine將兩種主要的亞型命名為A1和A2［1］。A2(A2B)亞型的特點(diǎn)是紅細(xì)胞表面只有A(AB)抗原, 缺乏A1抗原；ABO正反定型是抗-A強(qiáng)凝集, 大部分血清中無(wú)抗-A1, 僅少數(shù)血清中存在少量抗-A1。因此大部分A2和A2B亞型在常規(guī)血型檢測(cè)中因其ABO正反定型相符而被漏檢, 本次研究對(duì)本地區(qū)A型和AB型(ABO正反定型相符)無(wú)償獻(xiàn)血者行A1抗原檢測(cè), 分析A1抗原的陽(yáng)性率和凝集強(qiáng)度, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 來源南陽(yáng)市2014年6～10月3530例A型和1184例AB型(ABO正反定型相符)無(wú)償獻(xiàn)血者共4714例。所有標(biāo)本采用EDTA-K2抗凝。

1.2 儀器與試劑 Metis全自動(dòng)血庫(kù)系統(tǒng)(深圳愛康)、96孔微孔板(深圳愛康)、TD5B平板離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘智)、KA-2200型離心機(jī)(日本久保田)、震蕩儀(深圳愛康)、加樣槍(Eppendor.10～100 μl)、一次性玻璃試管(泰州科健)、一次性塑料滴管。人ABO反定型用紅細(xì)胞(北京金豪)、 抗A抗B血型定型試劑(單克隆抗體)、抗-A1凝集素、抗-H(均為上海血液生物醫(yī)藥有限公司)、人源抗A抗B試劑、成人ABO紅細(xì)胞(均為實(shí)驗(yàn)室自制)、生理鹽水(河南華利制藥公司)。儀器設(shè)備經(jīng)過校驗(yàn)合格, 按照實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行日常使用和維護(hù)。所有試劑均經(jīng)過批批檢, 在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法

1.3.1 A1抗原篩查 采用96孔微孔板法, 操作步驟如下：①挑選檢測(cè)結(jié)果為A型和AB型的標(biāo)本(ABO正反定型相符),使用ABO正反定型檢測(cè)時(shí)使用的預(yù)稀釋板(9 μl壓積紅細(xì)胞+300 μl生理鹽水)孔內(nèi)的紅細(xì)胞懸液。②取另一干凈96孔微孔板, 每孔加30 μl 抗-A1凝集素和30 μl 紅細(xì)胞懸液；同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照(30 μl 抗-A1凝集素和30 μl O型紅細(xì)胞懸液)和陽(yáng)性對(duì)照(30 μl 抗-A1凝集素和30 μl A1細(xì)胞懸液)。輕輕振蕩混勻。③使用平板離心機(jī)2000 rpm 離心60 s。④振蕩先1550 rpm 振蕩25 s；再430 rpm 振蕩100 s。⑤觀察結(jié)果,將強(qiáng)凝集的標(biāo)本凝集強(qiáng)度記錄為3+～4+；將弱凝集和陰性標(biāo)本使用試管法重新檢測(cè), 記錄試驗(yàn)結(jié)果。

1.3.2 A1抗原確認(rèn) 采用試管法, 操作步驟如下：①挑選微板法弱凝集和陰性的標(biāo)本, 使用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次,配制成3%～5%的紅細(xì)胞懸液備用。②取1支干凈試管, 分別加入1滴抗-A1凝集素和1滴紅細(xì)胞懸液, 同時(shí)設(shè)置陰性和陽(yáng)性對(duì)照。輕輕混勻。③3400 rpm 離心15 s。④觀察并記錄試驗(yàn)結(jié)果。

1.3.3 ABO血型試管法確認(rèn) 采用經(jīng)典試管法［2］對(duì)檢出的A1抗原陰性的標(biāo)本進(jìn)行ABO正反定型確認(rèn)及H抗原檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. .2014年6～10月對(duì)4714例檢測(cè)結(jié)果為A型和AB型(正反相符)的標(biāo)本進(jìn)行A1抗原檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果見表1, 表2。

表 A1抗原檢測(cè)結(jié)果分析(n, %)

表 A1抗原陽(yáng)性標(biāo)本凝集強(qiáng)度分布情況(n)

2.2 對(duì)31例A1抗原陰性A型的標(biāo)本進(jìn)行ABO血型試管法確認(rèn), 其A抗原凝集強(qiáng)度均為4+, H抗原凝集強(qiáng)度為2+～3+。對(duì)27例A1抗原陰性ABO血型檢測(cè)結(jié)果為AB型的標(biāo)本進(jìn)行ABO血型試管法確認(rèn), 其A抗原和B抗原凝集強(qiáng)度均為4+, H抗原凝集強(qiáng)度為2+～3+。

3 討論

從表1可見, A型和AB型的紅細(xì)胞上均存在一定低比例的A1抗原不表達(dá)或低表達(dá), 故A抗原凝集強(qiáng)度正常且ABO正反定型相符的標(biāo)本不能排除A亞型(或A亞型B)。本次調(diào)查3530例A型和1184例AB型無(wú)償獻(xiàn)血者,其A1抗原陽(yáng)性的比例分別為99.12%(3499/3530)和97.72% (1157/1184), A型紅細(xì)胞上A1抗原的陽(yáng)性率高于AB型紅細(xì)胞(χ2=14.35, P＜0.01), 提示本地區(qū)A抗原凝集強(qiáng)度正常且ABO正反定型相符的AB型無(wú)償獻(xiàn)血者的亞型的比例高于A型無(wú)償獻(xiàn)血者。

