公共場所公共用品的微生物檢測分析

祝艷云，曹萍

吉林省敦化市疾病預(yù)防控制中心，吉林敦化 133700

公共用品的微生物檢驗(yàn)對公共場所的衛(wèi)生監(jiān)督和傳染病的預(yù)防至關(guān)重要，能夠提供安全可靠的科學(xué)依據(jù)，有利于各種規(guī)章和制度的制訂和實(shí)施[1]。

1資料與方法

1.1一般資料

2015年對該市4類公共場所：洗浴場所、美容院、旅店、美發(fā)理發(fā)共435戶、946份公共衛(wèi)生用品進(jìn)行了微生物檢測。

1.1.1 采樣種類及檢測項(xiàng)目 毛巾、浴袍、床單（細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群、、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌）、拖鞋（真菌和酵母菌）。

1.2采樣方法

1.2.1一般要求 隨機(jī)抽取清洗消毒后準(zhǔn)備使用的公共用品用具，無菌操作，使用滅菌干燥棉拭子，于10 mL滅菌生理鹽水內(nèi)浸潤（吸取約1 mL溶液）后，在用品用具的適當(dāng)部位來回均勻涂抹進(jìn)行樣品采集，再用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分，將棉拭子放入剩余的9 mL生理鹽水內(nèi)，4 h內(nèi)送檢。

1.2.2采樣部位及采樣面積 ①在毛巾、枕巾、浴巾對折后兩面的中央5 cm×5 cm面積范圍內(nèi)分別均勻涂抹5次，每25 cm2采樣面積為1份樣品，每件用品共采集2份樣品。

②在床單、被單的上下兩部即與頸部、腳部接觸部位5 cm×5 cm（25）面積范圍內(nèi)分別均勻涂抹5次，每25 cm2采樣面積為1份樣品，每件用品共采集2份樣品。

③睡衣、睡褲隨機(jī)選擇 2個(gè) 5 cm×5 cm（25 cm2）面積范圍內(nèi)均勻涂抹5次，每25 cm2采樣面積為1份樣品，每件用品共采集2份樣品。

④在每只鞋的鞋內(nèi)與腳趾接觸處5 cm×5 cm面積范圍內(nèi)均勻涂抹5次，1雙鞋為1份樣品，采樣總面積為50 cm2。

1.2.3試驗(yàn)器材及培養(yǎng)基 高壓蒸汽滅菌器、干熱滅菌箱、恒溫培養(yǎng)箱：（36±1）℃、無菌（試管、平皿、刻度吸管、剪刀）等。生理鹽水、營養(yǎng)瓊脂、乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)液、伊紅美蘭瓊脂、乳糖發(fā)酵管、胰酪胨大豆肉湯、氯化鈉肉湯（75 g/L）、BairdParker平板、血瓊脂培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、沙氏瓊脂培養(yǎng)基、葡萄糖肉浸液肉湯、匹克氏肉湯。

1.2.4 檢驗(yàn)步驟 （1）樣品稀釋：將放有采樣后棉拭子的試管充分震蕩，此液為1∶10的樣品勻液。用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1∶10樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注入盛有9 mL生理鹽水稀釋液的無菌試管中，震搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混勻，制成1:100的樣品勻液。按同法制備10倍系列稀釋樣品勻液，每遞增稀釋1次，換用1次1 mL無菌吸管或吸頭。

（2）細(xì)菌總數(shù)的檢驗(yàn)∶根據(jù)對樣品污染狀況的估計(jì)，選擇1～2個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，每個(gè)稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液于2個(gè)無菌平皿內(nèi)，同時(shí)分別取1 mL稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿作空白對照。將15～20 mL、冷卻置45～50℃的營養(yǎng)瓊脂傾注平皿，混合均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿，置（36±1）℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)（48±2） h。

（3）菌落計(jì)數(shù)：選取菌落數(shù)在 30～300 CFU 之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)；若所有稀釋度的菌落數(shù)均大于300 CFU，按稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；若所有稀釋度的菌落總數(shù)均小于30 CFU，按稀釋度最低的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長，以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所有稀釋度的菌落數(shù)均不在30～300 CFU之間，以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。

（4）大腸菌群的檢測:①乳糖膽鹽發(fā)酵試驗(yàn)：將檢樣倒入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)液中，置（36±1）℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)（24±2）h，觀察是否產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，如不產(chǎn)酸產(chǎn)氣為大腸菌群陰性，若變黃和氣體產(chǎn)生，要進(jìn)行分離培養(yǎng)和證實(shí)試驗(yàn)。

②分離培養(yǎng)：自產(chǎn)酸產(chǎn)氣發(fā)酵管中取一接種環(huán)培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)接伊紅美蘭瓊脂平板上，置（36±1）℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24 h，取出，觀察菌落形態(tài)，革蘭氏染色鏡檢。（深紫黑色，具有金屬光澤的菌落;紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落;淡紫紅色、中心較深的菌落）。

③證實(shí)試驗(yàn)∶在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落接種乳糖發(fā)酵管，置（36±1）℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)（24±2） h。

（5）金黃色葡萄球菌的檢測：①將1 mL樣品放入9 mL氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，（36±1）℃培養(yǎng)24 h。從培養(yǎng)液中取1～2接種環(huán)劃線接種在，Baird Parker平板或用血瓊脂培養(yǎng)基，于（36±1）℃培養(yǎng) 24 h，在Baird Parker平板培養(yǎng)基上菌落為圓形、金黃色、凸起、表面光滑、周圍有溶血環(huán)。挑取典型菌落作涂片染色鏡檢，為革蘭氏陽性，成葡萄狀排列。