本次研究所使用的抗-A1凝集素是雙花扁豆外源性凝集素, 在合適的濃度下, 這種外源性凝集素可以非常容易的將A1和A1B細(xì)胞與A2和A2B細(xì)胞區(qū)分開。Rochant等［2］研究發(fā)現(xiàn), 多數(shù)A2個(gè)體的紅細(xì)胞與熒光標(biāo)記的雙花扁豆凝集素反應(yīng)表現(xiàn)很弱的熒光, 但少數(shù)細(xì)胞表現(xiàn)很強(qiáng)的熒光；相反地, 絕大多數(shù)A1個(gè)體的紅細(xì)胞表現(xiàn)很強(qiáng)的熒光信號(hào), 僅10%的細(xì)胞表現(xiàn)弱的熒光信號(hào), 這可以解釋當(dāng)使用抗-A1凝集素時(shí)出現(xiàn)的混合視野外觀。本次研究也發(fā)現(xiàn), 當(dāng)抗-A1檢測(cè)進(jìn)行多次離心時(shí), 出現(xiàn)了混合視野外觀, 因此, 咨詢?cè)噭S家后, 采用試管法立即離心結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判斷, 將不凝集的標(biāo)本判定為A2或A2B, 將凝集強(qiáng)度介于±～2+的標(biāo)本判定為Aint或AintB。

從表2可以看出, A2B亞型無(wú)償獻(xiàn)血者中A1抗原凝集強(qiáng)度明顯弱于A2亞型(P＜0.01)。研究顯示, A1和A2來源的N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶特異性相同, 對(duì)低分子質(zhì)量的受體具有相同的異質(zhì)性, 均合成同樣的A決定簇［3］。A基因和B基因編碼不同的糖基轉(zhuǎn)移酶, 催化不同的糖基轉(zhuǎn)移酶到H抗原末端半乳糖基上, 形成相應(yīng)的A或B抗原, 兩種不同的糖基轉(zhuǎn)移酶競(jìng)爭(zhēng)共同的受體物質(zhì), 由于等位基因的競(jìng)爭(zhēng)作用, 因此A1抗原在A2B亞型紅細(xì)胞表面的表達(dá)明顯弱于A2亞型［4］。

本次研究無(wú)償獻(xiàn)血者A型和AB型(ABO正反相符)中A2亞型和A2B亞型, 顯示人群中存在一定低比例的A2和A2B亞型, 因其常規(guī)檢測(cè)時(shí)ABO正反定型一致常被漏檢。研究表明, A1和A2抗原決定簇不僅存數(shù)量上的差異, 同樣還存在質(zhì)的區(qū)別［5,6］。在A2和A2B亞型作為供血者時(shí), 只要其血清中不含有抗-A1抗體, 作為正常A型和AB型發(fā)往臨床輸注給A型和AB型患者, 不會(huì)引起溶血性輸血反應(yīng)；而A2和A2B亞型患者被漏檢, 作為正常A型和AB型輸注A型和AB型紅細(xì)胞時(shí), 供者紅細(xì)胞A1抗原可刺激患者產(chǎn)生免疫反應(yīng), 產(chǎn)生針對(duì)A2抗原缺失位點(diǎn)的抗-A1抗體, 當(dāng)患者再次輸注A型或AB型紅細(xì)胞時(shí), 就可能發(fā)生嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)［7］。但是關(guān)于A2和A2B亞型患者輸注A型和AB型紅細(xì)胞產(chǎn)生抗-A1抗體的幾率, 輸注紅細(xì)胞次數(shù)與抗-A1抗體產(chǎn)生頻率的關(guān)系等, 本次研究由于時(shí)間和條件的限制還沒有臨床數(shù)據(jù), 有待于進(jìn)一步研究。

［1］ 杰夫·丹尼爾. 人類血型. 朱自嚴(yán), 譯. 北京: 科學(xué)出版社.2007.8-79.

［2］ Rochant H, Tonthat H, Henri A, et al. Abnormal distribution of erythrocytes A1 antigens in preleukemia as demonstrated by an immunonuorescence techniclue. Blood Cells.1976(2):237-255.

［3］ Watkins WM. Biochemistry and Genetics of the ABO, Lewis, and P blood group systems. Adv Hum Genet.1980(10):1-136.

［4］ Gutzwiller F, Dedeine F, Kaiser W, et al. Correlation between the green-island phenotype and Wolbachia infections during the evolutionary diversification of Gracillariidae leaf-mining moths. Ecol Evol.2015.5(18):4049-4062.

［5］ Monfort M, Honoré P, Gothot A, et al. Simultaneous passenger lymphocyte syndrome and multiple alloimmunization against donor’s blood group antigens after liver transplantation. Vox Sang.2015.109(1):86-90.

［6］ Eksteen M, Tiller H, Averina M, et al. Characterization of a human platelet antigen-1a-specific monoclonal antibody derived from a B cell from a woman alloimmunized in pregnancy. J Immunol.2015.194(12):5751-5760.

［7］ 種靖慧, 閆莉娜, 李彤彤, 等. A201亞型患者輸注A型血致配血不合1例.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床.2013.10(10):1337-1338.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.35.045

2015-08-19］

南陽(yáng)市2014年科技攻關(guān)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：2014GG029)

473000 河南南陽(yáng)市中心血站