②血漿凝固酶試驗(yàn)∶吸取1∶4新鮮血漿0.5 mL放入滅菌小試管中，再加入待檢菌24 h肉湯培養(yǎng)物0.5 mL?；靹?，放（36±1）℃溫箱或水浴中，每30 min觀察1次，24 h之內(nèi)如呈現(xiàn)凝塊即為陽性。同時(shí)以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養(yǎng)物及肉湯培養(yǎng)基各0.5 mL，分別加入滅菌小試管與1∶4血漿0.5 mL混勻，作為對照。

③報(bào)告：凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長，經(jīng)染色鏡檢，證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，血漿凝固酶試驗(yàn)陽性，可報(bào)告檢出金黃色葡萄球菌。

（6）溶血性鏈球菌的檢測：①取1 mL液體檢樣，加入9 mL葡萄糖肉浸液肉湯，或直接劃線接種于血平板，如檢樣污染嚴(yán)重，同時(shí)按上述量接種匹克氏肉湯，經(jīng)（36±1）℃培養(yǎng) 24 h，接種血平板，置（36±1）℃培養(yǎng) 24 h，挑起有溶血圓形的細(xì)小菌落，在血平板上分純，然后觀察溶血情況及革蘭氏染色。鏈的長短常與細(xì)菌的種類及生長環(huán)境有關(guān)；液體培養(yǎng)中易呈長鏈；固體培養(yǎng)基中常呈短鏈，不形成芽孢，無鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)。血平板上該菌為灰白色，半透明或不透明。

表2 公共用品的檢出情況

②報(bào)告：在血平板上為灰白色菌落，半透明或不透明，表面光滑有乳頭，鏡檢為革蘭氏陽性無芽孢球菌，圓形或卵圓形，呈鏈狀排列，菌落周圍有溶血環(huán)，可報(bào)告為樣品中檢出溶血性鏈球菌。

（7）真菌和酵母菌的檢測：①用滅菌吸管吸取1:10稀釋液2 mL，分別注入到2個(gè)滅菌平皿內(nèi)，每皿1 mL。另取1 mL注入9 mL滅菌鹽水管中，換1支1 mL滅菌吸管吹吸5次，此液為1:100稀釋液。按上述操作順序作10倍遞增稀釋液，每稀釋1次，換1支1 mL滅菌吸管，根據(jù)樣品的污染情況，選擇3個(gè)合適的稀釋度。將溶化并冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基注入平皿內(nèi)，凝固后，倒置于25～28℃溫箱中，3 d后開始觀察，共培養(yǎng)觀察1周。

②菌落計(jì)數(shù)：通常選擇菌落數(shù)在5～50 CFU之間的平皿進(jìn)行計(jì)數(shù)，同稀釋度的兩個(gè)平皿的菌落平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為每毫升檢樣中所含菌落數(shù)。若兩個(gè)稀釋度的菌落數(shù)皆在規(guī)定范圍之間或3個(gè)稀釋度皆不在此范圍，按菌落總數(shù)方法計(jì)數(shù)。

2結(jié)果

該市公共場所的公共衛(wèi)生用品的合格率為91%，致病菌檢出率較低，真菌和酵母菌的檢出率略高為8%。大型公共場所的合格率相對較高[2]。

3討論

通過該次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該市公共場所的公共衛(wèi)生用品的合格率為91%，致病菌檢出率較低，真菌和酵母菌的檢出率略高為8%。大型公共場所的合格率相對較高，與大型公共場所的消毒意識(shí)強(qiáng)、基本上能按規(guī)定做到一客一換一消有關(guān)。小型浴池和小型理發(fā)店的合格率略低，與這些場所服務(wù)員流動(dòng)大、缺乏消毒意識(shí)有關(guān)。為此，建議衛(wèi)生監(jiān)督部門，要以公共用品用具的清洗消毒為重點(diǎn)，特別是小型浴池拖鞋的清洗消毒，進(jìn)行經(jīng)常性的衛(wèi)生監(jiān)督，定期進(jìn)行公共用品的微生物檢測，督促經(jīng)營部門完善消毒設(shè)施建立健全消毒制度，指導(dǎo)消毒人員掌握簡便易行正確的消毒方法，確保消毒質(zhì)量和效果，保證衛(wèi)生質(zhì)量符合國家要求[3]。同時(shí)，完善微生物檢驗(yàn)室的設(shè)施，提高檢驗(yàn)人員的技術(shù)水平，保證檢驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性、準(zhǔn)確性。

表1 該市公共場所的公共衛(wèi)生用品的合格情況

[1]魏紅霞，穆永娟，元旭旻，等.新鄉(xiāng)市公共場所微生物檢測結(jié)果分析[J].中國消毒學(xué)雜志,2014,31(7):264-265.

[2]竇彩紅.公共場所公用物品監(jiān)測分析 [J].中國當(dāng)代醫(yī)藥,2014(6):131-133.

[3]祁硯平,沈一鳴.孝感市2008-2009年醫(yī)療衛(wèi)生單位消毒效果監(jiān)測結(jié)果分析[J].公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué),2010(5):107-108.